авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 10 |

«Министерство здравоохранения Российской Федерации ГБОУ ВПО “УРАЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ” МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ...»

-- [ Страница 5 ] --

Параллельно с повышением концентрации иммуноглобулина М выявили значимое повышение уровня циркулирующих иммунных комплексов.

Увеличение содержания ЦИК происходило одновременно с увеличением титра иммуноглобулина М. Так, в группе подопытных животных, для лечения которых использовали испытуемый препарат бацилакт (эфтидерм), концентрация ЦИК достигала величины 0,62±0,03 опт. ед, что значительно больше, чем в группе животных, получавших препарат сравнения эплан 0,59±0,03 опт. ед.

При воспроизведении модели локализованной гнойной инфекции кожи на 1-е сутки после начала лечения определяли достаточно высокие титры иммуноглобулинов А и G в подопытных группах животных, получавших испытуемые препараты на основе бацилакта.

Концентрация иммуноглобулина А в группах подопытных животных, которым назначали препараты бацилакт (тизоль) и бацилакт (КТГГ), была выше, чем в остальных группах - 1,30±0,12 мгсм-3 и 1,14±0,11 мгсм-3, соответственно.

В группе животных, получавших препарат сравнения эплан, концентрация иммуноглобулина А была сравнима с концентрацией в контрольной группе подопытных животных (без лечения) - 1,02±0,16 мгсм-3 и 1,09±0,19 мгсм-3, соответственно.

Обращает на себя внимание значительное увеличение титра иммуноглобулина Е во всех подопытных группах животных, в среднем в 5 раз (до величины 0,52±0,04 мгсм-3).

Исследование количественного содержания цитокинов в сыворотке крови подопытных животных показало высокие значение титра -интерферона и рецепторного антагониста интерлейкина-1 во всех без исключения группах экспериментальных животных. Наиболее высокий показатель концентрации интерферона был определен в группе, для лечения которых применяли бацилакт (тизоль) (63,2±1,4 пгсм-3), наименее выраженное увеличение титра наблюдали в группе подопытных животных, получавших препарат сравнения эплан (47,5±1, пгсм-3). В большей степени титр рецепторного антагониста интерлейкина-1 был увеличен у животных, где применяли испытуемый препарат бацилакт (тизоль) (37,1±1,2 пгсм-3), и в меньшей степени, где использовали препарат сравнения эплан (28,2±1,3 пгсм-3).

Через 7 суток после начала аппликации испытуемых образцов препаратов наблюдали снижение титра иммуноглобулина М и циркулирующих иммунных комплексов практически до нормальных величин на фоне увеличения в сыворотке крови концентрации более аффинных иммуноглобулинов А и G во всех подопытных группах животных.



Титр иммуноглобулинов А в большей степени был повышен в группе экспериментальных животных, лечившихся препаратом бацилакт (тизоль) 2,79±0,16 мгсм-3, и в меньшей степени в группе животных, получавших препарат сравнения эплан - 2,23±0,17 мгсм-3.

Концентрация иммуноглобулина G на 7-е сутки от начала лечения была несколько выше в группах подопытных животных, получавших препараты на основе бацилакта - от 19,3±1,4 мгсм-3 до 21,7±1,8 мгсм-3, чем в группе экспериментальных животных без лечения - 18,1±1,7 мгсм-3, и где оно осуществлялось препаратом сравнения эплан - 18,3±1,4 мгсм-3.

Титр иммуноглобулина Е в группах экспериментальных животных имел тенденцию к снижению, но все равно оставался достаточно высоким. Так, в группе подопытных животных, которым назначали препарат эплан, концентрация иммуноглобулина Е была выше, чем в других группах - 0,48±0, мгсм-3, а в группе животных, получавших препарат бацилакт (эфтидерм) – несколько ниже (0,46±0,02 мгсм-3).

Титр исследуемых цитокинов в группах подопытных животных, леченных гелевыми препаратами на основе бацилакта и в группе животных, леченных эпланом, на 7-е сутки понизился, но все равно оставался сравнительно высоким.

Таким образом, исследования по оценке иммунного статуса подопытных животных с локализованной гнойной инфекцией кожи, вызванной S. аureus, лечение которых проводили испытуемыми гелевыми препаратами, позволяет сделать заключение о наличии у них выраженных иммуномодулирующих свойств. Более значимые эффекты отмечены для препаратов на основе бацилакта, содержащих тизоль и КТГГ.

Изучение терапевтической эффективности гелевых 2.2.1.4.

пробиотических препаратов на моделях резаных ран кожных покровов Экспериментальное изучение ранозаживляющих свойств экспериментальных образцов гелевых пробиотических препаратов проводили на белых мышах.

Результаты оценки терапевтической эффективности исследуемых гелевых препаратов приведены в таблице 28.

Таблица 28 – Влияние новых гелевых форм препарата бацилакт на продолжительность излечения резаных ран кожи у белых мышей (M±m, n=10) Длительность лечения по фазам раневого процесса, сутки Уменьше Образец ние срока Очищения Образова препарата излечения, Время ран от Начало ние эпителиза- излече гнойно- % грануля ния некротичес- ции ций ких тканей Бацилакт 5,0±0,4 5,9±0,7 7,9±0,3 9,6±0,5* 18,7* (тизоль) Бацилакт 4,8±0,2 5,6±0,6 8,0±0,4 9,6±0,4* 19,1* (эфтидерм) Бацилакт 4,4±0,5 5,3±0,5* 7,4±0,5 9,1±0,4* 24,2* (КТГГ) Контроль 4,9±0,4 5,7±0,6 7,9±0,6 10,8±0,7* 9,6* (эплан) Контроль 5,7±0,6 7,1±0,8 8,6±0,5 12,9±0,6 (без лечения) Примечание:

- * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Представленные данные свидетельствуют о наличии выраженной ранозаживляющей активности у экспериментальных образцов препарата бацилакт. Так, на 4-5 сутки уменьшалась местная воспалительная реакция, на 5 7 сутки начиналось образование грануляционной ткани, на 7-8 сутки рана полностью очищалась от некротических тканей, заполнялась грануляциями и начинался процесс эпителизации. Полное заживление наступало на 9-10 сутки, против 11-12 суток в контрольной (без лечения) группе и 10-11 суток в группе животных, леченных препаратом сравнения эпланом.





Общая длительность сроков излечиваемости ран у подопытных животных, леченных препаратами на основе бацилакта с тизолем, бацилакта с эфтидермом, бацилакта с КТГГ, была на 18,7%, 19,1% и 24,2% соответственно меньше, чем у контрольных групп животных.

Влияние гелевых новых лекарственных форм препарата бацилакт на изменение площади резаных ран кожи у белых мышей представлено в таблице 29.

Экспериментальные данные таблицы 29 свидетельствуют о том, что уменьшение площади резаных ран кожи наиболее быстро и эффективно происходило в группе животных, которым осуществлялись аппликации исследуемых препаратов. Так, величина площади резаных ран у подопытных животных, лечение которых проводили гелевыми формами бацилакта, закономерно уменьшалась на 5 и 7 сутки, а на 10 сутки наблюдения резаные раны в этих группах животных полностью затягивались, в то время как в контрольной (без лечения) группе животных средняя площадь резаной раны в это время составляла - 1,5±0,3 мм2, а в группе животных, леченных эпланом 0,4±0,07 мм2.

Таким образом, представленные результаты исследований позволяют говорить о достаточно высокой терапевтической эффективности исследуемых препаратов, используемых для лечения резаных ран.

Таблица 29 – Влияние новых форм препарата бацилакт на изменение площади резаных ран кожи (M±m, n=10) Длительность лечения, сутки Образцы Величина площади резаных ран (мм2) препаратов 0 5 7 Бацилакт 46,7±10,1 26,0±8,3 9,9±2,9* (тизоль) Бацилакт 47,4±10,9 28,1±7,5 10,3±3,2* (эфтидерм) Бацилакт 41,2±10,0 24,4±6,8 9,5±2,3* (КТГГ) Контроль 50,7±13,7 33,1±11,6 14,6±2,5* 0,4±0, (эплан) Контроль 53,2±14,4 36,8±12,3 17,6±3,7 1,5±0, (без лечения) Примечание:

- * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Одновременно следует указать, что образец пробиотического препарата бацилакт с КТГГ по комплексу изучаемых показателей превосходил образцы бацилакта с тизолем и эфтидермом.

В заключении считаем целесообразным обобщить полученные данные по изучению экспериментальных образцов препарата бацилакт на моделях инфекционного и раневого поражения кожных покровов и представить их для большей наглядности в виде гистограммы (рисунок 14).

Сроки заживления, % * * * I II Бацилакт с КТГГ Контроль (Эплан) Контроль (без лечения) Примечание: повреждение кожных покровов, - 1. I-травматическое осложненное инфекционным процессом, вызванным Staphylococcus aureus;

II травматическое повреждение кожных покровов;

2. На оси ординат указаны относительные величины, характеризующие сроки заживления поражений кожных покровов (%);

3. * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера группы «Бацилакт с КТГГ» по сравнению с группой «Контроль (без лечения)» и группы «Контроль (Эплан) по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Рисунок Влияние пробиотического, на основе 14 – кремнийтитанорганического глицерогидрогеля, препарата для наружного применения на уменьшение сроков заживления при инфекционных и раневых поражениях (n=10).

Из приведенных результатов следует, что гелевый препарат на основе КТГГ в сравнительных испытаниях оказался более эффективным при его использовании как для лечения инфекционных поражений, так и для травматических повреждений кожных покровов. В частности, сроки заживления при моделировании стафилококковой инфекции уменьшились примерно на 16,5% и 18,6%, а при лечении резаных ран – на 15% и 22,1% (в сравнении с препаратом эплан и контролем, соответственно).

Таким образом, полученные в наших исследованиях, посвященных изучению терапевтической эффективности созданных экспериментальных образцов гелевых пробиотических препаратов (и в первую очередь, пробиотика бацилакт на основе кремнийтитанорганического глицерогидрогеля) данные, позволяют рекомендовать их для дальнейших испытаний и последующего применения в клинической практике.

