авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 10 |

«Министерство здравоохранения Российской Федерации ГБОУ ВПО “УРАЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ” МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ...»

-- [ Страница 4 ] --

(контроль) albicans, S. epidermidis, albicans, S. epidermidis, epidermidis, epidermidis, S. saprophyticus, S. saprophyticus, S. saprophyticus, S. saprophyticus, P. vulgaris P. vulgaris P. vulgaris P. vulgaris Примечание:

- 1) Здесь и далее «Полное подавление роста» - угнетение роста тест-культуры с зоной подавления роста 35 мм и более.

2) * - достоверные (р0,05) по W-критерию Вилкоксона различия в сравнении с контролем «0 (исходная) контроль».

Таблица 5 – Оценка жизнеспособности В. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-АЗ в составе эфтидерма (M±m, n=6) Концентрация Концентрация клеток после хранения, кл.см- В. subtilis В В. subtilis В-2335 L. plantarum 8Р-АЗ 2335 и L.

plantarum 8Р-АЗ 0 (исходная) 0 (исходная) 1 месяц 1 месяц в геле, Контроль контроль количество доз (2,8+0,2) * 106 (2,6+0,4) * 106 (5,9+0,4) *106 (5,6+0,2) * (5,4+0,4) * 106 (5,2+0,3) * 106 (1,4+0,6) * 107 (1,3+0,1) * (1,3+0,2) * 108 (1,3+0,2) * 108 (3,2+0,2) * 108 (2,9+0,1) * 10 (2,7+0,5) * 108 (2,6+0,2) * 108 (6,4+0,4) * 108 (6,2+0,8) * Биокомпонент (3,1+0,3) * 106 (3,0+0,7) * 106 (6,2+0,2) * 106 (6,0+0,4) * (контроль) Примечание:

- во всех изучаемых случаях при сравнении данных по хранению (на 1 месяц) бактериальных культур достоверных (р0,05) различий по W-критерию Вилкоксона в сравнении с контролем «0 (исходная) контроль» не установлено.

Таблица 6 – Оценка антагонистической активности В. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-АЗ в составе эфтидерма (M±m, n=6) Концентрация Зоны угнетения роста тест-культур в процессе хранения, мм В. subtilis В 2335 и L.

0 (исходная) 0,5 месяца 1 месяц 1,5 месяца plantarum 8Р-АЗ контроль в геле, количество доз 1 2 3 4 S. aureus – 32,6±2,2 S. aureus – 34,2±2,0 S. aureus – 33,1±1,9 S. aureus – 33,4±2, Sal. typhimurium – Sal. typhimurium – Sal. typhimurium – Sal. typhimurium – 21,3±1, 22,8±1,9 23,6±1,8 22,8±1, Sh. sonnei – 13,9±1, Sh. sonnei – 12,4±1,1 Sh. sonnei – 14,3±1,7 Sh. sonnei – 12,5±1, C. albicans – 34,5±2, 1 C. albicans – 32,9±2,1 C. albicans – 32,8±2,2 C. albicans – 34,0±1, S. epidermidis –20,3±1, S. epidermidis – 19,2±1,6 S. saprophyticus- 19,6±1,5 S. epidermidis –18,5±1,6 S. epidermidis –19,4±1, S. saprophyticus- 18,4±1,7 S. saprophyticus- 18,9±1,6 S. saprophyticus- 19,7±1, P. vulgaris – 14,4±1, P. vulgaris – 14,1±1,5 P. vulgaris – 13,0±1,2 P. vulgaris – 15,2±1, Продолжение таблицы 1 2 3 4 Полное подавление Полное подавление Полное подавление Полное подавление роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal.



typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, C. albicans, S. C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, epidermidis, S. S. saprophyticus, P. S. saprophyticus, P. S. epidermidis, S.

saprophyticus, P. vulgaris vulgaris vulgaris saprophyticus, P. vulgaris Полное подавление Полное подавление Полное подавление Полное подавление роста: S. aureus, Sal.

роста: S. aureus, Sal.

роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal.

typhimurium, Sh.

typhimurium, Sh.

typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, sonnei, C. albicans, S.

5 sonnei, C. albicans, S.

C. albicans, S. C. albicans, S.

epidermidis, S.

epidermidis, S.

epidermidis, S. epidermidis, S.

saprophyticus, P.

saprophyticus, P.

saprophyticus, P. vulgaris saprophyticus, P. vulgaris vulgaris vulgaris Окончание таблицы 1 2 3 4 Полное подавление Полное подавление Полное подавление Полное подавление роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal.

typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, C. albicans, S. C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S.

epidermidis, S. S. saprophyticus, P. S. saprophyticus, P. epidermidis, S.

saprophyticus, P. vulgaris vulgaris vulgaris saprophyticus, P. vulgaris Полное подавление Полное подавление Полное подавление Полное подавление роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal.

Биокомпонент typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, (контроль) C. albicans, S. C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S.

epidermidis, S. S. saprophyticus, P. S. saprophyticus, P. epidermidis, S.

saprophyticus, P. vulgaris vulgaris vulgaris saprophyticus, P. vulgaris Примечание:

- * - достоверные (р0,05) по W-критерию Вилкоксона различия в сравнении с контролем «0 (исходная) контроль».

Таблица 7 – Оценка жизнеспособности В. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-АЗ в составе КТГГ (M±m, n=6) Концентрация Концентрация клеток после хранения, кл.см- В. subtilis В В. subtilis В-2335 L. plantarum 8Р-АЗ 2335 и L.

plantarum 8Р-АЗ 0 (исходная) 0 (исходная) 1 месяц 1 месяц в геле, Контроль контроль количество доз (2,8+0,2) * 106 (2,5+0,4) * 106 (6,0+0,4) *106 (5,6+0,3) * (5,4+0,4) * 106 (5,3+0,5) * 106 (1,4+0,6) * 107 (1,1+0,6) * (1,3+0,2) * 108 (1,4+0,3) * 108 (3,2+0,2) * 108 (2,9+0,1) * 10 (2,7+0,5) * 108 (2,6+0,2) * 108 (6,5+0,4) * 108 (6,3+0,8) * Биокомпонент (3,1+0,3) * 106 (3,0+0,7) * 106 (6,2+0,2) * 106 (6,0+0,4) * (контроль) Примечание:

- во всех изучаемых случаях при сравнении данных по хранению (на 1 месяц) бактериальных культур достоверных (р0,05) различий по W-критерию Вилкоксона в сравнении с контролем «0 (исходная) контроль» не установлено.





Таблица 8 – Оценка антагонистической активности В. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-АЗ в составе КТГГ (M±m, n=6) Концентрация В. Зоны угнетения роста тест-культур в процессе хранения, мм subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р- 0 (исходная) 0,5 месяца 1 месяц 1,5 месяца контроль АЗ в геле, количество доз 1 2 3 4 S. aureus – 32,8±2, S. aureus – 33,5±2,3 S. aureus – 34,0±2,1 Sal. typhimurium – S. aureus – 32,9±2, Sal. typhimurium – Sal. typhimurium – 23,2±1, Sal. typhimurium – 23,5±1, 23,9±1,8 22,3±1,9 Sh. sonnei – 12,6±1, Sh. sonnei – 12,7±1, Sh. sonnei – 13,2±1,3 Sh. sonnei – 12,8±1,2 C. albicans – 33,5±2, 1 C. albicans – 34,2±2, C. albicans – 33,1±2,2 C. albicans – 33,7±2,3 S. epidermidis – S. epidermidis – 19,3±1, S. epidermidis – 20,6±1,9 S. epidermidis –20,2±1,8 19,1±1, S. saprophyticus – 18,4±1, S. saprophyticus – S. saprophyticus –19,0±1,8S. saprophyticus –18,2±1, P. vulgaris – 14,6±1, 19,7±1, P. vulgaris – 15,3±1,6 P. vulgaris – 15,7±1, P. vulgaris – 14,9±1, Продолжение таблицы 1 2 3 4 Полное подавление Полное подавление Полное подавление Полное подавление роста: S.aureus, Sal.

роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal.

typhimurium, Sh.

typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, 2 sonnei, C. albicans, S.

C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S. C. albicans, S.

epidermidis, S.

S. saprophyticus, P. epidermidis, S. epidermidis, S.

saprophyticus, P.

vulgaris saprophyticus, P. vulgaris saprophyticus, P. vulgaris vulgaris Полное подавление Полное подавление Полное подавление Полное подавление роста: S. aureus, Sal.

роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal.

typhimurium, Sh.

typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, 5 sonnei, C. albicans, S.

C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S. C. albicans, S.

epidermidis, S.

S. saprophyticus, P. epidermidis, S. epidermidis, S.

saprophyticus, vulgaris saprophyticus, P. vulgaris saprophyticus, P. vulgaris P. vulgaris Окончание таблицы 1 2 3 4 Полное подавление Полное подавление Полное подавление Полное подавление роста: S. aureus, Sal.

роста: S. aureus, Sal.

роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal.

typhimurium, Sh.

typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, 10 sonnei, C. albicans, S.

C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S. C. albicans, S.

epidermidis, S.

S. saprophyticus, P. epidermidis, S. epidermidis, S.

saprophyticus, vulgaris saprophyticus, P. vulgaris saprophyticus, P. vulgaris P. vulgaris Полное подавление Полное подавление Полное подавление Полное подавление роста: S.aureus, Sal.

роста: S.aureus, Sal.

роста: S. aureus, Sal. роста: S. aureus, Sal.

typhimurium, Sh.

Биокомпонент typhimurium, Sh. sonnei typhimurium, Sh. sonnei, typhimurium, Sh. sonnei, sonnei, C. albicans, S.

(контроль) C. albicans, S. epidermidis, C. albicans, S. C. albicans, S.

epidermidis, S.

S. saprophyticus, P. epidermidis, S. epidermidis, S.

saprophyticus, vulgaris saprophyticus, P. vulgaris saprophyticus, P. vulgaris P. vulgaris Примечание:

- * - достоверные (р0,05) по W-критерию Вилкоксона различия в сравнении с контролем «0 (исходная) контроль».

В ходе исследований (in vitro) определили также, что в гелевой форме препарата оптимальная концентрация и Bacillus subtilis В-2335 и Lactobacillus plantarum 8Р-А3 должна быть на порядок выше, чем рекомендуемая для внутреннего употребления.