2.2.1.5. Фармакокинетика биокомпонента препарата бацилакт Результаты выполненных исследований приведены в таблице 30.

Полученные результаты позволяют говорить о том, что в течение первой недели после применения экспериментального образца бацилакта (КТГГ) бактериальные клетки B. subtilis обнаруживаются как в печени, так и в селезенке и лимфатических узлах белых мышей. Их концентрация постепенно снижалась на протяжении второй недели. Полную элиминацию клеток из организма экспериментальных животных наблюдали на 16-18 сутки.

Бактериальных клеток L. plantarum в исследуемом материале в течение всего срока наблюдения не обнаруживали.

Установлено сравнительно высокое количество клеток B. subtilis в экскрементах лабораторных животных в течение первых двух суток наблюдения, что, по нашему мнению, может свидетельствовать об энтерогепатической рециркуляции бацилл с последующим их полным выведением через пищеварительный тракт.

Таким образом, проведенные исследования по изучению фармакокинетического распределения клеток B. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-А3 после наружного применения (нанесения на раневую поверхность) в составе препарата бацилакт с КТГГ указывают на их гемо- и лимфоперсистенцию в органах лабораторных животных в течение не менее суток.

Таблица 30 – Количественное распределение клеток B. subtilis В-2335 и L.

plantarum 8Р-А3 во внутренних органах белых мышей на различные сроки (M±m, n=6) Исследуемый материал Срок Общее количество пробиотических клеток наблюде на различные сроки наблюдения, кл.мг- Штаммы Лимфа -ния, сут. Печень Селезенка тические Экскременты узлы (0,41±0,11) 1 3,56±0,19* 0,07±0,03* 15,21±1,89* 106* 7 0,09±0,04* 0,08±0,03* 1,67±0,26* 73,05±11,43* B. subtilis В 14 0,04±0,02* 0,05±0,01* 0,01±0,005* 0,02±0,01* 0,01±0,006 0,01±0, 21 0,01±0,009 0,01±0,005* * * 28 0 0 0 1 0 0 0 7 0 0 0 L. plantarum 14 0 0 0 8Р-А 21 0 0 0 28 0 0 0 Примечание:

- 1. В данной серии экспериментов использовали экспериментальный образец препарата бацилакт с КТГГ;

2. * - достоверные (р0,05) различия по W-критерию Вилкоксона по отношению к животным, наблюдаемым на 28 сутки.

Одновременно с этим, нахождение бактериальных клеток рода Bacillus в печени, селезенке, лимфатических узлах, и продуцирование ими комплекса биологически активных веществ представляется нам как один из важных фармакологических механизмов, за счет которого обеспечивается пролонгирующее терапевтическое действие биокомпонента в составе пробиотического препарата.

Данные выполненных исследований оформлены в виде изобретения “Ранозаживляющий пробиотический препарат” и защищены Патентом РФ №2401116 от 10.10.2010г.

Фармакологическое изучение экспериментального образца 2.3.

пробиотического препарата дентозар 2.3.1. Конструирование экспериментального образца метаболического препарата Цель настоящих исследований состояла в разработке нового экспериментального образца зубного эликсира, который мог бы использоваться в качестве профилактического и лечебного средства при различных заболеваниях тканей и органов ротовой полости (гингивиты, альвеолиты, стоматиты, пародонтиты локализованной и генерализованной форм и т.д.), применение которого было бы эффективно для снятия воспалительных процессов, стимулирования местного иммунитета, угнетения посторонней и восстановления нормальной микрофлоры.

Поставленная задача была решена путем разработки и конструирования образца эликсира, характеризующегося тем, что он содержал биологически активные вещества пробиотических бактериальных клеток сенной палочки, прополис, никотиновую кислоту, кальция пантотенат, пиридоксин, ментол, эфирные масла мяты перечной, шалфея, лаванды, а также глицерин х.ч. и воду при следующем соотношении компонентов (масс.%):

метаболиты пробиотических бактериальных клеток сенной палочки - 3 5;

никотиновая кислота - 1 1,5;

кальция пантотенат - 5 6;

пиридоксин - 5 6;

ментол - 1,5 2;

прополис - 5 7;

эфирное масло мяты - 2 2,5;

перечной эфирное масло шалфея - 1 1,2;

эфирное масло лаванды - 3 5;

глицерин х.ч. - 9 10;

дистиллированная вода остальное.

При этом в качестве метаболитов пробиотических бактериальных клеток сенной палочки эликсир содержал биологически активные вещества, синтезируемые Bacillus subtilis штамм В-3679.

Количественные показатели, характеризующие химический состав, выделяемых БАВ приведены в разделе “Материалы и методы”.

Поскольку ранее по данным как зарубежной, так и отечественной научной литературы, не были известны случаи использования биологически активных веществ, получаемых из споровых пробиотических микроорганизмов, для конструирования медицинских фармакологических препаратов, определенный интерес представляло изучение конкретных механизмов действия БАВ, в частности: наличие антагонистических свойств в отношении различных условно-патогенных (патогенных) микроорганизмов, их влияние на некоторые биохимические и иммунологические показатели организма экспериментальных животных.

Сравнительные исследования были проведены с использованием споровой культуры и БАВ исходного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-3679, а также коммерческого медицинского иммунобиологического препарата “Биоспорин”.

В таблице 31 представлены данные по влиянию изучаемых БАВ на рост и размножение бактериальных тест-культур.

В дополнение к таблице 31 приводим также данные о степени патогенности используемых тест-культур (таблица 32).

Таблица 31 – Влияние опытных препаратов на рост бактериальных тест культур (M±m, n=3) Зоны угнетения роста тест-культур, мм № Proteus vulgaris Escherichia coli Staphylococcus Staphylococcus Streptococcus Pseudomonas ATCC aureus 209 Р albicans epidermidis aeruginosa pyogenes Candida п Образцы препаратов / п Споровая культура штамма ВКПМ 1 24,4±2,8* 20,6±1,4 23,7±2,2* 24,8±2,1 17,2±1,1 12,3±1,1 21,9±1, В- Комплекс БАВ штамма ВКПМ В-3679 (общее количество препарата в лунке):

2 5,2±1,4* 4,5±1,3* 6,2±1,1* 5,4±1,8* 4,3±1,1* 3,8±1,2* 4,6±1,1* 1 мг;

9,1±1,6* 8,6±2,3* 8,2±1,6* 7,2±2,3* 6,3±2,0* 9,2±1,3* 10,2±2,4* 5 мг;

12,7±1,8* 13,1±2,0* 10,9±1,7* 12,7±1,2* 10,0±2,1* 10,6±2,4* 11,9±2,7* 10 мг;

26,2±1,9 25,3±2,6* 24,0±1,8* 26,8±3,2 18,4±1,5 13,3±2,5 18,4±3, 25 мг;

28,6±2,1 30,3±1,9* 24,4±3,1* 28,4±3,3 20,9±3,4* 15,8±3,0 19,2±2, 50 мг;

МИБП «Биоспорин»

3 29,0±2,9 19,2±1,0 32,5±2,8 26,3±2,3 15,6±1,2 14,6±1,3 19,2±1, Контроль (стерильное 4 0 0 0 0 0 0 вазелиновое масло) Примечание:

- 1) 1 - Указаны весовые количества сублимационно высушенного комплекса метаболитов Bacillus subtilis.

2) * - достоверные (р0,05) различия по U-критерию Манна-Уитни в группах «Споровая культура штамма ВКПМ В-3679» и «Комплекс БАВ1 штамма ВКПМ В-3679» по отношению к группе «МИБП «Биоспорин»».

Таблица 32 – Степень патогенности используемых тест-культур №, Тест-культуры Группа патогенности п/п 1 Candida albicans 690 III 2 Staphylococcus epidermidis 14990 IV II (наличие двух плазмид, ответственных за синтез Escherichia coli энтеротоксинов) Staphylococcus aureus 209 Р 4 IV 5 Pseudomonas aeruginosa 9027 IV 6 Proteus vulgaris 15 IV 7 Streptococcus pyogenes ATCC 19615 IV Как видно из вышеприведенных данных, комплекс БАВ обладает достаточно высокой антагонистической активностью в отношении изученных штаммов микроорганизмов, относящихся к II – IV группам патогенности.

Степень подавления роста была сравнима с аналогичным показателем как для исходной споровой культуры штамма В-3679, так и спорового пробиотического медицинского иммунобиологического препарата “Биоспорин”.

Укажем также, что повышение концентрации, используемых в опытах БАВ, с 25 до 50 мг было максимальным и уже существенно не влияло на увеличение зон угнетения. Данный факт свидетельствует о том, что и величина одноразовой дозы фармакологического средства, созданного на основе комплекса БАВ, должна также находится в данных пределах.

В дальнейшем существенный интерес представляло экспериментальное изучение специфической эффективности комплекса БАВ, являющегося основой для производства зубного эликсира дентозар, не только in vitro, но и in vivo.

Исследования проводили на модели сальмонеллезной инфекции.

Экспериментальные животные (инбредные белые мыши) были разделены на группы по 20 животных в каждой.

Первой группе животных в течение 7 суток ежедневно однократно внутрижелудочно вводили по 1 мг на грамм веса комплекса БАВ. В качестве препарата сравнения использовали промышленный образец спорового пробиотического препарата “Биоспорин” в дозе 106 кл. (вторая группа).

Контрольными служили группы 3 и 4: нелеченные животные с экспериментальным сальмонеллезом и интактные животные, соответственно.

У зараженных белых мышей развивался генерализованный инфекционных процесс, что приводило к летальному исходу более 60% нелеченных животных. Гибель животных регистрировалась на 6-7 сутки после заражения. Микробиологические исследования подтверждали поставленный диагноз. Количество высеваемых из органов инфицированных животных клеток Salmonella typhimurium в среднем достигало: в крови – 1,5102±0, кл.мл-1, в печени – 2,6104±0,12104 кл.г-1, в селезенке - 2,19104±0,15104 кл.г-1.