Таким образом, результаты данного раздела работы свидетельствуют о целесообразности создания для наружного применения биогеля бацилакта на основе КТГГ, эфтидерма, тизоля и необходимости проведения доклинических исследований в эксперименте на лабораторных животных.

Изучение биологических свойств и сохраняемости 2.2.1.

микроорганизмов в составе экспериментальных образцов препаратов Изучение комплекса биологических свойств (морфологических, культуральных, биохимических) бактериальных культур B. subtilis В-2335 и L.

plantarum 8Р-А3 в составе исследуемых композиций проводили на различные сроки наблюдения с целью установления соответствия полученных результатов с паспортными данными на эти штаммы.

В результате проведения комплекса микробиологических исследований было показано, что культурально-морфологические свойства штаммов Bacillus subtilis В-2335 и Lactobacillus plantarum 8Р-А3 в составе исследуемых препаратов соответствовали паспортным данным.

Известно, что показателями, характеризующими физиологическую активность микроорганизмов, является способность бактериальных культур к усвоению тех или иных субстратов. Результаты изучения биохимических свойств (ферментация углеводов, гидролиз мочевины, крахмала, разжижение желатины, лецитиназная активность, реакция с метиленовым синим и рост в присутствии 6-7 % NaCl) B. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-А3 в составе исследуемых препаратов представлены в таблице 9.

Как видно из приведенных в таблице 9 данных, биохимические свойства микроорганизмов в составе исследуемых препаратов полностью соответствуют паспортным данным. В частности, изучаемые виды пробиотических микроорганизмов ферментируют углеводы, частично гидролизуют крахмал, разжижают желатин, растут в присутствии 6-7 % хлорида натрия и обладают положительной реакцией с метиленовым синим. В целом, это позволяет характеризовать их как бактериальные культуры, обладающие высокой биохимической активностью.

Таблица 9 – Биохимические свойства B. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р А3 (n=3) Биохимические характеристики исследуемых экспериментальных образцов препарата бацилакта Паспортные Бацилакт Бацилакт Бацилакт характеристики (тизоль) Биохимичес- (эфтидерм) (КТГГ) исходных штаммов кие L. L.

показатели L. L. B.

B. subtilis B. subtilis B. subtilis planta- planta plantarum plantarum subtilis rum rum 1 2 3 4 5 6 7 8 Ферментация:

+ - + - + - + ксилозы арабинозы + - + - + - + глюкозы + + + + + + + + маннита + - + - + - + рамнозы - + - + - + - + сахарозы - + - + - + - + галактозы - + - + - + - + сорбита - + - + - + - + мальтозы - + - + - + - + лактозы - + - + - + - + салицина - + - + - + - + Гидролиз:

- - - - - - - мочевины крахмала + - + - + - + желатина + - + - + - + лецитина - - - - - - - Редукция метиленового + - + - + - + синего Окончание таблицы 1 2 3 4 5 6 7 8 Рост в присутствии + - + - + - + 7% NaCl Рост в присутствии - + - + - + - + 6% NaCl Восстановлен ие - + - + - + - + лакмусового молока Примечание:

- 1) “+” – наличие признака;

“-”- отсутствие признака;

2) достоверных (р0,05) различий по U-критерию Манна-Уитни по отношению к группе «Паспортные характеристики исходных штаммов» не установлено.

Важным, с точки зрения практического использования, является изучение физико-химических свойств вновь создаваемых образцов препаратов.

Физико-химические свойства экспериментальных образцов препаратов изучали непосредственно после добавления биокомпонента (B. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-А3) в состав гелевой композиции по следующим показателям:

внешний вид, однородность, водородный показатель, коллоидная стабильность, термостабильность. В качестве контроля использовали гелевые композиции без добавления биокомпонентов. Результаты исследований представлены в таблице 10.

В результате проведенных исследований установлено, что основные физико-химические свойства исследуемых препаратов незначительно отличаются от таковых для гелевых основ без добавления биокомпонентов.

Препараты не расслаиваются и устойчивы к неоднократным циклам замораживания-оттаивания, что значительно расширяет возможности их использования при различных условиях хранения.

Изучали также влияние различных сроков хранения и температурных условий на жизнеспособность бактериальных клеток B. subtilis В-2335 и L.

plantarum 8Р-А3 в составе препаратов.

Таблица 10 – Физико-химические свойства исследуемых препаратов Препарат Бацилакт Бацилакт Бацилакт Свойство Тизоль Эфтидерм КТГГ (тизоль) (эфтидерм) (КТГГ) Непрозрач- Непрозрач- Непрозрач- Непрозрач Непрозрач- Непроз ная ная ная ная рачная -ная гелеобраз- гелеобраз- гелеобраз- гелеобраз- Гелеобраз- гелеобраз ная масса с ная масса с ная масса с ная масса ная масса -ная Внешний вид сероватым сероватым сероватым бежевого светло- масса или оттенком оттенком цвета бежевого светло желтоватым цвета бежевого оттенком цвета Однород- Однород- Однород- Однород- Однород- Однород Однородность ный ный ный ный ный ный Водородный 5,9±0,1 6,0±0,1 6,1±0,1 5,8±0,1 6,1±0,1 6,2±0, показатель, ед. pH Коллоидная стабильность:

при центрифугировании Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен при замораживании оттаивании Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен при нагревании Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен Стабилен В таблице 11 представлены данные о сохраняемости пробиотических бактерий, входящих в состав гелевых форм через три месяца наблюдения при температуре (18±2)°С.

Приведенные в таблице 11 данные свидетельствуют о том, что форма биопрепарата на жизнеспособность бактерий не оказывает отрицательного влияния. Достоверные различия во всех наблюдаемых случаях не установлены.

Концентрация клеток в препаратах в целом соответствовала расчетным данным.

Таблица 11 – Жизнеспособность B. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-А3 в составе экспериментальных препаратов (M±m, n=10) Экспериментальный Содержание КОЕ, 106 см- препарат B. subtilis В-2335 L. plantarum 8Р-А Бацилакт 1,4±0,3 1,1±0, (тизоль) Бацилакт 1,2±0,2 1,1±0, (эфтидерм) Бацилакт 1,3±0,2 0,9±0, (КТГГ) Биокомпонент 1,2±0,2 0,8±0, (контроль) Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA) с использованием F-критерия Фишера по сравнению с контролем «Биокомпонент». Во всех изучаемых случаях при сравнении данных по хранению бактериальных культур с контролем достоверных различий не установлено.

Для практического использования препарата важное значение имела оценка сохраняемости его основных биологических свойств при оптимальной температуре хранения. В наших исследованиях сохраняемость испытуемых препаратов в перспективе изучали на различные сроки наблюдения, начиная с момента приготовления и далее через 3, 6 и 12 месяцев при температуре 4±2°С.

Результаты исследований представлены в таблице 12. Как видно из данных таблицы 12 хранение в течение 3, 6 и 12 месяцев при температуре 4±2°С не оказало существенного отрицательного влияния на жизнеспособность бацилл.

Концентрация клеток В-2335 в исследуемых препаратах B. subtilis соответствовала расчетным данным и практически не отличалась от исходной концентрации.

Таблица 12 – Влияние продолжительности хранения на величину КОЕ B. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-А3 в составе образцов экспериментальных препаратов (M±m, n=8) Продолжит Содержание КОЕ, 106 см- ельность B. subtilis В-2335 L. plantarum 8Р-А Образцы препаратов хранения, Среда Гаузе 2 Капустный агар Среда MRS мес.

Бацилакт (тизоль) 1,6±0,3 1,1±0,2 1,2±0, Бацилакт (эфтидерм) 1,4±0,4 1,1±0,3 1,2±0, Бацилакт (КТГГ) 1,6±0,4 1,2±0,3 1,4±0, Биокомпонент (контроль) 1,4±0,3 1,2±0,2 1,1±0, Бацилакт (тизоль) 1,5±0,3 0,7±0,2 0,9±0, Бацилакт (эфтидерм) 1,3±0,3 0,7±0,2 0,7±0, Бацилакт (КТГГ) 1,6±0,3 0,8±0,2 0,9±0, Биокомпонент (контроль) 1,3±0,2 0,7±0,2 0,8±0, Бацилакт (тизоль) 1,3±0,3 0,8±0,1 0,8±0, Бацилакт (эфтидерм) 1,3±0,3 0,8±0,1 0,8±0, Бацилакт (КТГГ) 1,4±0,3 0,7±0,2 0,8±0, Биокомпонент (контроль) 1,2±0,2 0,8±0,2 0,9±0, Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA) с использованием F-критерия Фишера в сравнении с контролем «Биокомпонент». Во всех изучаемых случаях при сравнении данных по хранению бактериальных культур с контролем достоверных различий не установлено.

Концентрация L. plantarum 8P-A3 в течение всего срока наблюдения незначительно уменьшилась, по сравнению с контролем. Лучшие результаты по сохраняемости наблюдаются для экспериментального образца на основе кремнийтитанорганического глицерогидрогеля и КТГГ), где (бацилакт концентрация L. plantarum 8P-A3 и B. subtilis В-2335 через 12 месяцев хранения составила 0,8±0,2 и 1,4±0,3·106 КОЕ·см-3 соответственно, которая в целом незначительно отличается от контроля (0,9±0,3 и 1,2±0,2·106 КОЕ·см-3).

Таким образом, результаты проведенных экспериментальных исследований показывают, что содержание (по концентрации пробиотических клеток бацилл и лактобацилл) биокомпонентов, входящих в состав исследуемых образцов, на различные сроки хранения в пределах 12 месяцев практически не различаются, что значительно расширяет возможности их использования при производстве различных готовых лекарственных форм препаратов для наружного применения.

2.2.1.2. Доклиническая оценка безопасности и активности мягких лекарственных форм Доклинические исследования гелевых лекарственных форм бацилакта являются неотъемлемым и важным этапом, определяющим объективные показатели действия (влияния) экспериментальных композиций на лабораторных животных. Проводимые in vivo исследования на животных определяет и возможность экстраполяции полученных результатов на человека.

В первую очередь нами была проведена доклиническая оценка безопасности и активности мягких лекарственных форм экспериментальных образцов препарата бацилакт.

На первом этапе доклинических испытаний изучали острую и хроническую токсичность.

Острую токсичность определяли на двух видах лабораторных животных (белые мыши и белые крысы) при различных путях введения: подкожном и местном (накожном). Препараты применяли однократно в концентрации – микробных клеток, содержащихся в объеме 0,5 см3, и в концентрации, в 10 раз ее превышающей – 108 микробных клеток. В качестве контроля служили животные, в отношении которых аналогично использовали только гелевые композиции без биокомпонента. Вводимая или наносимая доза составляла 0, см3. Продолжительность наблюдения за животными после введения препаратов составляла 1 сутки. В процессе наблюдения ежедневно фиксировали следующие показатели: общее состояние животных, двигательную активность, интенсивность потребления корма и воды, изменение массы тела, а также регистрировали количество выживших или погибших животных. В таблице представлены данные изучения острой токсичности новых лекарственных форм препарата бацилакт для белых мышей.

Таблица 13 – Результаты изучения острой токсичности гелевых форм препарата бацилакт для белых мышей Концентрация Количество животных Способ клеток, Препарат введения Взято Заболело Погибло Выжило КОЕ 1 2 3 4 5 6 1 10 0 0 Подкожный Бацилакт 10 10 0 0 (тизоль) 1 10 0 0 Накожный 10 10 0 0 1 10 0 0 Подкожный 10 10 0 0 Бацилакт 1 10 0 0 (эфтидерм) Накожный 10 10 0 0 1 10 0 0 Подкожный 10 10 0 0 Бацилакт 1 10 0 0 (КТГГ) Накожный 10 10 0 0 1 10 0 0 Подкожный 10 10 0 0 Биокомпонент (контроль) 1 10 0 0 Накожный 10 10 0 0 0 10 0 0 Подкожный 0 10 0 0 Тизоль 0 10 0 0 Накожный 0 10 0 0 Окончание таблицы 1 2 3 4 5 6 0 10 0 0 Подкожный 0 10 0 0 Эфтидерм 0 10 0 0 Накожный 0 10 0 0 0 10 0 0 Подкожный 0 10 0 0 КТГГ 0 10 0 0 Накожный 0 10 0 0 0 10 0 0 Контроль Подкожный 0 10 0 0 (стерильное вазелиновое 0 10 0 0 масло) Накожный 0 10 0 0 В результате изучения острой токсичности экспериментальных образцов пробиотических препаратов установлено, что лабораторные животные во всех группах оставались живыми и признаков интоксикации у них не выявлено в течение всего срока наблюдения. В отношении других контролируемых показателей, то они у животных подопытных групп и контрольных не различались.

Согласно полученным данным, можно отметить, что испытуемые препараты как и при используемой дозе, равной 107 микробных клеток на одно животное (рекомендуемая разовая лечебная доза), так и в случае увеличения дозы на один порядок (108 КОЕ), при исследуемых путях введения не оказывают токсического действия на экспериментальных животных (белые мыши).

Аналогичные результаты были получены при испытании данных препаратов и на белых крысах. В этих исследованиях величины доз также составляли 107 и 108 клеток. Гибель экспериментальных животных ни в одном из изучаемых случаев зафиксировано не было.

Полученные результаты по изучению острой токсичности явились основанием для последующих исследований по оценке влияния испытуемых препаратов на лабораторных животных при их длительном применении (хроническая токсичность).

Хроническую токсичность препаратов изучали на белых мышах при ежедневном накожном нанесении биокомпонента в концентрации 107 и микробных клеток в объеме 0,5 см3 на животное (подопытная группа) и гелевых композиций без биокомпонентов в том же объеме (контрольная группа) в течение 30 суток. Наблюдение за животными проводили в течение всего периода нанесения испытуемых образцов препаратов и последующих суток, после прекращения аппликаций. Регистрировали потребление корма и воды, изменение массы и температуры тела, состояние волосяного покрова и слизистых оболочек, поведенческие реакции, а также выживаемость (гибель) животных. Результаты изучения хронической токсичности испытуемых препаратов представлены в таблице 14.

Таблица 14 – Результаты изучения хронической токсичности гелевых форм препарата бацилакт для белых мышей Концентрация Количество животных Способ клеток, Препарат введения Взято Заболело Погибло Выжило КОЕ 1 2 3 4 5 6 1 10 0 0 Подкожный 10 10 0 0 Бацилакт (тизоль) 1 10 0 0 Накожный 10 10 0 0 1 10 0 0 Подкожный 10 10 0 0 Бацилакт (эфтидерм) 1 10 0 0 Накожный 10 10 0 0 Окончание таблицы 1 2 3 4 5 6 1 10 0 0 Подкожный 10 10 0 0 Бацилакт (КТГГ) 1 10 0 0 Накожный 10 10 0 0 1 10 0 0 Подкожный 10 10 0 0 Биокомпонент (контроль) 1 10 0 0 Накожный 10 10 0 0 0 10 0 0 Подкожный 0 10 0 0 Тизоль 0 10 0 0 Накожный 0 10 0 0 0 10 0 0 Подкожный 0 10 0 0 Эфтидерм 0 10 0 0 Накожный 0 10 0 0 0 10 0 0 Подкожный 0 10 0 0 КТГГ 0 10 0 0 Накожный 0 10 0 0 0 10 0 0 Подкожный Контроль 0 10 0 0 (стерильное вазелиновое 0 10 0 0 масло) Накожный 0 10 0 0 В результате изучения хронической токсичности во всех изучаемых случаях установлено отсутствие заболевания или гибели лабораторных животных.

При наблюдении за поведением белых мышей после ежедневных аппликаций исследуемых экспериментальных образцов препаратов не отмечали каких-либо отрицательных изменений. Внешний вид животных подопытной группы, состояние шерстного покрова, интенсивность потребления корма и воды не имели отличий от животных контрольной группы. Динамика изменения массы тела и температуры подопытных белых мышей за время наблюдения также практически не различались. В месте нанесения препаратов у всех групп экспериментальных животных отсутствовали гиперемия, отечность, шелушение, усиление капиллярного рисунка кожных покровов.

Хроническую токсичность новых форм пробиотических препаратов изучали также и на белых крысах. Как и в предыдущем случае ни одно из лабораторных животных не заболело и не погибло. Величины используемых доз, вводимых каждому животному были выше и составляли 108 и 109 КОЕ.

Как на 1-е, так и на 14-е сутки макроскопическая картина внутренних органов подопытных животных была сравнима с органами контрольных животных. Не удалось также при микроскопическом (гистологическом) исследовании определить наличие на все сроки наблюдения каких-либо патологоанатомических изменений.

Так, при вскрытии подопытных животных (белые крысы) в головном мозге патоморфологических изменений не установлено. Структура белого вещества не была изменена. Микроциркуляторной патологии сосудов не выявлено, цитоархитектоника слоев нервных клеток различных участков мозга оставалась без изменений (рисунки 1,2). При микроскопическом изучении сердца патоморфологических изменений также не было обнаружено. Волокна сердечной мышечной ткани без изменений (рисунки 3,4). На срезах легочной ткани паренхима органа не изменена. Эпителий бронхов без дистрофических проявлений (рисунки 5,6). В структуре печеночной ткани балочная цитоархитектоника была сохранена. Дистрофических изменений гепатоцитов не выявляли. Ядра эпителиоцитов и клеток Купфера находились в пределах нормы. Лимфогистиоцитарные инфильтраты отсутствовали (рисунки 7,8).

В структуре почечной ткани также патологические изменения отсутствовали. Эпителий почечных канальцев и клубочков был без изменений (рисунки 9,10).

Иммунокомпетентные клетки селезенки оставались без реактивных изменений. Белая и красная пульпа различных участков селезенки находилась в состоянии нормы. Сосудистые изменения не обнаруживались (рисунки 11, 12).

Таким образом, изучение острой и хронической токсичности исследуемых препаратов свидетельствовало об отсутствии у них токсического действия на лабораторных животных. Следует особенно подчеркнуть тот факт, что эти препараты не вызывали никаких признаков патологического воздействия на организм подопытных животных при различных способах введения и в концентрациях, значительно превышающих рекомендуемые для их клинического применения.

Рисунок 1 – Кора головного мозга белой крысы, лобная доля (микрофотография, ув. 100).

Рисунок 2 – Кора головного мозга белой крысы, затылочная доля (микрофотография, ув. 100).

Рисунок 3 – Сердечная мышечная ткань белой крысы (микрофотография, ув. 100).

Рисунок 4 – Сердечная мышечная ткань белой крысы (микрофотография, ув. 400).

Рисунок 5 – Срез ткани легкого белой крысы (микрофотография, ув. 200).

Рисунок 6 – Срез ткани легкого белой крысы (микрофотография, ув. 100).

Рисунок 7 – Срез ткани печени белой крысы (микрофотография, ув. 100).

Рисунок 8 – Срез ткани печени белой крысы (микрофотография, ув. 900).

Рисунок 9 – Срез ткани почки белой крысы (микрофотография, ув. 100).

Рисунок 10 – Срез ткани почки белой крысы (микрофотография, ув. 900).

Рисунок 11 – Срез ткани селезенки белой крысы (микрофотография, ув.

100).

Рисунок 12 – Срез ткани селезенки белой крысы (микрофотография, ув.

100).

Результаты гистологических исследований тканей и органов подопытных животных позволяют сделать заключение о том, что при изучении острой и хронической токсичности всех исследуемых экспериментальных образцов препаратов при различных путях введения патологических изменений не выявлено.

Изучение местно-раздражающего действия проводили на кроликах. Было сформировано 4 группы животных, по 5 кроликов в каждой. Подопытным животным на подготовленный участок кожи однократно наносили исследуемый препарат, содержащий микробные клетки в количестве 109 КОЕ, а контрольным - гелевую композицию без биокомпонента в том же объеме.

Оценку местного действия осуществляли на основании данных визуального осмотра, проводимого после ежедневного (раз в сутки) нанесения препарата в течение 14 суток и последующего наблюдения в течение 7 суток, а также по результатам гистологических исследований.

После окончания курса аппликаций через 7 суток животных умерщвляли и проводили макроскопические и гистологические исследования внутренних органов.

Данные ежедневного осмотра свидетельствовали о том, что исследуемые препараты не оказывали местно-раздражающего действия при накожном нанесении. Так, на кожных покровах в местах их нанесения у всех групп подопытных животных отсутствовали отечность, гиперемия, шелушение.

Макроскопическая картина внутренних органов, как на первые, так и на седьмые сутки после последней аппликации свидетельствовала об отсутствии признаков какой-либо патологии. Сравнительное изучение гистологических срезов кожи у подопытных и контрольных животных не выявило у них различий на все сроки наблюдения.

Таким образом, было показано, что испытуемые препараты не обладали местно-раздражающим действием при их накожном применении.