В таблицах 33, 34 представлены результаты экспериментальных исследований по изучению состава крови и некоторых показателей неспецифического иммунитета у белых мышей при экспериментальном сальмонеллезе и эффективности применения для их лечения биологически активных веществ.

Таблица 33 – Основные характеристики показателей крови (M±m, n=8) Концентра- Лейкоцитарная формула крови, Группа ция Незрелые Зрелые экспериментальных Лимфоциты, Моноци- Эозинофи лейкоцитов, нейтрофилы, нейтро животных ты, % лы, % % 106клсм-3 филы, % % Леченные БАВ 3,6±0,4* 59,0±2,3* 2,0±0,3* 22,1±0,4 3,8±0,3* 0,3±0,1* Леченные 2,9±0,3* 63,4±1,2* 2,5±0,4* 24,4±0,7 3,8±0,2* 2,2±0,1* биоспорином Контроль (нелеченные, с 5,0±0,6 75,5±3,0 1,5±0,2 24,0±0,3 5,5±0,2 0,8±0, экспериментальным сальмонеллезом) Контроль (интактные 2,7±0,2 81,1±2,3 2,9±0,1 15,3±0,3 2,6±0,3 0,3±0, животные) Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (нелеченные, с экспериментальным сальмонеллезом)».

Данные представленные в таблицах 33 и 34 свидетельствуют о том, что у лабораторных животных с подтвержденным диагнозом генерализованной сальмонеллезной инфекции при назначении им для лечения комплекса БАВ наблюдается определенные изменения лейкоцитарной формулы. Так общая концентрация лейкоцитов, а также лимфоцитов, незрелых и зрелых нейтрофилов и моноцитов были существенно ниже, чем аналогичные показатели у больных животных. Обращает на себя внимание сравнительно высокий уровень эозинофилов у белых мышей, леченных биоспорином. В целом можно говорить о тенденции к нормализации лейкоцитарной формулы под влиянием БАВ, а также биоспорина.

Таблица 34 – Некоторые показатели неспецифического иммунитета (M±m, n=8) Оцениваемые показатели на 5 сутки наблюдения, Уровень Группа Концентра Комплиментар- лизоцима, ОБАСК, экспериментальных ция ЦИК, ед.

ная активность, ед. относитель- ФИ, % животных оптической СН 50 оптической ных единиц плотности плотности Леченные БАВ 28,5±1,9* 0,61±0,01* 13,9±0,3* 46,1±0,1 0,128±0,015* Леченные биоспорином 26,4±2,3* 0,58±0,02 13,6±0,3* 43,0±0,2 0,121±0,001* Контроль (нелеченные, с экспериментальным 20,2±2,0 0,55±0,06 15,2±0,4 34,2±0,3 0,031±0, сальмонеллезом) Контроль (интактные 26,7±0,7 0,49±0,01 3,2±0,1 34,1±0,1 0,012±0, животные) Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (нелеченные, с экспериментальным сальмонеллезом)».

Что касается изученных неспецифических факторов иммунитета, то следует отметить, что под влиянием БАВ происходит увеличение комплементарной активности, уровня лизоцима, концентрации циркулирующих иммунных комплексов, а также общей бактерицидной активности сыворотки крови. Данные изменения свидетельствуют об определенной неспецифической стимуляции данных факторов комплексом БАВ.

Существенным является установленный в последующих наших опытах тот факт, что выживаемость подопытных животных, леченных БАВ, составляла 100%, а леченных биоспорином – 85%. В ходе исследований на различные сроки у экспериментальных животных наблюдали также полную (для БАВ) или частичную (для биоспорина) элиминацию клеток Salmonella typhimurium.

Таким образом, в результате проведения комплекса экспериментальных исследований можно утверждать, что биологически активные вещества, являющиеся основой для приготовления эликсира дентозар, обладают не только выраженными антагонистическими свойствами в отношении различных условно-патогенных (патогенных) бактерий, но и определенной терапевтической эффективностью, о чем свидетельствуют результаты по излечиваемости инфицированных Salmonella typhimurium белых мышей.

Что касается других дополнительных компонентов, использованных для конструирования разрабатываемого средства, то здесь следует указать, что в настоящее время из данных патентной и научно-технической литературы нам не известен состав гигиенического средства, содержащий совокупность предлагаемых компонентов (никотиновая кислота, кальция пантотенат, пиридоксин, ментол, прополис, эфирные масла мяты перечной, шалфея и лаванды) в заявляемых пределах их содержания [122,124, 321].

Так, лечебные свойства прополиса и его фармакологический эффект объясняются наличием в его составе большого числа различных органических компонентов и микроэлементов, а также витаминов, энзимов, фруктозы, глюкозы, фитонцидов.

В медицине прополис применяется прежде всего в хирургии, дерматологии, оториноларингологии, педиатрии и стоматологии. Прополис успешно используют для лечения незаживающих трофических язв, эрозий и ранений различной этиологии, ожоговой болезни и т.д. Учитывая противомикробное, противозудное, эпителизирующие свойства прополиса, прополиссодержащие препараты нашли широкое применение в дерматологии, венерологии и гинекологии.

Никотиновая кислота – пиридин-3-карбоновая кислота, содержащая витамины РР и В 3, характеризуется нейротропным, вазокардиотропным и гепатотропным действием. Осуществляет свои функции в организме в виде никотинамидных коферментов. Никотиновая кислота, улучшает углеводный обмен, оказывает сосудорасширяющее действие, обладает противопеллагрическими свойствами.

Кальция пантотенат является кальциевой солью пантотеновой кислоты.

Пантотеновая кислота входит в состав кофермента А, который играет важную роль в процессах ацетилирования и окисления. Пантотеновая кислота участвует в углеводном и жировом обменах и в синтезе ацетилхолина. Она содержится в значительных количествах в коре надпочечников и стимулирует образование кортикостероидов. Как лекарственное средство применяют кальциевую соль пантотеновой кислоты при различных патологических состояниях, связанных с нарушением обменных процессов: полиневритах, невралгиях, парестезиях, экземе, аллергических реакциях, трофических язвах, ожогах, хронических заболеваниях печени.

Пиридоксину – коферментной форме витамина В 6, принадлежит важная роль в обмене веществ, обеспечении процессов роста, кроветворения и функционирования центральной и периферической нервной системы.

Активность пиридоксина связана с превращением его в пиридоксальфосфат. Он активно участвует в обмене триптофана, метионина, цистеина, а также в процессах жирового обмена. Улучшает липидный обмен при атеросклерозе.

Применяют его также при острых и хронических гепатитах. В дерматологической практике пиридоксин используют при себорейных и несеборейных дерматитах, опоясывающем лишае, нейродермитах, псориазе, экссудативных диатезах и т.д.

Ментол обладает сильным запахом перечной мяты и холодящим вкусом.

При втирании в кожу и нанесении на слизистые оболочки ментол вызывает раздражение нервных окончаний, сопровождающееся ощущением холода, легкого жжения и покалывания, оказывает местное обезболивающее действие;

обладает также слабыми антисептическими свойствами. Наружно назначают как болеутоляющее средство. При воспалительных заболеваниях верхних дыхательных путей назначают ментол в виде ингаляций или капель в нос.

Ментол является составной частью целого ряда комбинированных готовых лекарственных препаратов.

Мята. Все надземные части мяты содержат эфирное масло, основным компонентом которого является ментол. В листьях найдены каротин, геспередин, флавоноиды, бетаин и другие вещества. Мята усиливает секрецию желез, снимает спазмы гладкой мускулатуры.

Шалфей. В состав эфирного масла шалфея входят цинеол, борнеол, камфара, танины, тритерпеновые кислоты, спирты. Это противовоспалительное, спазмолитическое, кровоостанавливающее, отхаркивающее, вяжущее, ранозаживляющее средство. Установлено, что эфирное масло шалфея активно подавляет развитие бактерий кишечной группы, умеренно сдерживает развитие золотистого стафилококка, а также некоторых других патогенных микроорганизмов. Шалфей оказывает вяжущее действие прежде всего в ротовой полости (стоматитах, гингивитах, альвеолитах), его применяют для полосканий при воспалении верхних дыхательных путей. Шалфей может также использоваться как антисептическое средство.

Лаванда. Используется как дезинфицирующее, противовоспалительное и седативное средство. Масло лаванды оказывает расслабляющее действие и дает легкий седативный эффект. Благодаря мягкому обезболивающему действию лавандовое масло назначают для лечения головных, мышечных и других болей.

Лаванда помогает также преодолеть упадок физических сил.

В состав экспериментального образца препарата дентозар включен и медицинский глицерин - органическое соединение, относящееся к полиолам спиртам, содержащим в молекуле несколько гидроксильных групп [119].

Глицерин находит широкое применение в медицине и производстве фармацевтических препаратов. Глицерин используют для растворения лекарств, приготовления высококонцентрированных медицинских растворов, повышения вязкости жидких препаратов, предохранения их от энзиматических изменений. Глицерин является хорошим растворителем йода, брома, фенола, тимола, танина, алкалоидов, хлорида ртути и других неорганических и органических соединений. Глицерин также обладает антисептическими свойствами, поэтому его применяют для предотвращения инфицирования ран.

Антисептические и консервирующие свойства медицинского глицерина связаны с его гигроскопичностью, благодаря которой в разрабатываемых медицинских средствах происходит дегидратация бактерий, что способствует их длительному сохранению.

Проведенные исследования показали хорошую совместимость всех активных компонентов и позволили выявить пределы их количественного содержания, которые обеспечивают проявление максимального лечебного эффекта. При этом экспериментальным путем удалось получить количественное соотношение компонентов, при котором не только сохраняются индивидуальные лечебные свойства каждого компонента, но их совокупность обеспечивает достижение сочетанного воздействия свойств активных компонентов, при этом не наблюдается какого-либо побочного отрицательного действия.