Для выявления возможных сенсибилизирующих свойств экспериментальных образцов препаратов были проведены исследования на морских свинках обоего пола. Экспериментальным животным с целью формирования состояния сенсибилизации наносили испытуемые препараты, концентрация микробных клеток которых составляла 109 микробных клеток в объеме 0,5 см3. Для контрольных животных использовали гелевые композиции без биокомпонентов. Препараты наносили равномерным слоем на весь участок аппликации в течение двух недель по 5 раз в неделю. В течение всего срока формирования состояния сенсибилизации какие-либо реакции со стороны кожных покровов отсутствовали.

Первое тестирование проводили после 10 аппликаций, при этом внешне выраженных аллергических реакций выявлено не было. В связи с этим исследования были продолжены до 20 аппликаций. По окончании курса аппликаций аллергической реакции кожных покровов у морских свинок во всех группах также обнаружено не было. Отсутствовали изменения и в поведенческих реакциях, аппетите и температуре тела.

Таким образом, на основании выполненных исследований установлено, что все испытуемые препараты сенсибилизирующего эффекта при кратковременных и длительных накожных аппликациях не вызывали.

Известно, что конъюнктивальная проба является чувствительным тестом и позволяет выявлять не выраженный сенсибилизирующий эффект у животных, особенно в случае наличия отрицательных кожных тестов.

Предварительную сенсибилизацию животных осуществляли методом накожных аппликаций изучаемых образцов препаратов, содержащих микробных клеток в объеме 0,5 см3 в течение двух недель. Контрольным животным наносили гелевые композицию без биокомпонентов в том же объеме. Оценку конъюнктивальной пробы проводили на морских свинках обоего пола. Реакцию учитывали через 15 мин (немедленная реакция) и через 24-48 ч. В наших исследованиях не было выявлено каких-либо характерных реакций (покраснения слезного протока, склеры и конъюнктивы) со стороны слизистых оболочек глаза во всех группах животных (морских свинок) на вводимые препараты как через 15 мин, так и через 24-48 ч, что свидетельствовало об отсутствии у испытуемых препаратов сенсибилизирующих свойств.

Исследования по оценке кожно-резорбтивного действия изучаемых препаратов проводили на белых крысах. Было сформировано 4 группы животных по 10 белых крыс в группе. Экспериментальные гелевые пробиотические препараты содержали в 1 грамме 109 микробных клеток.

Продолжительность эксперимента составляла 7 суток.

На 7 сутки наблюдения по 5 экспериментальных животных из каждой группы умерщвляли и проводили макроскопическую и микроскопическую оценку состояния внутренних органов, а также гистологическое исследование кожной поверхности хвоста. Гистологические препараты готовили после фиксации исследуемого материала и заливки в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Как на первые, так и на седьмые сутки после окончания нанесения изучаемых препаратов макроскопическая картина внутренних органов подопытных животных не отличалась от таковой у контрольных животных.

Микроскопически патоморфологических изменений в печени, селезенке, сердце, головном мозге, почках не выявлено. На срезе ткани кожи в области нанесения экспериментальных образцов препаратов в сравнении с контрольной группой животных, патоморфологических изменений также не обнаружено (рисунок 13).

Таким образом, результаты, полученные в данной серии экспериментов, позволяют утверждать, что испытуемые гелевые образцы препарата бацилакт не оказывают неблагоприятного влияния на лабораторных животных в условиях как кратковременного, так и длительного их применения.

Экспериментальные образцы бацилакта вне зависимости от вида транскутанных проводников не обладали местно-раздражающим и кожно резорбтивным действиями. Не удалось выявить и сенсибилизирующие эффекты.

Рисунок 13 – Срез поверхности кожи белой крысы в области нанесения препарата, описание в тексте (микрофотография, ув. 400).

Кроме того, перед началом аппликации и после 5-часовой экспозиции в первые сутки, а также на 7 сутки после завершения аппликации изучали ориентировочно - исследовательские реакции у подопытных и контрольных групп животных по методике «открытое поле». Анализировали поведенческие реакции у белых крыс: горизонтальное перемещение (число пересеченных квадратов), вертикальное перемещение (число вставаний на задние лапки), процесс обследования «нор» (число заглядываний в лунки, расположенные в центре квадратов), процесс чистки - груминг (количество раз). Указанные реакции регистрировали при нахождении животных в “открытом поле” в течение 5 мин. Результаты исследования представлены в таблице 15.

Таблица 15 – Показатели ориентировочно-исследовательской реакции белых крыс в «открытом поле» при изучении кожно-резорбтивного действия гелевых форм препарата Бацилакт (M±m, n=12) Показатели ориентировочно-исследовательской реакции Группа Образцы животных 1 Чистка, Двигательная Вертикальное Обследование препарата (по сроку количество раз активность перемещение “нор” наблюдения) А 129,4 ±2,7* 5,1 ±2,2 8,9±1,4 21,9 ±2, Бацилакт Б 139,8 ±2,6* 5,0 ±2,9 8,0±1,4 21,3 ±1, (тизоль) В 135,6±4,4 5,5 ±1,7 6,3±1,6 20,3±0, А 146,0 ±1,3* 4,7± 2,0 9,4±1,5 24,2 ±2, Бацилакт Б 158,2 ±1,9* 6,3 ±2,5 8,9±1,3 25,6±2,4* (эфтидерм) В 133,4±4,8 5,0 ±1,8 7,6±1,5 25,7±1,1* А 146,2 ±1,3* 5,6 ±2,8 9,3±1,6 22,9 ±1, Бацилакт Б 156,0 ±1,4* 6,1±1,9 8,8±1,5 26,3 ±3,0* (КТГГ) В 135,2±3,9 6,0±1,7 8,2±1,7 24,2±2,3* А Физиологичес- 141,0 ±1,1 4,9 ±1,8 8,9±2,6 20,1 ±2, кий раствор Б 147,8 ±2,9 5,1±3,3 8,0±2,1 20,1 ±1, (контроль) В 134,5±4,4 4,7±2,4 7,4±2,0 21,6±1, Примечание:

- 1 Группы животных по сроку наблюдения: А – на 1 сутки аппликаций;

Б – на первые сутки после завершения аппликаций;

В – на седьмые сутки после завершения аппликаций. 2 Оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с контролем «Физиологический раствор».

Из анализа полученных данных видно, что показатели ориентировочно исследовательских реакций подопытных и контрольных групп животных, при изучении кожно-резорбтивного действия испытуемых препаратов, каких-либо существенных отличий на все сроки наблюдения не имеют.

Оценку влияния испытуемых препаратов на клеточный состав периферической крови проводили на белых крысах. Определяли лейкоцитарную формулу, абсолютное содержание лейкоцитов и лимфоцитов в крови, а также скорость оседания эритроцитов и содержание гемоглобина.

Результаты исследований представлены в таблице 16.

Данные таблицы 16 свидетельствуют о том, что количество форменных элементов крови, лейкоцитарная формула, содержание гемоглобина, скорость оседания эритроцитов у подопытных животных как после аппликаций исследуемых препаратов так в течение срока, соответствующего курсу лечения (семь суток), значительно не отличались от показателей у контрольных животных. Отдельные показатели крови не выходили за пределы нормы здоровых животных.

Для оценки функционального состояния печени в сыворотке крови контрольных и подопытных животных количественно определяли концентрацию общего белка, билирубина, мочевины, активность аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы. Результаты оценки функционального состояния печени контрольных и подопытных животных представлены в таблице 17.

Установлено, что значимых изменений метаболических процессов в печени после воздействия исследуемых препаратов на экспериментальных животных не наблюдалось. Так, концентрация общего билирубина не изменялась, активность АЛТ находилась в пределах физиологической нормы, так же как и соотношение АСТ/АЛТ. Не отмечено изменения концентрации общего белка сыворотки крови, отношения альбуминов к глобулинам, а также уровня мочевины.

Таблица 16 – Влияние лечения экспериментальными образцами препаратов на состав клеток периферической крови белых крыс (M±m, n=10) Исследуемые показатели крови Группа Нейтрофилы, % Образцы животных* Лимфо- Гемо Эритроциты, Лейкоциты, Эозинофи- Моноциты, СОЭ, Палочкоя- Сегменто препаратов (по сроку циты, глобин, 1012 дм-3 109 дм-3 лы, ммч- Юн- дерные ядерные % наблюдения) г дм - % ые % Бацилакт Б 6,0±0,42 13,5±0,86 2,2±0,35 0 1,8±0,22 28,2±1,86 67,4±1,68 0,4±0,05 153±1,89 2- (тизоль) В 6,3±0,44 13,6±0,76 1,9±0,31 0 1,9±0,24 23,1±1,68 72,4±1,86 0,7±0,06 144±1,78 2- Б Бацилакт 6,5±0,36 13,0±0,81 1,9±0,29 0 3,0±0,26 19,9±1,61 74,6±1,75 0,6±0,08 151±2,6 2- В (эфтидерм) 6,2±0,34 12,4±0,73 2,2±0,37 0 2,1±0,21 24,7±1,72 70,5±1,64 0,5±0,05 145±2,2 2- Б Бацилакт 6,1±0,23 13,0±0,81 1,9±0,33 0 2,5±0,34 27,8±1,85 66,3±1,91 1,5±0,12 151±2,6 2- В (КТГГ) 5,4±0,25 12,4±0,73 2,1±0,31 0 2,1±0,23 21,3±1,62 73,5±1,73 1,0±0,09 145±2,2 2- Физиологичес- Б 5,7±0,25 12,9±0,91 2,1±0,38 0 2,2±0,28 25,6±1,82 69,5±2,13 0,6±0,07 151±2,6 2- кий раствор В 6,2±0,24 13,1±0,63 2,2±0,34 0 1,9±0,22 23,7±1,69 71,8±2,28 0,4±0,05 145±2,2 2- (контроль) Интактные А 5,9±0,31 12,4±0,59 2,3±0,41 0 1,8±0,21 20,9±1,74 73,8±2,21 1,2±0,11 132±1,8 2- Примечание:

- Группы животных по срокам наблюдения: А – до аппликаций;

Б – на 1 сутки после завершения аппликаций;

В – на 7 сутки после завершения аппликаций.

Во всех изучаемых случаях достоверных (р0,05) по F-критерию Фишера различий в сравнении с контролем «Физиологический раствор» не установлено.

Таблица 17 – Влияние лечения экспериментальными образцами препаратов на биохимические показатели плазмы крови белых крыс (M±m, n=10) Исследуемый биохимический показатель Срок Метод Билирубин Общий АЛТ, Альбумин / Мочевина, наблюдения*, ACT, ACT/АЛТ лечения общий, белок, ЕД дм-3 ЕД дм-3 глобулин ммоль дм- сутки мкмоль дм г дм- - Б 5,2±0,6 65,9±6,1 50,1±4,9 0,76±0,06 69,9±4,9 0,72 7,9±0, Бацилакт В (тизоль) 5,5±0,5 62,1±4,8 49,2±4,1 0,79±0,08 70,8±5,3 0,74 7,6±0, Б 5,7±0,5 66,4±5,2 46,7±4,4 0,70±0,07 71,8±5,3 0,73 7,7±0, Бацилакт В (эфтидерм) 5,3±0,4 63,8±5,7 47,9±4,2 0,75±0,07 72,9±5,6 0,70 7,3±0, Б 5,6±0,5 67,5±5,5 49,6±4,3 0,73±0,08 70,7±5,9 0,67 7,8±0, Бацилакт В (КТГГ) 5,1±0,4 64,3±5,7 47,8±4,4 0,74±0,07 72,3±6,1 0,69 7,4±0, Физиологичес Б 5,0±0,4 59,6±4,8 44,3±4,1 0,74±0,07 70,8±5,2 0,74 8,1±0, кий раствор В 4,9±0,3 64,8±5,3 46,2±4,7 0,71±0,08 73,2±6,7 0,71 7,6±0, (контроль) Интактные А 5,2±0,4 63,1±5,2 45,3±4,1 0,72±0,07 69,5±5,4 0,71 7,3±0, Примечание:

- 1 Группы животных по срокам наблюдения: А – до аппликаций;

Б – на 1 сутки после завершения аппликаций;

В – на 7 сутки после завершения аппликаций.

Во всех изучаемых случаях достоверных (р0,05) по F-критерию Фишера различий в сравнении с контролем «Физиологический раствор» не установлено.

Таким образом, при изучении кожно-резорбтивного действия исследуемых препаратов установлено, что аппликации исследуемых препаратов не оказывают раздражающего действия. Не выявлено также их отрицательного резорбтивного влияния на висцеральные органы и поведенческие реакции крыс.

В целом, по результатам изучения острой и хронической токсичности исследуемых экспериментальных образцов пробиотических гелевых препаратов, можно сделать вывод об их безопасности для экспериментальных животных.

Изучение терапевтической эффективности гелевых 2.2.1.3.

пробиотических препаратов на моделях инфекционных процессов пограничных покровов тела Для изучения терапевтической эффективности образцов гелевых препаратов при инфекционных поражениях кожных покровов, вызываемых такими возбудителями как Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes и Pseudomonas aeruginosa, использовали экспериментальных животных, у которых локализованную гнойную инфекцию вызывали внутрикожным введением соответствующей культуры.

Моделирование гнойной инфекции осуществляли на белых мышах.

Суточные бактериальные культуры стафилококка, стрептококка и синегнойной палочки в виде взвеси их в физиологическом растворе вводили внутрикожно.

Лечение животных исследуемыми препаратами осуществляли один раз в сутки путем поверхностного нанесения пробиотических гелей. В качестве контроля применяли используемую в настоящее время, в медицинской практике, антибактериальную мазь – эплан [121].

В таблице 18 представлены результаты изучения терапевтической эффективности исследуемых форм препарата бацилакт при лечении гнойно некротических поражений у белых мышей, вызванных S. aureus.

Данные таблицы 18, свидетельствуют о терапевтической эффективности исследуемых препаратов при их использовании на модели локализованной стафилококковой инфекции. Так, показатель интенсивности патологического процесса в группах животных, леченных экспериментальными препаратами на основе бацилакта с тизолем, с эфтидермом, с КТГГ, составил 16,2±2,3, 17,6±1, и 17,2±0,9 ед, соответственно, в то время как в контрольной группе он был равен 20,1±0,6 ед, т.е. показатель интенсивности ГНП у животных контрольной группы существенно превышал таковой для животных опытных групп.

Немаловажным является и тот факт, что этот же показатель в группе экспериментальных животных, леченных исследуемыми препаратами, был ниже, чем в группе, где применяли эплан.

Таблица 18 – Терапевтическая эффективность гелевых форм пробиотических препаратов при лечении инфицированных ран кожи, вызванных S. aureus, у белых мышей (M±m, n=10) Срок наблюдения, сутки Показатель интенсивности № животные патологического процесса, ед.

Интенсивность поражения Образец суммарный на средний на препарата 15 каждую белую одну белую 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 мышь мышь в группе 1 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 2 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - 3 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - - 4 +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - Бацилакт 5 ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - - 16,2±2,3* (тизоль) 6 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 7 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - Продолжение таблицы 1 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 2 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 3 ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - - Бацилакт 4 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - (эфтидерм) 5 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 17,6±1,0* 6 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 7 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 8 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 1 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - ++ 2 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - + 3 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - Бацилакт ++ 4 ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - (КТГГ) + 5 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - ++ 17,2±0,9* 6 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - + 7 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - ++ 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - +++ 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - + 10 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - Окончание таблицы 1 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 2 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 3 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 4 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - Контроль 5 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 18,4±0,9* (эплан) 6 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 7 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 1 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - 2 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 3 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 4 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - Контроль 5 +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 20,1±0, (без лечения) 6 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 7 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - 10 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - Примечание: * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера в сравнении с группой «Контроль (без лечения)».

В связи со сравнительно более низкой степенью интенсивности поражения животных в подопытных группах, по сравнению с контрольной, закономерно уменьшался и срок лечения поражений, вызванных стафилококковой инфекцией. Так, в контрольной группе длительность лечения составляла в среднем 11 суток, а для групп животных, леченных экспериментальными образцами препаратов, срок лечения был значительно ниже и не превышал 9 суток, при лечении эпланом - 10 суток.

Результаты изучения влияния исследуемых препаратов на развитие гнойно-некротических поражений, вызванных внутрикожным введением белым мышам культуры стафилококка, представлены в таблице 19.

Полученные результаты свидетельствуют о положительном терапевтическом влиянии новых форм препарата бацилакт на течение стафилококковой инфекции у белых мышей. Так, интенсивность поражения в экспериментальных группах была значительно ниже, чем в контрольной группе.

Кроме того, сроки заживления и индексы поражения в группах животных, которых лечили экспериментальными образцами препаратов были также короче (на 2-3 суток) в сравнении как с группой животных, пролеченных эпланом, так и в контрольной (15 и 30% соответственно). Гибели экспериментальных животных не наблюдали.

В дальнейшем изучали влияние исследуемых препаратов на развитие гнойно-некротических изменений, вызванных внутрикожным введением бактериальной культуры синегнойной палочки и гемолитического стрептококка.

В таблице 20 представлены результаты изучения терапевтической эффективности новых гелевых форм препарата бацилакт при лечении ГНП, вызванных St. pyogenes у белых мышей.

Таблица 19 – Влияние гелевых форм препарата бацилакт на развитие гнойно-некротических поражений, вызванных S. aureus у белых мышей (M±m, n=10) Развитие гнойно- Разви некротического тие Кол-во Срок процесса, инфиль- Индекс Образцы живот- Погиб заживле количество животных трата, пораже препаратов ных, ло ния, Интенсивность кол-во ния, ед шт. сутки ГНП живот Всего ных +++ ++ + Бацилакт 512, 10 0 10 4 6 0 10 8,1±0,2* (тизоль) ±16,8* Бацилакт 524, 10 0 10 5 5 0 10 8,7±0,4* (эфтидерм) ±17,1* Бацилакт 477,6* 10 0 10 5 5 0 10 8,5±0,4* (КТГГ) ±15, Контроль 581, 10 0 10 6 4 0 10 9,9±0,3* (эплан) ±18,0* Контроль 674, 10 0 10 7 3 0 10 11,7±0, (без лечения) ±23, Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Таблица 20 – Терапевтическая эффективность гелевых форм препарата бацилакт при лечении инфицированных ран кожи вызванных St. pyogenes у белых мышей (M±m, n=10) Срок наблюдения, сутки Показатель интенсивности № животные патологического процесса, ед.

Интенсивность поражения Образец суммарный на средний на препарата 15 каждую белую одну белую 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 мышь мышь в группе 1 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 2 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - 3 +++ +++ +++ ++ ++ ++ + + - - - - - - - 4 +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - Бацилакт 5 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 16,8±2,1* (тизоль) 6 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 7 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - Продолжение таблицы 1 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 2 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 3 ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - - Бацилакт 4 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - (эфтидерм) 5 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 17,3±2,0* 6 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 7 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 8 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 9 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 1 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 2 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 3 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - Бацилакт 4 ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - - (КТГГ) 5 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 16,7±1,8* 6 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 7 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ +++ + + + - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ + + + + + - - - - - 10 +++ +++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - - Окончание таблицы 1 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 2 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 3 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 4 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - Контроль 5 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 18,9±1, (эплан) 6 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 7 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 1 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - 2 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 3 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 4 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - Контроль 5 +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 22,1±1, (без лечения) 6 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 7 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - 10 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - Примечание:

- * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера в сравнении с группой «Контроль (без лечения)».

Полученные экспериментальные результаты, свидетельствуют об эффективности исследуемых препаратов и для модели локализованной стрептококковой инфекции. Так, показатель интенсивности патологического процесса в группах животных, леченных экспериментальными препаратами на основе бацилакта (тизоля), бацилакта (эфтидерма), бацилакта (КТГГ), составил 16,8±2,1, 17,3±2,0 и 16,7±1,8 ед, соответственно, в то время как в контрольной группе он равен 22,1±1,6 ед, т.е. изучаемый показатель интенсивности у животных контрольной группы достоверно превышал таковой для животных опытных групп. Показатель интенсивности патологического процесса в группе животных, леченных исследуемыми препаратами в среднем был ниже (на 1,5 2,0 единицы), чем в группе, где применяли эплан. Отмечено уменьшение срока ликвидации ГНП в группе животных, которым наносились экспериментальные препараты в сравнении с животными, леченными препаратом сравнения.

Результаты изучения влияния исследуемых лекарственных форм гелевых пробиотических препаратов на развитие гнойно-некротических изменений, вызванных внутрикожным введением белым мышам культуры St. pyogenes, представлены в таблице 21.