Так, при содержании метаболитов пробиотических бактериальных клеток сенной палочки (протеины, аминокислоты, ферменты, витамины, антибиотические вещества и др.) менее, чем 3 масс.%;

углеводов, ферментов и микроэлементов прополиса менее, чем 5 масс.%;

никотиновой кислоты менее, чем 1 масс.%;

кальция пантотената менее, чем 5 масс.%;

пиридоксина менее, чем 5 масс.%;

эфирных масел мяты перечной менее, чем 2 масс.%, шалфея менее, чем 1 масс.%, лаванды менее, чем 3 масс.%;

ментола менее, чем 1, масс.% и глицерина менее, чем 9 масс.% наблюдали замедление проявления терапевтического эффекта, которое обусловлено уменьшением, в первую очередь, бактериостатического, иммуномодулирующего, а также противовоспалительного действий.

Повышение содержания метаболитов бактериальных клеток сенной палочки более, чем 5 масс.%, углеводов, ферментов и микроэлементов прополиса более, чем 7 масс.%;

никотиновой кислоты более, чем 1,5 масс.%;

кальция пантотената более, чем 6 масс.%;

пиридоксина более, чем 6 масс.%;

эфирных масел мяты перечной более, чем 2,5 масс.%, шалфея более, чем 1, масс.%, лаванды более, чем 5 масс.%;

ментола более, чем 2 масс.% и глицерина более, чем 10 масс.% нецелесообразно, так как при этом существенно изменяются органолептические свойства препарата без повышения терапевтического эффекта, нарушается функционирование нормальной микрофлоры слизистой оболочки полости рта, что при длительном применении может привести в целом и к нарушению морфофункционального состояния тканей пародонта.

Готовую композицию получали смешиванием исходных компонентов:

биологически активных веществ (метаболитов) пробиотических бактериальных клеток сенной палочки с последующим добавлением витаминов (никотиновой кислоты, кальция пантотената, пиридоксина) и дистиллированной воды с глицерином. Полученную композицию тщательно перемешивали при температуре (12±3)°С в течение 10 мин. Затем последовательно наносили эфирные масла мяты перечной, шалфея, лаванды, прополис, ментол, после чего снова добавляли дистиллированную воду до требуемого объема. Полученный раствор еще раз тщательно перемешивали в течение 15 мин. Полученная жидкость была светло-желтого (светло-серого) цвета со вкусом мяты и ментола со значением величины рН, равным 7,0-7,5;

при следующем соотношении компонентов, масс.%: метаболиты пробиотических бактериальных клеток сенной палочки – (3-5);

никотиновая кислота – (1-1,5);

кальция пантотенат – (5 6);

пиридоксин – (5-6);

ментол – (1,5-2);

углеводы, ферменты и микроэлементы прополиса – (5-7);

глицерин (химически чистый) – (9-10);

эфирные масла мяты перечной – (2-2,5);

шалфея – (1-1,2);

лаванды – (3-5);

дистиллированная вода – остальное. Аттестацию полученного продукта проводят химико аналитическим методом.

Предлагаемое технологическое решение можно проиллюстрировать следующими примерами.

Пример 1. Готовили смесь порошков кальция пантотената 60 г (6 масс.%), никотиновой кислоты 15 г (1,5 масс.%), пиридоксина 60 г (6 масс.%) и ментола 20 г (2 масс.%), к которой добавляли взвесь, содержащую метаболиты пробиотических бактериальных клеток сенной палочки 50 г (5 масс.%). Смесь тщательно перемешивали при температуре (12±3)°С в течение 10 мин. Затем последовательно добавляли эфирные масла мяты перечной 25 г (2,5 масс.%), шалфея 12 г (1,2 масс.%), лаванды 50 г (5 масс.%) и 70 г (7 масс.%) прополис с ментолом (2 масс.%), после чего вносили глицерин 100 г (10 масс.%) и дистиллированную воду до 1000 г. Полученный раствор еще раз тщательно перемешивали в течение 15 мин. Получали жидкость светло-желтого цвета со вкусом мяты и ментола со значением величины рН равным 7,0-7,5;

при следующем соотношении компонентов, масс.%: метаболиты пробиотических бактериальных клеток сенной палочки – 5;

никотиновая кислота - 1,5;

кальция пантотенат - 6;

пиридоксин - 6;

ментол - 2;

прополис - 7;

глицерин х.ч. - 10;

эфирные масла: мяты перечной - 2,5;

шалфея - 1,2;

лаванды - 5;

дистиллированная вода - 57,8.

Пример 2. Готовили смесь, содержащую метаболиты пробиотических бактериальных клеток сенной палочки 30 г (3 масс.%) с добавлением 50 г (5 масс.%) прополиса, глицерина х.ч. 90 г (9 масс.%) и дистиллированной воды 500 г (50 масс.%). Смесь тщательно перемешивали при температуре (12±3)°С в течение 5 мин. Затем добавляли смесь порошков никотиновой кислоты 10 г (1 масс.%), кальция пантотената 50 г (5 масс.%), пиридоксина 50 г (5 масс.%) и ментола 15 г (1,5 масс.%) и перемешивали до истечения 10 мин. После этого последовательно вносили эфирные масла мяты перечной 20 г (2 масс.%), шалфея 10 г (1 масс.%), лаванды 30 г (3 масс.%) и после чего добавляли дистиллированную воду до 1000 г. Раствор еще раз тщательно перемешивали в течение 15 мин. Получали жидкость светло-желтого цвета со вкусом мяты и ментола со значением величины рН, равным 7,0-7,5;

при следующем соотношении компонентов, масс.%: метаболиты пробиотических бактериальных клеток сенной палочки - 3;

никотиновая кислота - 1;

кальция пантотенат - 5;

пиридоксин - 5;

ментол - 1,5;

прополис - 5;

глицерин х.ч. - 9;

эфирные масла: мяты перечной - 2;

шалфея - 1;

лаванды - 3;

дистиллированная вода - 64,5.

Фармакологические и морфологические исследования 2.3.2.

экспериментального образца зубного эликсира дентозар 2.3.2.1 Определение «острой» токсичности Эксперименты проведены на 72 белых мышах и 84 белых крысах;

морских свинках. Все животные были распределены по группам, в каждой из которых было по равному количеству животных обоего пола. Результаты исследований представлены в таблице 35:

Таблица 35 – Экспериментальная оценка «острой» токсичности образца препарата Доза Количество № Вид Количес Применяемое Метод эликсира выживших групп животного тво воздействие введения на живот- животных, ы ное, мл шт.

1 2 3 4 5 6 Белые Интактные 1. 12 - - мыши Белые Физиологический Интрагаст 2. 12 1,0 мыши раствор рально Белые Физиологический Внутрибрю 3. 12 1,0 мыши раствор шинно Белые Дентозар Накожно 4. 12 0,5 мыши Белые Интрагаст Дентозар 5. 12 1,0 мыши рально Белые Внутрибрю Дентозар 6. 12 1,0 мыши шинно Белые Интактные 1. 12 - - крысы Белые Физиологический Интрагаст 2. 12 2,5 крысы раствор рально Окончание таблицы 1 2 3 4 5 6 Белые Физиологический Внутрибрю 3. 12 3,0 крысы раствор шинно Белые Дентозар Накожно 4. 12 3,0 крысы Белые Интрагаст Дентозар 5. 12 3,0 крысы рально Белые Интрагаст Дентозар 6. 12 3,0 крысы рально Белые Внутрибрю Дентозар 7. 12 3,0 крысы шинно Морские Интактные 1. 6 - - свинки Морские Физиологический Интрагаст 2. 6 5,0 свинки раствор рально Морские Интрагаст Дентозар 3. 6 5,0 свинки рально Из данных таблицы 35 следует, что гибели животных во всех исследуемых случаях обнаружено не было. Это свидетельствовало об отсутствии «острой» токсичности у экспериментального образца препарата при различных дозах и путях его введения. Одновременно следует указать, что по этой же причине установить значение величины LD 50 для всех видов лабораторных животных, используемых в данной серии опытов, не представлялось возможным.

Состояние животных во всех группах не отличалось от такового у интактных: поведение, аппетит, физиологические отправления, функции сердечно-сосудистой и дыхательной систем, прибавление в весе были идентичны. Деструктивных, некробиотических, и дистрофических изменений в печени, почках, надпочечниках, сердце, селезенке, легких, щитовидной железе, желудке и коже – не было выявлено ни у одного животного при гистологическом исследовании внутренних органов и тканей. Весовые коэффициенты основных органов опытных животных не отличались от таковых у интактных.

2.3.2.2. Изучение «хронической» токсичности Исследования проведены на 72 белых мышах, на 84 белых крысах, морских свинках и 12 кроликах. Лабораторным животным назначали экспериментальный образец препарата в течение 30 суток один раз в день накожно или интрагастрально. Изучали выживаемость животных, состояние периферической крови (количество форменных элементов, уровень гемоглобина), а также изменения некоторых биохимических показателей (количество общего белка в сыворотке крови, уровень остаточного азота и глюкозы).

Результаты исследований представлены в таблицах 36-38.

Таблица 36 – Экспериментальная оценка «хронической» токсичности образца препарата Доза № эликсира Количество Вид Коли- Применяемое Метод групп на выживших животного чество воздействие введения ы животное животных, шт.

, мл 1 2 3 4 5 6 Белые 1. 12 - - - мыши Белые Физиологический Интрагаст 2. 12 1,0 мыши раствор рально Белые Физиологический Внутрибрю 3. 12 1,0 мыши раствор шинно Белые Дентозар Накожно 4. 12 0,5 мыши Окончание таблицы 1 2 3 4 5 6 Белые Интрагаст Дентозар 5. 12 1,0 мыши рально Белые Внутрибрю Дентозар 6. 12 1,0 мыши шинно Белые Интактные 1. 12 - - крысы Белые Физиологический Интрагаст 2. 12 2,5 крысы раствор рально Белые Физиологический Внутрибрю 3. 12 3,0 крысы раствор шинно Белые Дентозар Накожно 4. 12 3,0 крысы Белые Интрагаст Дентозар 5. 12 3,0 крысы рально Белые Интрагаст Дентозар 6. 12 5,0 крысы рально Белые Внутрибрю Дентозар 7. 12 3,0 крысы шинно Кролики Интактные 1. 4 - - Кролики Дентозар Накожно 2. 4 20,0 Интрагаст Кролики Дентозар 3. 4 20, рально Таблица 37 – Показатели периферической крови кроликов при накожном нанесении препарата (M±m, n=3) менталь экспери филы, % Полину Тромбо циты, % Эозино Эритро лоциты, Группы Ретику клеары, Лейко живот Гемог лобин, Моно ммоль № 1012/л 1011/л циты, циты, циты, 109/л ных ных % % п/п 7,74± 5,12± 6,30± 3,30± 7,38± 3,80± 4,30± 66,20± Интактные 1.