Результаты, приведенные в таблице свидетельствуют о 21, положительном терапевтическом влиянии гелевых форм препарата бацилакт на течение стрептококковой инфекции у белых мышей. Так, интенсивность гнойно-некротического поражения и срок заживления в экспериментальных группах была на 3 суток ниже, чем в контрольной группе. У животных, которых лечили экспериментальными образцами препаратов, величина индекса поражения была меньше, чем у экспериментальных животных, леченных препаратом сравнения или вообще не получавших лечения (40% и 55% соответственно). Гибели экспериментальных животных не наблюдалось.

Таблица 21 – Влияние гелевых форм препарата бацилакт на развитие гнойно-некротических поражений, вызванных St. pyogenes у белых мышей (M±m, n=10) Развитие гнойно Развитие Кол-во некротического процесса, Кол-во инфиль- Срок количество животных погиб- Индекс Образец живот- трата, заживле ших пораже (M±m, n=3) препарата ных, кол-во ния, животн Интенсивность ния, ед шт. живот- сутки ых ГНП Всего ных +++ ++ + Бацилакт 445,2± 10 0 10 5 5 0 10 8,5±0,5* (тизоль) 15,8* Бацилакт 440, 10 0 10 4 6 0 10 8,2±0,5* (эфтидерм) ±15,8* Бацилакт 415, 10 0 10 4 6 0 10 8,3±0,4* (КТГГ) ±15,4* Контроль 613, 10 0 10 6 4 0 10 9,6±0,6* (эплан) ±22,9* Контроль 674, 10 0 10 7 3 0 10 11,9±0, (без лечения) ±24, Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

В таблице 22 представлены результаты изучения терапевтической эффективности гелевых пробиотических препаратов при лечении ГНП, вызванных Ps. aeruginosa у белых мышей.

Результаты, приведенные в таблице 22, также свидетельствуют об эффективности использования гелевых форм при синегнойной инфекции. Так, показатель интенсивности патологического процесса в группах животных, леченных экспериментальными препаратами на основе бацилакта с тизолем, бацилакта с эфтидермом, бацилакта с КТГГ, был ниже в среднем на 3, единицы, чем в контрольной группе. Кроме того, величина показателя интенсивности в группе экспериментальных животных, леченных исследуемыми препаратами, был меньше, чем в группе, где применяли эплан (в среднем на 1,3 единицы).

Таблица 22 – Терапевтическая эффективность гелевых форм препарата бацилакт при лечении инфицированных ран кожи вызванных Ps. aeruginosa у белых мышей (M±m, n=10) Срок наблюдения, сутки Показатель интенсивности патологического процесса, ед.

№ животные Интенсивность поражения Образец суммарный на средний на препарата 15 каждую белую одну белую 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 мышь мышь в группе 1 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 2 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 3 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 4 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - Бацилакт 5 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 19 18,5±1,6* (тизоль) 6 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - 7 +++ +++ +++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 9 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - Продолжение таблицы 1 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + + - - - - 2 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 3 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 4 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - Бацилакт 5 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 19,2±1,4* (эфтидерм) 6 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 7 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 8 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 1 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 2 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 3 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + - - - - - - 4 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - Бацилакт 5 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - - 18,1±1,6* (КТГГ) 6 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 7 +++ +++ +++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - - Окончание таблицы 1 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 2 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + + - - - 3 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + - - - - - 4 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - Контроль 5 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - - 19,9±1,2* (эплан) 6 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 7 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 8 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - - 10 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 1 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - 2 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - - 3 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - 4 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - Контроль 5 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + + - - - 22,7±1, (без лечения) 6 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 7 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 8 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - - 9 +++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + + - - - 10 +++ +++ +++ +++ ++ ++ ++ + + + + + - - - Примечание:

- * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера в сравнении с группой «Контроль (без лечения)».

Результаты изучения влияния исследуемых препаратов на основе бацилакта на развитие гнойно-некротических поражений, вызванных внутрикожным введением белым мышам возбудителя синегнойной инфекции, представлены в таблице 23.

Таблица 23 – Влияние гелевых форм препарата бацилакт на развитие гнойно-некротических поражений, вызванных Ps. aeruginosa у белых мышей (M±m, n=10) Развитие гнойно Развитие некротического процесса, Кол-во Кол-во инфиль- Срок количество животных погиб- Индекс Образец живот- трата, заживле ших пораже (M±m, n=3) препарата ных, кол-во ния, живот- Интенсивность ния, ед шт. живот- сутки ных ГНП Всего ных +++ ++ + Бацилакт 583,1± 10 0 10 6 4 0 10 10,4±0, (тизоль) 19,5* Бацилакт 602,4± 10 0 10 5 5 0 10 10,9±0, (эфтидерм) 20,2* Бацилакт 563,7± 10 0 10 6 4 0 10 10,1±0, (КТГГ) 19,4* Контроль 693,0± 10 0 10 8 2 0 10 11,3±0, (эплан) 23,7* Контроль 747,3± 10 0 10 8 2 0 10 12,8±0, (без лечения) 28, Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Результаты таблицы 23, свидетельствуют об эффективности применения гелевых форм бацилакта для лечения локализованной гнойной инфекции, вызванной Ps. aeruginosa у белых мышей. Так, интенсивность поражения и срок заживления в экспериментальных группах, где для лечения применяли изучаемые образцы препаратов была значительно ниже, чем в контрольной группе. У животных, которых лечили экспериментальными образцами препаратов, величина индекса поражения была на 20% ниже, чем у экспериментальных животных, леченных препаратом сравнения и на 30% меньше, чем у лабораторных животных в контрольной группе. Гибели экспериментальных животных не наблюдалось.

Таким образом, результаты исследований, представленные в таблицах 18 23, свидетельствуют о положительном терапевтическом эффекте исследуемых препаратов и их существенном влиянии на развитие и течение ГНП, вызванных у экспериментальных животных внутрикожным введением S. aureus, St.

pyogenes и Ps. aeruginosa. В ходе исследований отмечено значительное снижение интенсивности гнойно-некротических процессов, уменьшение индексов поражения и сокращение сроков заживления.

Биохимические исследования сыворотки крови 2.2.1.3.1.

лабораторных животных при оценке терапевтической эффективности испытуемых препаратов на моделях локализованной гнойной инфекции кожи Оценивали биохимические показатели сыворотки крови экспериментальных групп животных в условиях моделирования локализованной гнойной инфекции кожи, вызванной S. aureus. Исследовали такие показатели как:

1. Активность аспартатаминотрансферазы (АСТ), Еддм-3;

2. Активность аланинаминотрансферазы (АЛТ), Еддм-3;

3. Активность щелочной фосфатазы, Ед·дм-3;

4. Содержание общего белка, гдм-3;

5. Содержание общего билирубина, мкмольдм-3;

6. Тимоловая проба, ед. S-H;

7. Содержание мочевины в сыворотке крови, ммольдм-3;

8. Содержание альфа-амилазы в сыворотке крови, г(чдм)-3.

Забор материала для исследований (сыворотку крови) проводили на 1-е, 7-е и 14-е сутки после начала лечения.

Полученные экспериментальные данные о влиянии способов лечения на биохимические показатели сыворотки крови, при лечении инфицированных поражений кожи у экспериментальных животных представлены в таблице 24.

Как видно, в группе подопытных животных с воспроизведенной моделью локализованной гнойной инфекции кожи в сравнении с контрольными (нелеченными и интактными) группами животных, на первые сутки эксперимента отмечали повышение всех изучаемых биохимических показателей сыворотки крови на фоне снижения концентрации общего белка.

Обращает на себя внимание выраженная азотемия, обусловленная увеличением количества мочевины в сыворотке крови до величины 11,9±0, ммоль дм-3. Активность трансаминаз - АЛТ, АСТ возросла в небольшой степени. Показатель отношения АСТ/АЛТ существенно не изменялся.

Активность щелочной фосфатазы также увеличивалась до величины 120,2±0, Ед дм-3. Тимоловая проба и количественное содержание амилазы в сыворотке крови существенно не изменялись. На 7-е и 14-е сутки эксперимента биохимические показатели сыворотки крови в контрольной группе экспериментальных животных (без лечения) постепенно нормализовались до величин, полученных в группе интактных животных. На 1-е сутки после начала аппликации трех видов испытуемых гелевых препаратов наблюдали значимое повышение активности трасаминаз, в большей степени в группе подопытных животных, получавших испытуемый препарат бацилакт и КТГГ (АЛТ 72,1±5,5 Еддм-3, АСТ - 58,9±4,3 Еддм-3). В этой же группе подопытных животных следует отметить и повышение показателя отношения АСТ/АЛТ до величины 0,81±0,04.

Таблица 24 – Биохимические показатели сыворотки крови подопытных животных при моделировании локализованной гнойной инфекции кожи на 1-е, 7-е и 14-е сутки (M±m, n=8) Исследуемые биохимические показатели Срок Образец наблю- АЛТ, Щелочная Общий Билирубин Тимоловая Мочевина, Амилаза, ACT, препарата дения, Ед дм-3 Ед дм-3 АСТ/АЛТ фосфатаза, белок, общий, проба, ммоль дм-3 г (ч·дм)- сутки Ед ·дм-3 г дм-3 мкмоль дм-3 ед. S-H 1 68,5±5,3 52,1±5,0 0,76±0,05 118,6±0,4 44,3±5,5 5,5±0,4 4,6±0,4 12,6±0,5 16,6±5, Бацилакт 7 66,5±5,3 46,1±4,1 0,69±0,04 113,5±0,5 56,8±5,6 5,4±0,5 4,5±0,4 9,6±0,4 16,8±5, (тизоль) 14 63,1±5,2 45,3±4,2 0,71±0,05 107,5±0,4 69,6±5,4 5,3±0,4 4,2±0,5 7,3±0,5 16,1±5, 1 69,4±5,3 53,3±4,4 0,76±0,06 120,5±0,5 47,8±5,7 5,4±0,4 4,7±0,3 11,9±0,5 16,2±5, Бацилакт 7 64,8±5,5 46,7±4,3 0,72±0,04 113,4±0,5 57,6±5,5 5,3±0,5 4,4±0,5 9,4±0,7 16,1±5, (эфтидерм) 14 63,2±5,2 45,3±4,1 0,71±0,05 107,6±0,4 69,2±5,1 5,2±0,4 4,2±0,3 7,3±0,5 16,1±5, 1 72,1±5,5 58,9±4,3 0,81±0,04 126,7±0,4 48,3±5,6 5,3±0,5 4,3±0,5 11,1±0,5 16,3±5, Бацилакт 7 66,2±5,4 48,5±4,3 0,73±0,05 116,2±0,4 61,8±5,5 5,2±0,5 4,2±0,3 8,6±0,6 16,3±5, (КТГГ) 14 63,2±5,2 45,3±4,1 0,71±0,05 107,4±0,5 69,2±5,5 5,1±0,4 4,2±0,3 7,3±0,5 16,1±5, 1 68,3±5,5 53,3±4,3 0,78±0,04 119,5±0,5 43,6±5,4 5,2±0,5 4,5±0,2 12,5±0,4 16,4±5, Контроль 7 64,8±5,5 47,2±4,5 0,72±0,07 112,6±0,4 56,2±5,6 5,2±0,4 4,4±0,3 9,6±0,6 16,2±5, (эплан) 14 63,1±5,2 45,5±4,2 0,72±0,06 107,4±0,5 69,3±5,4 5,1±0,4 4,2±0,2 7,3±0,5 16,1±5, 1 68,9±5,2 50,6±4,2 0,73±0,05 120,2±0,4 48,4±5,7 5,4±0,4 4,7±0,3 11,9±0,4 16,3±5, Контроль 7 65,6±5,3 47,1±4,3 0,71±0,06 111,5±0,5 57,3±5,8 5,2±0,5 4,4±0,4 9,6±0,6 16,4±5, (без лечения) 14 63,1±5,2 45,5±4,1 0,72±0,07 107,4±0,5 68,6±5,6 5,1±0,4 4,2±0,2 7,3±0,5 16,1±5, Контроль - 63,1±5,2 45,3±4,1 0,72±0,07 107,5±0,5 69,5±5,4 5,1±0,4 4,2±0,3 7,3±0,6 16,1±5, (интактные) Примечание:

- во всех изучаемых случаях достоверных (р0,05) по F-критерию Фишера различий в сравнении с группой Контроль «без лечения» не установлено.

Во всех группах, без исключения, отмечали повышение активности щелочной фосфатазы, в большей степени выраженное в группе животных, получавших препарат бацилакт с КТГГ (126,7±0,4 Еддм-3). Азотемию наблюдали в группах подопытных животных, где использовали испытуемые препараты бацилакт и тизоль (12,6±0,5 ммольдм-3) и препарат сравнения эплан (12,5±0,4 ммольдм-3). В группе животных, которым назначали испытуемый препарат бацилакт с КТГГ, концентрация мочевины была наименьшей (11,1±0,5 ммольдм-3).

Гипопротеинемия в большей степени была выражена в группах подопытных животных, для лечения которых использовали препарат сравнения эплан (43,6±5,4 гдм-3), и в группе животных, где применяли препарат бацилакт (тизоль) (44,3±5,5 гдм-3). Менее выраженное снижение концентрации общего белка в сыворотке крови наблюдали у экспериментальных животных, которых лечили препаратом бацилакт с КТГГ (48,3±5,6 гдм-3), сравнимое с величиной, полученной в контрольной группе (без лечения) - 48,4±5,7 гдм-3.

На 7-е сутки, после начала лечения испытуемыми препаратами наблюдали нормализацию биохимических показателей во всех группах подопытных животных. Активность трансаминаз оставалась повышенной в группе животных, получавших препарат бацилакт с КТГГ, но показатель отношения АСТ/АЛТ снижался до нормальных величин - 0,73±0,05.

Активность щелочной фосфатазы также оставалась высокой во всех подопытных группах животных, но в большей степени в группе животных, получавших препарат бацилакт с КТГГ - 116,2±0,4 Ед ·дм-3. Гипоглобулинемия в меньшей степени была выражена в группе подопытных животных, получавших препарат бацилакт с КТГГ (61,8±5,5 гдм-3).

Повышенное содержание мочевины в сыворотке крови сохранялось во всех группах подопытных животных, леченных препаратами на основе бацилакта. В меньшей степени повышение концентрации мочевины наблюдали у животных, получавших препарат бацилакт с КТГГ - 8,6±0,6 ммольдм-3.

На 14-е сутки наблюдения изменение биохимических показателей в группах подопытных животных, получавших испытуемые препараты, было сравнимо с изменением этих же показателей в группах животных, не получавших лечение, и в контрольной группе интактных животных.

Концентрация билирубина в сыворотке крови подопытных животных не изменялась в течение всего опыта. Активность -амилазы во всех группах экспериментальных животных также соответствовала полученным показателям в контрольной группы животных.

Таким образом, исследования по оценке изменений биохимических показателей сыворотки крови при моделировании локализованной гнойной инфекции кожи выявили значимое снижение уровня общего белка и повышение концентрации мочевины во всех подопытных группах животных, что является, по-видимому, следствием подавления протеосинтетической функции печени из-за изменения процессов синтеза и ресинтеза протеинов, вследствие чего, и происходило прогрессирующее снижение общего количества белка в сосудистом русле и увеличение концентрации мочевины.

Явления гипопротеинурии и азотемии в большей степени были выражены в группе подопытных животных, получавших испытуемый препарат сравнения эплан и бацилакт (тизоль), и в меньшей степени, – в группе подопытных животных, которым назначали испытуемый препарат бацилакт с КТГГ, что говорит о более выраженной терапевтической эффективности препарата, содержащего кремнийорганический глицерогидрогель.

Также необходимо отметить значимое повышение активности трансаминаз - ACT, АЛТ, щелочной фосфатазы на 1-е сутки, с последующим их снижением и нормализацией на 7-е и 14-е сутки в группе подопытных животных, которых лечили препаратом бацилакт (КТГГ), что может говорить также о определенном гепатотропном действии испытуемого препарата и его прямом или опосредованном влиянии на метаболическую функцию печени.

2.2.1.3.2. Влияние исследуемых образцов пробиотического препарата бацилакт на некоторые факторы клеточного и гуморального иммунитета при экспериментальном моделировании кожного инфекционного процесса Клеточный (неспецифический) иммунный ответ при оценке терапевтической эффективности испытуемых препаратов у животных с инфицированной S. aureus гнойной раной кожи определяли путем исследования таких показателей как: общий анализ крови;

фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов, а также их метаболической активности в НСТ-тесте;

количество Т- и В-лимфоцитов (методом Е-розеткообразования);

количество антителообразующих клеток.

Забор крови для исследования проводили на 1-е и 7-е сутки после начала лечения инфицированных лабораторных животных экспериментальными образцами испытуемых препаратов.

В таблице представлены показатели общего анализа крови контрольных и подопытных групп животных с инфицированной гнойной раной при их лечении гелевыми препаратами.

Как видно из приведенных данных, в контрольной группе (без лечения) наблюдали двухкратное увеличение абсолютного количества лейкоцитов по сравнению с группой интактных животных. В опытных группах с применением бацилакта (тизоля), бацилакта (эфтидерма) и препарата сравнения эплана количество лейкоцитов было в среднем 1,5 раза ниже, чем в контрольной группе нелеченных лабораторных животных. У экспериментальных животных, для лечения которых применяли бацилакт с КТГГ, на начальных сроках наблюдения отмечали некоторое увеличение количества лейкоцитов по сравнению с контрольной группой (без лечения) в 1,5 раза, но к 7-м суткам количество клеток становилось практически равным во всех опытных группах.

Отмечали резкое повышение количества палочкоядерного звена нейтрофилов во всех опытных группах и в контрольной группе (без лечения).

Так, в группе, принимавшей препарат сравнения, количество нейтрофилов, по сравнению с интактной группой животных, увеличилось в 3 раза, у опытных групп, принимавших бацилакт с тизолем, бацилакт с эфтидермом и бацилакт с КТГГ - в 4 раза, а у контрольной группы (без лечения) в - 5 раз.

Однако к концу наблюдения количество нейтрофилов во всех опытных группах снижалось до уровня нейтрофилов в интактной группе животных.

Результаты определения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов, метаболической О 2 зависимой активности в НСТ-тесте, количества Т- и В-лимфоцитов и антителообразующих клеток представлены в таблице 26.

Согласно полученным результатам, фагоцитарная активность НПК в контрольной группе животных (без лечения) в 3 раза превышала активность фагоцитов у животных интактной группы на начальных сроках наблюдения и в 4 раза - на 7-сутки наблюдения.

У животных, которым наносили испытуемые препараты бацилакт и тизоль, бацилакт и эфтидерм и бацилакт и КТГГ показатели фагоцитарной активности НПК вначале существенно не отличались от контрольной группы (без лечения), но на конечном этапе наблюдения фагоцитарная активность нейтрофилов в этих группах была значительно ниже (в 1,8 раза), чем в группе нелеченных животных.

Можно отметить, что фагоцитарная активность перитонеальных макрофагов у животных контрольной группы возросла в 1,5 раза по сравнению с животными интактной группы. В подопытных группах с применением препарата бацилакт и эфтидерм и эплана фагоцитарная активность макрофагов возросла незначительно. В подопытной группе животных, где применялись препараты бацилакт и тизоль и бацилакт и КТГГ фагоцитарная активность ПМ увеличить в 2 и 1,8 раза соответственно по сравнению с контрольной группой (без лечения) и в 2,3 и 2,2 раза по сравнению с интактной группой.