0,45 0,06 0,32 0,24 0,47 0,25 0,09 3, 7,95± 5,16± 6,20± 3,46± 7,52± 4,00± 5,10± 63,10± Дентозар 2.

0,32 0,04 0,39 0,15 0,46 0,34 0,33 7, Примечание:

- во всех изучаемых случаях достоверных (р0,05) по U-критерию Манна-Уитни различий в сравнении с группой «Интактные» не установлено.

Таблица 38 – Биохимические показатели крови при определении «хронической» токсичности при накожном нанесении препарата (M±m, n=3) Глюкоза Остаточный №№ Вид животного Общий белок, г.л-1 крови, моль.л групп азот, моль.л- Белые мыши 1. 54,0±1,5 7,9±0,4 34,5±1, Белые мыши 2. 49,8±1,1 8,1±0,2 34,2±1, Белые мыши 3. 50,2±1,4 8,3±0,2 33,9±1, Белые мыши 4. 50,1±1,8 8,2±0,3 33,7±1, Белые мыши 5. 54,4±2,3 8,4±0,1 30,9±1, Белые мыши 6. 53,2±2,2 8,3±0,4 33,8±2, Белые мыши 7. 52,4±1,9 8,3±0,4 32,7±1, (интактные) Белые крысы 1. 66,8±2,2 5,7±0,1 22,7±0, Белые крысы 2. 66,6±1,7 5,7±0,1 22,9±1, Белые крысы 3. 68,5±1,2 5,6±0,3 21,6±1, Белые крысы 4. 68,1±0,8 5,8±0,3 21,0±1, Белые крысы 5. 67,4±1,1 5,8±0,4 21,8±1, Белые крысы 6. 68,1±1,9 5,7±0,3 21,0±1, Белые крысы 7. 66,8±0,6 5,6±0,2 21,3±1, Белые крысы 8. 67,2±1,0 5,7±0,2 21,4±1, (интактные) Примечание:

- во всех изучаемых случаях достоверных (р0,05) по U-критерию Манна Уитни различий в сравнении с группой «интактные» не установлено.

Представленные результаты в таблицах демонстрируют 36- безопасность экспериментального образца дентозара как при внутрижелудочном введении, так и при накожных аппликациях. Эффекта «хронической» токсичности установлено не было.

По результатам лабораторных исследований периферической крови никаких значимых изменений не было выявлено. Количество таких форменных элементов крови, как: эритроциты, лейкоциты, моноциты, эозинофилы, тромбоциты и ретикулоциты как в опыте, так и в контроле было практически идентичным. Не изменялся также и уровень гемоглобина.

Таким образом, в выполненных опытах по изучению «острой» и «хронической» токсичности подтверждена безопасность использования экспериментального образца препарата дентозар.

2.3.2.2.1. Изучение некоторых других показателей «хронической»

токсичности Обобщенные результаты исследований по изучению показателей, характеризующих состояние «хронической» токсичности у лабораторных животных в условиях длительного применения экспериментального образца препарата дентозар, приведены в таблице 39.

Таблица Результаты изучения показателей «хронической»

39 – токсичности Лабора- Колич Способ № Изучаемые Результаты торные ество, введения п/п показатели исследований животные шт. препарата 1 2 3 4 5 Интрагаст Белые мыши рально Изменений в общем Оценка состоянии и поведении общего Интрагаст 1.

Белые крысы лабораторных состояния рально животных не отмечено животных Интрагаст Морские рально свинки Продолжение таблицы 1 2 3 4 5 Оценка Изменений в общем общего состоянии и поведении 1.

состояния лабораторных животных животных не отмечено Оценка Изменений со стороны влияния на Интрагаст функций печени и функцию Белые крысы 2.

рально почек не выявлено печени и почек Достоверных изменений уровня содержания глюкозы не установлено.

Границы колебаний находились в пределах Оценка физиологической влияния на нормы (5,28-8, Интрагаст эндокрин- Белые крысы ммоль.л-1).

3.

рально ную Изменений со стороны систему сосудистой и нервной систем (характерных для нарушений функций надпочечников и щитовидной железы) не выявлены Местно-раздражающее Оценка действие отсутствует.

местно Белые крысы Накожно Суммарный балл 4. раздражающ выраженности эритемы его действия равен “0” Продолжение таблицы 1 2 3 4 5 Белые мыши Накожно Наличие кожно резорбтивного Оценка действия не выявлено кожно 5.

ни у одного резорбтивно лабораторного го действия животного Белые крысы Накожно Индекс кумуляции при нанесении максимально вводимой дозы 30 г.кг-1 (условно Белые крысы Накожно принятой за 1 LD 50 ) равен единице.

Препарат не обладал способностью к кумуляции Кумуля тивное 6.

действие Индекс кумуляции при назначении максимально вводимой дозы 50 г.кг-1 (условно Интрагаст Белые крысы принятой за 1 LD 50 ) рально равен единице.

Препарат не обладал способностью к кумуляции Продолжение таблицы 1 2 3 4 5 Оценка Изменений аллергизи конъюнктивы склеры и рующего слезного протока не На действия:

выявлены.

конъюнк 7.1 Конъ- Конъюнктивальная Кролики тиву глаза юнктиваль проба отрицательная ная проба Ни у одного животного не возникло изменений кожных покровов в 7.2. Метод области аппликаций.

накожных Белые крысы Накожно При тестировании по аппликаци пятибалльной системе й эффективность воздействия равна “0” баллов Показатели РСЛЛ у 7.3. Реак всех животных менее ция 10%. Препарат не специфиче Белые крысы Накожно является ского потенциальным лизиса 7.

аллергеном лейкоцитов Ни у одной морской свинки введение препарата дентозар в Подкожно дозе, равной (сенсиби терапевтическим, не лизиру вызвало ющая анафилактический 7.4. Анаф доза).

Морские шок.

илактиче- Внутри свинки Экспериментальный ский шок сердечно образец не является (разреш потенциальным ающая аллергеном.

доза) В качестве препарата сравнения был взят 2,4 динитрохлорбензол Окончание таблицы 1 2 3 4 5 Сравнение эффективности Изучение воздействия препарата мутаген дентозар по сравнению с Внутри ного, 3,4-бенз(а)пиреном в брюшин канцероген Белые крысы микроядерном тесте 8.

но.

ного и показало, что оно не Накожно тератоген приводило к увеличению ного содержания микроядер в действий полихроматофильных эритроцитах Изменений температуры Изучение поверхности тела у На температур слизис- подопытных животных ных и до и после применения тую сосудистых оболочку зубного эликсира не реакций с полости наблюдали. Полученные помощью Белые крысы 9.

данные свидетельствуют рта тепловизи (аэрозоль о том, что препарат не ографа обладал пирогенным ное NEC ороше- действием и не вызывал Thermo общую температурную ние) Tracer TH реакцию Изучение Показатели, нервно- характеризующие психическо нервно-психическое На го состояние лабораторных слизис состояния животных (уход с тую лаборатор- центрального круга, оболочку ных горизонтальная и полости животных вертикальная рта Белые крысы 10. в активности, количество (аэрозоль результате заглядываний в норки, -ное воздейст- груминг), оцениваемые ороше вия на 5, 10 и 15 сутки ние) дентозара достоверно не (методика различались у опытных и контрольных “Открытое поле”) животных 2.3.2.2.2. Патоморфологические исследования При проведении патоморфологических исследований изучали состояние кожных покровов, слизистых и внутренних органов при накожном и интрагастральном применении экспериментального образца препарата.

Кожные покровы. Толщина рогового слоя при накожном нанесении различных дозах препарата достоверно не возрастала. У всех животных отмечали незначительное утолщение эпидермиса, в основном, за счет увеличения клеток шиповатого слоя. Обычное число клеточных слоев кожи сохранялось. Зернистый слой был представлен одним рядом клеток. В клетках зернистого слоя крупных гранул кератогиалина, различимых при микроскопии не обнаружено. Изменений в дерме не выявлено.

Слизистые оболочки. При гистологическом исследовании многослой ного плоского неороговевающего эпителия роговицы глаза изменений в размерах и структуре шиповатого и базального слоя, а также слоя плоских клеток, не выявлено. Структура многослойного переходного эпителия мочеточника у опытных животных сохранялась.

Печень. Печень имела нормальную дольчатую структуру у животных опытных и контрольных групп. Выраженных отклонений в кровенаполнении органа не было отмечено. Гепатоциты во всех отделах сохраняли свои обычные размеры, ядра были структурированы. Триады (венозная вена, печеночная артерия и желчный проток) имели характерную структуру без увеличения просветов. Синусоидные гемокапилляры были многочисленные, без видимого кровенаполнения. Центральная и поддольковая вены оставались без изменений.

Почки. В почках наблюдали нормальную структуру органа с достаточно отчетливой дифференциацией коркового и мозгового вещества. Почечные тельца во всех отделах сохраняли свои размеры и структуру. Каких-либо изменений в проксимальном и дистальном отделах канальцев, в почечно лоханочно-мочеточниковом сегменте не выявлено. Венозного полнокровия почек не наблюдали даже у животных, получавших дентозар в 10-кратных дозах.

Надпочечные железы. У животных всех экспериментальных групп сохранялось обычное соотношение между клубочковой, сетчатой и пучковой зонами коркового вещества. Кровоизлияний не обнаружено. Гемокапилляры синусоидного типа оставались без кровенаполнения.