Таблица 25 – Общий анализ крови экспериментальных животных с инфицированной стафилококком гнойной раной кожи при применении испытуемых образцов препаратов (M±m, n=10) Нейтрофилы Срок Гемо- Абс. кол-во Лимфо- Моно- Эозино наблю- СОЭ, Палоч- Сегменто Образец препарата глобин, лейкоцитов, циты, циты, филы, Юные, дения, мм · ч- коядерные, ядерные, г·дм x10 кл · см -3 6 - % % % % сутки % % 1 141,4±7,3 5,62±0,34* 55,3±2,1 1,02±0,05* 4,29±0,23* 0,01±0,00 19,40±1,21* 21,62±1,18* 2,29±0,12* Бацилакт (тизоль) 7 139,6±7,0 3,75±0,22* 76,8±3,9* 2,14±0,08 1,85±0,10* 0,01±0,00 2,05±0,01* 19,03±1,16* 2,05±0,11* Бацилакт 1 142,4±7,1 4,07±0,29* 54,5±2,1 1,35±0,07* 2,17±0,12* 0,01±0,00 20,71±1,22* 23,42±1,20* 3,61±0,19* (эфтидерм) 7 140,8±6,8 3,37±0,21* 71,2±3,8 1,13±0,06 2,31±0,13* 0,01±0,00 4,63±0,28* 22,19±1,19* 2,34±0,12* 1 137,2±6,8 8,02±0,58* 55,0±2,2 3,37±0,19 2,06±0,11* 0,02±0,00 21,24±1,20* 19,22±1,16* 2,60±0,13* Бацилакт (КТГГ) 7 136,9±6,9 3,38±0,19* 78,1±4,0* 1,56±0,07* 2,18±0,12* 0,02±0,00 3,65±0,19* 16,09±1,04* 2,51±0,13* 1 139,3±7,2 4,12±0,27* 54,4±2,2 1,72±0,08* 0,01±0,00 0,01±0,00 15,32±0,78* 30,52±1,63* 3,06±0,16* Контроль (эплан) 7 137,5±6,7 3,12±0,18* 75,3±3,9* 2,06±0,11 0,01±0,00 0,01±0,00 2,08±0,01* 21,74±1,18* 1,92±0,10* Контроль 1 144,6±7,2 7,02±0,39 58,2±2,4 3,21±0,15 0,03±0,00 0,01±0,00 25,64±1,30 14,98±1,09 5,18±0, (без лечения) 7 145,7±7,2 4,25±0,24 67,0±3,4 2,20±0,13 1,01±0,05 0,02±0,00 2,44±0,13 28,23±1,51 3,42±0, Контроль 1 136,8±6,6 3,05±0,16 75,9±4,1 1,48±0,08 1,27±0,06 0,01±0,00 5,32±0,29 18,13±1,05 1,28±0, (интактные) 7 134,3±6,7 2,27±0,13 79,6±4,0 1,62±0,08 1,22±0,06 0,01±0,00 2,91±0,15 17,70±1,15 1,05±0, Примечание:

- * - достоверные (р0,05) по F-критерию Фишера различия в сравнении с группой Контроль «без лечения».

Таблица 26 – Влияние методов лечения испытуемыми препаратами на функциональное состояние фагоцитов, количество лимфоцитов и антителообразующих клеток в селезенке у экспериментальных животных с инфицированной S.

aureus гнойной раной кожи (M±m, n=10) Срок Количество Т- Количество В- Количество наблю- ФА НПК, ФА ПМ, НСТ-тест, лимфоцитов (Е лимфоцитов АОК, Метод лечения (применяемые дения, опт. ед опт. ед опт. ед – РОК), (ЕАС – РОК), на 106 ЯСК образцы препаратов) сутки 106 · см-3 106 · см-3 селезенки 1 1,229±0,123 0,830±0,015* 0,233±0,019* 0,46±0,07* 0,74±0,16* 0,043±0, Бацилакт с тизолем 7 1,641±0,138* 0,493±0,011* 0,292±0,024* 0,63±0,09* 1,26±0,34* 0,124±0,098* 1 1,223±0,096 0,344±0,008* 0,187±0,002* 0,37±0,03 0,60±0,09* 0,045±0, Бацилакт с эфтидермом 7 1,608±0,204* 0,404±0,009 0,215±0,006* 0,58±0,04* 0,97±0,08* 0,156±0,067* 1 1,163±0,088 0,730±0,011* 0,359±0,011* 0,59±0,06* 1,42±0,36* 0,061±0, Бацилакт с КТГГ 7 1,582±0,153 1,389±0,113* 0,410±0,009* 0,84±0,13* 2,44±0,81* 0,199±0,096* Контроль 1 1,264±0,147 0,487±0,026 0,439±0,013* 0,52±0,08* 0,70±0,26* 0,054±0, (эплан) 7 1,736±0,221* 0,573±0,014* 0,483±0,012* 0,76±0,10* 1,39±0,59* 0,139±0,077* 1 1,245±0,104 0,452±0,010 0,136±0,004 0,32±0,03 0,44±0,09 0,049±0, Контроль (без лечения) 7 2,810±0,312 0,754±0,018 0,627±0,023 0,48±0,05 0,83±0,11 0,087±0, 1 0,665±0,019 0,610±0,021 0,568±0,017 0,23±0,01 0,25±0,03 0,046±0, Контроль (интактные) 7 0,780±0,022 0,638±0,026 0,343±0,018 0,21±0,03 0,27±0,03 0,052±0, Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

При определении НСТ-теста все исследуемые группы показали незначительные изменения фагоцитарной активности как на начальном, так и на завершающем этапе наблюдения.

Полученные данные свидетельствуют также о значительном повышении (в 2 раза) содержания Т- и В- лимфоцитов в контрольной группе животных, не получавших лечения испытуемыми препаратами, по сравнению с животными интактной группы. В сыворотке крови опытных животных в сравнении с контрольными животными (без лечения и интактными) отмечали повышение содержания Т- и В- лимфоцитов: с применением препарата бацилакт (тизоль) в 1,5 и 4,6 раза соответственно;

бацилакт (эфтидерм) - в 1,2 и 4 раза;

препарата бацилакт (КТГГ) – в 3 и 9 раз;

при применении препарата эплан – в 1,7 и 5, раза соответственно.

При оценке количества антителобразующих клеток были получены следующие данные. На 7 сутки наблюдения в контрольной группе животных (без лечения) по сравнению с животными в интактной группе наблюдалось повышение АОК – в 1,65 раза. В опытных группах, получавших препараты бацилакт и тизоль, бацилакт и эфтидерм, и препарат сравнения, содержание АОК повысилось в 1,7, 1,8 и 1,6 раза соответственно, а в группе с применением бацилакта и КТГГ – в 2,3 раза по сравнению с контрольной группой животных (без лечения).

Иммунный статус при оценке терапевтической эффективности испытуемых препаратов у животных с локализованной гнойной инфекцией кожи, вызванной S. aureus оценивали путем определения следующих количественных показателей сыворотки крови: титров иммуноглобулинов М, G A, E (мгсм-3);

титров -интерферона (пгсм-3), рецепторного антагониста интерлейкина-1 (пгсм-3);

концентрации циркулирующих иммунных комплексов (опт. ед).

Полученные данные о влиянии лечения тремя гелевыми формами бацилакта на количественные изменения показателей гуморального иммунитета при моделировании локализованной гнойной инфекции кожи у экспериментальных животных представлены в таблице 27.

Как видно из полученных данных, в группе подопытных животных, с воспроизведенной моделью локализованной гнойной инфекции кожи (контроль – без лечения), по сравнению с контрольной (интактной) группой животных, на 1-е сутки отмечается повышение уровня всех изучаемых показателей гуморального иммунитета. В большей степени возросла концентрация иммуноглобулина М (более чем в 2 раза), циркулирующих иммунных комплексов (более чем в 2 раза) и иммуноглобулина Е (в 4 раза), а также концентрация исследуемых цитокинов.

Кроме того, в подопытной группе животных с локализованной гнойной инфекцией кожи на 7-е сутки наблюдали незначительное повышение титра иммуноглобулинов А и G, -интерферона. Существенно возрастало количество рецепторного антагониста интерлейкина-1 (более чем в 3 раза), на фоне снижения концентрации в сыворотке крови иммуноглобулинов М и Е, хотя они оставались достаточно высокими, а также определяли снижение уровня ЦИК практически до нормальных величин.

На 1-е сутки после начала лечения испытуемыми образцами препаратов на основе бацилакта наблюдалось значительное повышение титра иммуноглобулина М во всех группах подопытных животных. Наиболее высокая концентрация иммуноглобулина М была определена в группе подопытных животных, получавших испытуемый препарат бацилакт и тизоль (8,68±0,24 мгсм-3), в меньшей степени титр иммуноглобулина М увеличился в группе подопытных животных, получавших препарат сравнения эплан (6,52±0,30 мгсм-3). В контрольной группе (без лечения) титр иммуноглобулина М был также достаточно высоким - 6,47±0,33 мгсм-3.

Таблица 27 – Количественные изменения показателей гуморального иммунитета и уровня цитокинов при лечении локализованной гнойной инфекции кожи животных, вызванные S. aureus (M±m, n=10) Срок Исследуемые показатели наблю Образцы РА ИЛ-1, ЦИК, Ig M, Ig E, Ig A, мгсм-3 Ig G, мгсм-3 -ИФН, пгсм- препаратов дения, мгсм-3 мгсм-3 пгсм-3 опт.ед.

сутки 1 2 3 4 5 6 7 8 1 8,68±0,24* 1,30±0,12* 14,1±1,3* 0,60±0,01* 63,2±1,4* 37,1±1,2 0,59±0,03* Бацилакт (тизоль) 7 2,83±0,29* 2,79±0,16* 21,7±1,8 0,44±0,02 33,8±1,6 8,9±0,2* 0,14±0, 1 7,86±0,36* 1,13±0,18* 13,6±1,4* 0,60±0,03 57,2±1,7* 31,3±1,6 0,62±0,03* Бацилакт (эфтидерм) 7 3,15±0,34* 2,54±0,12* 20,3±1,5* 0,46±0,02 37,3±1,4 8,0±0,3* 0,16±0, 1 7,78±0,37* 1,14±0,11* 14,9±1,6* 0,63±0,05* 56,4±1,6* 33,6±1,9 0,56±0, Бацилакт (КТГГ) 7 2,81±0,28* 2,47±0,12* 19,3±1,4 0,42±0,03 32,1±1,4* 7,8±0,4* 0,14±0, Окончание таблицы 1 2 3 4 5 6 7 8 1 6,52±0,30 1,02±0,16 14,0±1,5 0,56±0,04 47,5±1,3* 28,2±1,3 0,59±0, Контроль, эплан 7 3,07±0,22* 2,23±0,17* 18,3±1,4 0,48±0,05 34,8±1,9 6,8±0,2* 0,18±0, 1 6,47±0,33 1,09±0,19 10,3±1,4 0,60±0,03 49,2±1,5 36,1±1,8 0,71±0, Контроль (без лечения) 7 4,08±0,25 2,14±0,16 18,1±1,7 0,49±0,02 35,6±1,6 7,9±0,3 0,16±0, 1 2,99±0,31 1,06±0,09 1,02±1,5 0,29±0,03 37,9±1,4 2,2±0,1 0,15±0, Контроль (интактные) 7 3,04±0,36 0,93±0,11 10,4±1,4 0,31±0,02 30,8±1,5 2,3±0,2 0,14±0, Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 10 |
 

Похожие работы:





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.