Щитовидная железа и паращитовидные железы. У большинства опытных животных щитовидная железа сохраняла нормальную структуру, увеличение числа фолликулов не наблюдали. Высота тиреоцитов оставалась нормальной, фолликулы были выполнены слабооксифильным коллоидом гомогенной структуры. Вышеизложенная картина и отсутствие резорбционных вакуолей не дают возможности говорить о повышении функции органа. Паращитовидные железы: паратироциты были нормальных размеров, гемокапилляры без изменений. Соединительнотканные капсула и прослойки дифференцировались, оставались обычных размеров, без патологических изменений.

При исследовании легких, сердца, селезенки, желудка, а также яичников, матки и влагалища у самок, ни у одного животного не было выявлено патологических изменений органов.

Весовые коэффициенты органов у лабораторных животных, получавших дентозар в разных дозах и при разных путях введения не отличались от таковых у контрольных групп животных одного вида. Случаев гибели животных при определении «хронической» токсичности дентозара не было.

Гистоморфологические данные в виде микрофотографий приводим ниже (рисунки 15-30).

Таким образом, гистологические исследования тканей и органов животных показали отсутствие патологических изменений, что свидетельствовало о нетоксичности экспериментального образца препарата дентозар.

Рисунок 15 – Кожа крысы контрольной группы (ув. х150).

Рисунок 16 – Кожа крысы, получившей экспериментальный образец дентозара в 30-кратной терапевтической дозе (ув. х150).

Рисунок 17 – Печень крысы контрольной группы (ув. х150).

Рисунок 18 – Печень крысы, получавшей экспериментальный образец дентозара в 10-кратной терапевтической дозе (ув. х150) Рисунок 19 – Почка крысы контрольной группы (ув. х150).

Рисунок 20 – Почка крысы, получавшей экспериментальный образец дентозара в 10-кратной терапевтической дозе интрагастрально (ув. х150).

Рисунок 21 – Надпочечник крысы контрольной группы (ув. х150).

Рисунок 22 – Надпочечник крысы, получавшей 10-кратную дозу экспериментального образца дентозара интрагастрально (ув. xl50).

Рисунок 23 – Сердце крысы контрольной группы (ув. х150).

Рисунок Сердце крысы, получавшей 10-кратную дозу 24 – экспериментального образца дентозара интрагастрально (ув. xl50).

Рисунок 25 – Легкое крысы контрольной группы (ув. xl50).

Рисунок 26 – Легкое крысы, получавшей 10-кратную дозу экспериментального образца дентозара интрагастрально (ув. x150).

Рисунок 27 – Селезенка крысы контрольной группы (ув. х150).

Рисунок Селезенка крысы, получавшей дозу 28 – 10-кратную экспериментального образца дентозара интрагастрально (ув. х150).

Рисунок 29 – Желудок крысы контрольной группы (ув. х150).

Рисунок Желудок крысы, получавшей 10-кратную дозу 30 – экспериментального образца дентозара интрагастрально (ув. х150).

2.3.2.2.3. Лабораторные исследования экспериментального образца дентозара Целью данной серии экспериментов было изучение некоторых фармакологических эффектов у лабораторных животных в результате воздействия разрабатываемого средства.

Учитывая способ применения дентозара, существенный интерес представляли исследования по оценке его влияния на слизистую оболочку полости рта. В научной литературе имеются прямые указания о том, что в подобных случаях моделирование изучаемых процессов рекомендуется проводить на кожных покровах с последующей экстраполяцией полученных результатов на слизистые оболочки [479, 481, 482].

Работа была выполнена на белых крысах, путем моделирования у них ожоговой травмы II степени. Наблюдение за животными осуществляли в течение 20 суток до момента их полного выздоровления. Лечение проводили исследуемым препаратом путем ежедневного его нанесения аэрозольным способом непосредственно на область термического ожога. В качестве контроля использовали препарат асепта [792].

Предварительно приведем снятые у белых крыс тепловизиограммы, характеризующие температурное состояние ротовой полости, после орошения ее аэрозолем дентозара (рисунки 31-32).

Рисунок 31 – Тепловизиограмма до применения зубного эликсира Рисунок 32 – Тепловизиограмма после применения зубного эликсира Полученные данные, представленные на рисунках 31 и 32, свидетельствуют о том, что температура сравниваемых локальных участков слизистой оболочки полости рта до и после орошения ее экспериментальным образцом дентозара значимо не различается. Это позволяет утверждать об отсутствии у изучаемого средства как раздражающего действия, так и вазотропного влияния на сосуды слизистой оболочки ротовой полости.

Экспериментальные данные, характеризующие объективные изменения состояния белых крыс с термическими ожогами 2 степени кожных поверхностей под влиянием изучаемого препарата, представлены в таблице 40.

Таблица 40 - Эффективность применения дентозара у белых крыс с термическими ожогами (M±m, n=10) Длительность лечения по фазам раневого процесса, сутки Эффектив Очищения ность Препарат ран от Образова- Начало Время лечения, гнойно- ние эпителиза- излече % некротичес- грануляций ции ния ких тканей Дентозар 10,3±0,5* 12,0±0,8* 12,6±0,8* 14,0±0,9* 33,9* Асепта 12,8±0,7 14,2±0,9 15,8±0,8 19,0±0,4* 10,3* Контроль 13,4±0,8 15,5±0,6 16,9±0,8 21,2±1,0 (без лечения) Примечание:

- * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Результаты экспериментальных данных, представленные в таблице 40, свидетельствуют об эффективности применения исследуемого препарата дентозар у экспериментальных животных с термическими ожогами второй степени. Очищение ран от гнойно-некротических тканей, образование грануляций, начало эпителизации в группе животных, под воздействием препарата дентозар, происходило в более короткие сроки по сравнению с животными, у которых с этой же целью использовали средство асепта. Время полного заживления термических ожогов, составляло 13-14 суток, что сравнительно меньше, чем в группе животных, которым была назначена асепта.

В тоже время у контрольных белых крыс эти сроки превышали 21 сутки.

Эффективность лечения дентозаром была практически на 23% выше, чем у асепты.

Полученные результаты подтверждаются также и данными о величине площадей термических ожогов под влиянием воздействия изучаемых средств, таблица 41.

Таблица 41 – Влияние препарата дентозар на изменение площади термических ожогов кожи у белых крыс (M±m, n=10) Длительность лечения, сут.

Препарат Площадь термического поражения, мм 0 5 10 Дентозар 56,3±9,0 23,9±6,1* 0 Асепта 71,7±13,8 65,2±11,2 38,6±7,7 7,1±0,8* Контроль (без 62,4±16,3 59,3±10,1 35,3±4,1 12,3±2, лечения) Примечание:

- * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Данные, представленные в таблице 41 свидетельствуют о том, что под влиянием препарата дентозар происходит существенно более значительные изменения площадей термических ожогов, чем у контрольных животных. Так, площадь ожога II степени на 5 сутки уменьшилась с 56,3 до 23,9мм2, на сутки наступило полное заживление ожоговых ран.

2.3.2.2.4. Исследование общего и биохимического анализа крови лабораторных животных Полученные фармакологические эффекты при использовании экспериментального образца препарата дентозар в опытах на белых крысах с воспроизведенной ожоговой травмой степени предопределили II необходимость дальнейших исследований по изучению общего и биохимического состава крови, а также изменений некоторых факторов клеточного и гуморального иммунитета. Полученные результаты представлены в таблице 42.

Показано, что при моделировании термического ожога у лабораторных животных наблюдали резкое увеличение абсолютного числа лейкоцитов (в 1,5 2 раза), что в принципе объясняется закономерным патофизиологическим проявлением развивающегося воспалительного процесса.

При сравнении уровней общего лейкоцитоза установлено, что нарастание абсолютного количества лейкоцитов у экспериментальных животных, в отношении которых использовали дентозар, было существенно менее выраженным, чем у контрольных животных. В целом можно сделать вывод о том, что препарат дентозар обладает определенным противовоспалительным действием, что также подтверждалось и результатами оценки величины показателя СОЭ.

Биохимический анализ сыворотки крови экспериментальных животных определяли путем исследования основных биохимических показателей. Отбор материала для исследований (сыворотку крови) проводили на 1-е, 7-е и 14-е сутки после применения дентозара. Полученные экспериментальные данные представлены в таблице 43.

Таблица 42 - Общий анализ крови у экспериментальных животных с термическими ожогами 2 степени в условиях применения дентозара (M±m, n=10) Лимфо- Моно- Эозино- Нейтрофилы СОЭ, Срок Гемо- Абс. кол-во филы, циты, циты, мм · ч- Юные, Палоч- Сегменто наблю- глобин, лейкоцитов, коядерные, ядерные, % Препарат дения, г · дм-3 x106кл · см-1 % % % % % сутки 1 138,2±7,1 1,70±0,09* 67,42±3,42* 2,04±0,12* 0,01±0,00 0,01±0,00 5,37±0,28* 11,51±0,58* 1,48±0,07* Дентозар 7 137,9±7,0 1,89±0,09* 78,01±3,92* 0,01±0,00 0,01±0,00 5,48±0,29* 5,29±0,28* 24,06±1,23 1,86±0,10* 1 134,6±6,8 2,28±0,12* 54,64±2,71 3,38±0,17 2,56±0,13* 0,01±0,00 7,06±0,32* 12,92±0,67 2,33±0,12* Асепта 7 136,3±6,9 2,29±0,12* 72,70±3,79* 4,16±0,23* 2,24±0,12* 0,01±0,00 12,43±0,63* 8,25±0,46* 2,14±0,11* Контроль 1 135,8±6,9 6,19±0,33 57,53±2,93 3,09±0,16 0,01±0,00 0,01±0,00 29,16±1,47 17,32±0,93 3,06±0, (без лечения) 7 132,0±6,6 3,68±0,19 62,11±3,13 0,01±0,00 0,01±0,00 0,01±0,00 8,10±0,42 26,20±1,35 2,86±0, Примечание:

- * - достоверные (р0,05) по F-критерию Фишера различия в сравнении с группой «Контроль (без лечения)».

Таблица 43 – Биохимические показатели сыворотки крови подопытных животных при моделировании термических ожогов кожи 2 степени (M±m, n=10) Срок Исследуемые биохимические показатели набл- Щелочная Общий Билирубин Тимоловая Амилаза, Препарат юде- АЛТ, проба, Мочевина, ACT, АСТ/АЛТ фосфатаза, белок, общий, ния, Ед дм-3 Ед дм-3 ммоль дм-3 г (ч·дм)- Ед ·дм-3 г дм-3 мкмоль дм ед. S-H - сутки 1 66,1±5,2 46,1±4,3 0,69±0,04 107,2±9,71 46,5±5,6 5,1±0,4 4,2±0,3 10,8±0,4 16,4±5, Дентозар 7 61,9±4,5 43,8±4,7 0,74±0,05 111,8±10,62 57,2±4,6 5,0±0,4 4,3±0,2 8,2±0,5 16,2±5, 14 60,4±5,1 41,9±4,1 0,69±0,07 105,2±9,26 67,4±4,8 5,1±0,4 4,2±0,3 7,0±0,3 16,2±5, 1 68,3±5,0 45,1±4,0 0,66±0,06 109,5±9,47 45,4±5,1 5,1±0,5 4,3±0,4 10,3±0,6 16,3±5, Асепта 7 62,7±5,5 54,3±4,6 0,86±0,05 109,7±10,19 56,3±5,1 5,1±0,5 4,3±0,5 8,2±0,7 16,3±5, 14 61,6±5,2 47,0±4,2 0,76±0,07 106,8±9,34 65,2±5,4 5,0±0,5 4,2±0,4 6,9±0,3 16,4±5, 1 68,8±4,7 52,8±4,2 0,77±0,05 110,3±10,51 48,9±5,3 5,0±0,4 4,2±0,3 10,8±0,9 16,1±5, Контроль (без 7 63,6±5,0 46,9±4,3 0,73±0,05 106,3±9,32 54,7±5,2 5,0±0,5 4,3±0,2 8,1±0,4 16,8±5, лечения) 14 61,1±5,1 43,6±4,4 0,71±0,06 105,3±9,27 66,0±5,3 5,0±0,4 4,2±0,2 7,2±0,5 16,2±5, Контроль интакт- - 65,1±5,2 46,3±4,1 0,71±0,07 106,5±9,32 67,5±5,4 5,1±0,4 4,2±0,3 7,8±0,6 16,1±5, ные Примечание:

- во всех изучаемых случаях достоверных (р0,05) по F-критерию Фишера различий в сравнении с группой «Контроль (без лечения)» не установлено.

Как видно из данных таблицы 43, у всех экспериментальных животных после нанесения ожоговой травмы уже на 1-е сутки наблюдали изменения ряда биохимических показателей сыворотки крови. Так, увеличивалась активность аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы, а также количество мочевины, снижалось количество общего белка. Общее содержание билирубина, активность амилазы и тимоловая проба на все сроки наблюдения (1, 7 и 14 сутки) оставалось практически без изменений.

К 7 и 14 суткам все изучаемые показатели нормализовались и существенно не отличались от физиологической нормы. Обращает на себя внимание сравнительно хорошо выраженная у экспериментальных животных, которым был назначен дентозар, тенденция к более значительному снижению активности аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и их соотношения (АСТ/АЛТ), что свидетельствовало об определенном положительном (гепатопротекторном) влиянии изучаемого препарата на некоторые метаболические функции печени.

В дальнейшем изучали также состояние некоторых факторов неспецифического гуморального ответа при оценке терапевтической эффективности дентозара у животных с термическим ожогом кожи. Данные, полученные в ходе экспериментальных исследований представлены в таблице 44.

Как видно из данных, приведенных в таблице 44, на 1-е сутки в опытной группе определяли незначительное повышение содержания в сыворотке крови, по сравнению с контролем (без лечения) таких показателей как: IgM, одновременно сопровождающиеся снижением концентрации IgA на 23,8% и IgG на 16,6%.

На 7-е сутки наблюдения, в контрольной группе животных с термическими ожогами кожи (без лечения) отмечали увеличение титра иммуноглобулина А в 2,5 раза на фоне увеличения концентраций иммуноглобулина М и ЦИК до нормальных величин. Показатель титра иммуноглобулина G в опытной группе снижался в 1,6 раза по сравнению с контролем.

Таблица 44 – Количественные изменения показателей гуморального иммунитета при лечении термических ожогов 2 степени у экспериментальных животных (M±m, n=10) Срок Исследуемые показатели Препа- наблю -ИФН, РА ИЛ-1, ЦИК, рат дения, Ig M, мгсм-3 Ig A, мгсм-3 Ig G,-3 Ig E, мгсм мгсм пгсм-3 пгсм-3 опт.ед.

- сутки 1 4,38±0,26 0,64±0,10* 8,5±0,8* 0,21±0,07 38,2±2,0* 4,1±1,7* 0,20±0,02* Денто зар 7 2,90±0,24 0,94±0,11* 6,8±1,0* 0,24±0,05 33,6±1,9* 3,9±0,8* 0,08±0,01* 1 5,88±0,30 0,92±0,11 9,6±1,5 0,21±0,04 23,3±1,4 2.0±0,6 0,11±0, Асепта 7 3,31±0,38 2,02±0,16 10,2±1,4 0,22±0,03 24,7±1,8 1,8±0,5 0,18±0, Конт 1 4,01±0,23 0,84±0,12 10,2±0,9 0,20±0,01 27,9±1,7 2,2±0,7 0,24±0, роль (без лече 7 3,07±0,33 2,03±0,13 11,1±1,5 0,19±0,04 25,4±1,6 2,1±0,4 0,13±0, ния) Конт роль - 2,83±0,34 0,90±0,14 8,9±1,7 0,12±0,03 24,3±1,6 1,9±0,4 0,12±0, (интак тные) Примечание:

- оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (ANOVA). * - достоверные (р0,05) различия по F-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Увеличение содержания циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови подопытных животных совпадало с уменьшением титра иммуноглобулина М. Наиболее низкую концентрацию ЦИК определяли в группе подопытных животных, получавших препарат дентозар - 0,08±0,01 опт.

ед. на 7- сутки наблюдения.

На 1-е сутки после начала лечения у подопытных групп животных, которым назначали испытуемый препарат, титр иммуноглобулина А снижался незначительно, также как и титр иммуноглобулина G. Титр иммуноглобулина Е в опытной и контрольной группах (контроль – без лечения) группах животных оставался неизменным (0,21±0,07 мгсм-3 и 0,20±0,01 мгсм-3 соответственно).

Исследование количественного содержания цитокинов в сыворотке крови подопытных животных на 1-е сутки от начала аппликации препарата дентозар показало достоверно более высокий уровень -ИФН и РА ИЛ-1 в сравнении с контрольными группами, концентрация которых достигала 38,2±2,0 пгсм-3 и 4,1± 1,7 пгсм-3 соответственно. Их значения оставались без особых изменений и на 7-е сутки.

В сравнении с данными, определяемыми на первые сутки, через 7 суток после начала аппликации экспериментальным образцом дентозар наблюдали снижение титра иммуноглобулина М до 2,90±0,24 мгсм-3 и ЦИК до 0,08±0, опт. ед., и одновременное повышение в сыворотке крови концентрации иммуноглобулинов А в 1,46 раза до 0,94±0,11 мгсм-3.

На 7-е сутки от начала лечения, концентрация иммуноглобулина G в группе, где применяли дентозар, имела тенденцию к снижению и составляла 6,8±1,0 мгсм-3. Титр иммуноглобулина Е в группах экспериментальных животных достоверно не изменялся по сравнению с показателями контрольной группой и в среднем находился в пределах 0,21-0,24 мгсм-3. Титр исследуемых цитокинов во всех группах на 7-е сутки наблюдения имел тенденцию к снижению.

Таким образом, исследование гуморального статуса подопытных животных, получавших дентозар, при воспроизведении у лабораторных животных модели термических ожогов кожи, позволяет сделать заключение о наличии у него определенного иммуномодулирующего воздействия:

повышение содержания IgM и, что особенно значимо – рецепторного антагониста интерлейкина-1 и -интерферона.

2.3.3. Клинико-лабораторные экспресс-исследования экспериментального образца зубного эликсира дентозар Данные клинико-лабораторных исследований для определения показателей эффективности применения зубного эликсира предлагаемого состава, как гигиенического и лечебного средства при пародонтите средней степени тяжести, определяли в исследованиях на пациентах-добровольцах.

Под наблюдением находилось 35 пациентов (20 мужчин и 15 женщин), средний возраст которых составлял 51 год, клинический диагноз – хронический генерализованный пародонтит средней степени тяжести был установлен в соответствии с действующими в настоящее время критериями.

Учитывая исключительно экспериментальный характер выполняемых нами исследований по разработке образца зубного эликсира, специфическую эффективность его до проведения комплексных клинических испытаний считали возможным и целесообразным провести по следующим двум направлениям:

в лабораторных условиях выполнить микробиологические исследования по количественной оценке уровня антагонистической активности экспериментального образца эликсира дентозар в отношении наиболее характерных видов микроорганизмов, выделяемых из полости рта больных с подтвержденным диагнозом хронический генерализованный пародонтит средней тяжести;

оценить состояние и динамику изменения таких интегральных иммунологических показателей, характеризующих состояние здоровья пациентов, как уровень активности лизоцима и концентрацию s Ig A, а также Ig A, M, G в слюнной жидкости больных.

Отбор проб для бактериологических исследований проводили установленным порядком [214, 551, 586]. Идентификацию выделенных микроорганизмов осуществляли после получения чистых культур по морфологическим, культуральным, биохимическим и антигенным признакам с использованием идентификационных наборов.

Из значительного количества (56 видов) выделенных и идентифицированных видов микроорганизмов как аэробов, так и анаэробов, для дальнейших исследований были выбраны, наиболее распространенные и типичные для данного заболевания виды: стафилококки (2 вида), стрептококки (3 вида), кишечная палочка, грибы, вейлонеллы, актиномицеты, псевдомонады, фузобактерии, трепонемы, нейсерии, протеи (таблица 45).

Таблица 45 – Оценка антагонистической активности эликсира дентозар в отношении наиболее типичных видов микроорганизмов, выделенных из ротовой полости больных хроническим генерализованным пародонтитом средней тяжести (M±m, n=3) Размеры Размеры №, зоны №, зоны Вид микроорганизма Вид микроорганизма п/п подавления п/п подавления роста, мм роста, мм 1. Staphylococcus aureus 8. Veillonella parvula 30,8±1,6* 29,3±1,6* Staphylococcus более 351 * 2. 9. Neisseria spp. 29,2±1,6* epidermidis Streptococcus 3. 10. Actinomyces spp.

25,2±1,8* 24,5±1,7* pyogenes Streptococcus Treponema 4. 11.

25,7±1,8* 20,6±1,3* haemolyticus macrodentium Fusobacterium 5. Streptococcus mutants 12.

26,4±1,9* 22,4±1,5* polymorphum более 35* более 35* 6. Escherichia coli 13. Proteus vulgaris Pseudomonas 7. 14. Candida albicans 23,0±1,4* 33,6±2,1* aeruginosa 15. Контроль (стерильное вазелиновое масло) 0,01±0, Примечание:

- 1. 1 - Величина зоны подавления, равная 35 мм и более свидетельствовало о максимальном уровне антагонистической активности.

2. * - достоверные (р0,05) различия по U-критерию Манна-Уитни по отношению к группе «Контроль (стерильное вазелиновое масло)», Как видно из анализа экспериментальных данных, представленных в таблице разработанный экспериментальный образец предлагаемого 45, средства объективно обладает достаточно высоким уровнем антагонистической активности в отношении различных типичных представителей аэробной и анаэробной микрофлоры полости рта больных хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести. Наибольшая степень подавления роста установлена для таких видов, как: Escherichia coli, Staphylococcus epidermidis, Proteus vulgaris, Candida albicans, Staphylococcus aureus, Veillonella parvula, Neisseria spp.

На втором этапе исследований группе больных назначали изучаемый эликсир, который применяли аэрозольным способом 4 раза в сутки на протяжении 7 дней. Контрольную группу составили 10 человек в возрасте от до 60 лет, которые для лечения использовали коммерческое гигиеническое средство асепта.

Динамика изменения концентрации лизоцима в слюнной жидкости больных хроническим генерализованным пародонтитом средней тяжести представлена на рисунке 33.

Данные рисунка 33 показывают, что у больных, которым был назначен экспериментальный образец гигиенического средства дентозар, наблюдается существенное увеличение в слюнной жидкости концентрации лизоцима.

Уровень данного фермента, который, как известно, играет в организме роль неспецифического антибактериального барьера, закономерно возрастал, начиная с первых дней приема дентозара (максимум его достигал на 7-14 сутки и постепенно снижался к 21-м суткам).

Результаты лабораторных исследований по оценке изменения уровня иммуноглобулинов sIg A, а также Ig A, M, G в слюнной жидкости больных хроническим генерализованным пародонтитом средней тяжести представлены в таблице 46.

Концентрация лизоцима, * 70 * * - мкг.мл 1 2 3 Срок наблюдения, сут.

Дентозар Асепта Рисунок 33 – Динамика изменения уровня лизоцима в слюнной жидкости (n=4).

Примечание:

- * - достоверные (р0,05) по U-критерию Манна-Уитни различия в группе «Дентозар» по отношению к группе «Асепта».

Таблица 46 – Динамика изменения уровня иммуноглобулинов (M±m, n=6) Иссле- У больных, которым был У больных, которым был дуемые назначен дентозар назначен асепта №, У больных до показа п/п лечения сроки наблюдения, сутки тели, мгсм-3 1 7 14 1 7 1. sIg A 0,2±0,1 0,25±0,1 0,31±0,2* 0,36±0,3* 0,2±0,1 0,22±0,2 0,23±0, 2. Ig A 0,45±0,12 0,54±0,08 0,55±0,01* 0,59±0,07* 0,44±0,1 0,45±0,11 0,43±0, 3. Ig M 0,31±0,09 0,54±0,11* 0,36±0,07 0,28±0,08 0,30±0,11 0,29±0,2 0,29±0, 4. Ig G 2,12±0,13 2,15±0,1 2,40±0,02 2,45±0,1 2,0±0,11 2,2±0,12 2,1±0, Примечание:

- * - достоверные (р0,05) по W-критерию Вилкоксона различия в группах «1, 7 и 14 сутки» по отношению к контролю «До лечения».

Как видно из данных таблицы 46 назначение гигиенического средства дентозар сопровождалось увеличением уже на первые сутки концентрации sIgA и IgA, хотя в большей степени это наблюдалось на 7 и 14 сутки. Установлено также и значительное повышение IgM (в первые сутки после применения препарата).

В целом, полученные результаты свидетельствуют об определенных положительных иммунологических сдвигах у больных, принимавших в качестве профилактического средства дентозар.

Одновременно клинико-лабораторные исследования больных пародонтитом средней степени тяжести в стадии выраженных клинических проявлений после применения зубного эликсира предлагаемого состава в течение 7 суток показали, что большинство пациентов (90%) отметили значительное улучшение общего состояния. Это явление они, в первую очередь, связывают с увеличением слюноотделения (75% пациентов).

Практически у всех пациентов исчез также и неприятный запах изо рта. После применения эликсира существенно уменьшились боли в деснах при чистке зубов и приеме твердой пищи и кровоточивость. В полости рта не было неприятных ощущений.

Ниже приводим также результаты экспериментальных исследований по изучению частоты выделения различных видов микроорганизмов до и после применения зубного эликсира дентозар (таблица 47).

Экспериментальные данные, представленные в таблице свидетельствуют о существенном снижении количества и частоты выделения условно-патогенной микрофлоры, наиболее характерной для хронического генерализованного пародонтита средней степени тяжести.

Наблюдается полное вытеснение или снижение до физиологических значений концентраций таких значимых для данной болезни видов микроорганизмов, как Streptococcus pyogenes, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Treponema macrodentium, Streptococcus haemolyticus, Streptococcus mutants, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Fusobacterium polymorphum, Neisseria spp., Actinomyces spp.

Таблица 47 – Динамика изменения концентрации условно-патогенных микроорганизмов у больных хроническим генерализованным пародонтитом средней тяжести M±m, n=6) Частота Частота выделения, % выделения, % №, Вид №, Вид микроорганизма п/п микроорганизма п/п До После До После лечения лечения лечения лечения 55,72 12,90 12,44 2, Staphylococcus 1. 9. Neisseria spp.

±3,86 ±1,72* ±1,76 ±0,24* aureus 35,88 15,67 55,72 1, Staphylococcus 2. 10. Actinomyces spp.

±2,92 ±1,80* ±3,83 ±0,17* epidermidis 12,04 0,01 2,84 0, Streptococcus Treponema 3. 11.

±1,76 ±0,00* ±0,53 ±0,00* pyogenes macrodentium 20,38 5,06 56,93 1, Streptococcus Fusobacterium 4. 12.

±2,03 ±1,31* ±4,03 ±0,18* haemolyticus polymorphum 18,25 8,59 5,10 0, Streptococcus 5. 13. Proteus vulgaris ±1,92 ±1,48* ±1,35 ±0,00* mutants 3,16 0,01 69,81 10, 6. Escherichia coli 14. Candida albicans ±1,63 ±0,00* ±4,52 ±1,64* 3,67 0, Pseudomonas 7.

±1,69 ±0,00* 65,42 ± aeruginosa 80, 15. Lactobacillus spp.

±5,91* 70,22 8,16 4, Veillonella 8.

±4,63 ±0,52* parvula Примечание:

- * - достоверные (р0,05) по W-критерию Вилкоксона различия по отношению к контролю «До лечения».

Существенное положительное терапевтическое значение имеет увеличение количества микроорганизмов рода Lactobacillus до 80%.

Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что предлагаемый зубной эликсир дентозар по результатам изучения его эффективности в условиях стоматологической клиники при лечении пародонтита, оказался безопасным для применения и обладал выраженным положительным клинико-терапевтическим эффектом.

Это подтверждалось:

нормализацией микробиоценоза ротовой полости, сопровождающейся снижением количества условно-патогенной микрофлоры и повышением концентрации представителей нормальной микрофлоры;

высокой антагонистической активностью эликсира в отношении различных видов условно-патогенных микроорганизмов, выделяемых у больных пародонтитом;

повышением активности лизоцима слюнной жидкости и иммуноглобулинов A и G;

нормализацией клинической картины и улучшением субъективных ощущений пациентов.

Результаты выполненных исследований оформлены в виде изобретения “Зубной эликсир дентозар и защищены Патентом РФ №2363445 от 10.08.2009г.

Разработка экспериментального образца бикомпонентного 2.4.

метаболического пробиотика фемивит и обоснование возможности его применения у больных с инфекционно воспалительными заболеваниями гинекологического профиля Пробиотические свойства различных видов микроорганизмов в настоящее время описаны многочисленными авторами и достаточно полно представлены в научной литературе.

Для решения задачи по разработке экспериментального образца пробиотического метаболического средства фемивит и выбора конкретных штаммов микроорганизмов в наибольшей мере, отвечающих предъявляемым к образцу требованиям, использовали следующие критерии:

выбранные штаммы должны быть безвредными для организма человека;

штаммы должны обладать комплексом полезных биологических свойств, позволяющих использовать их в качестве основы для получения пробиотических препаратов:

высоким уровнем биохимической активности и способностью продуцировать и экскретировать различные специфичные для данного штамма метаболиты, входящие в комплекс биологически активных веществ широким спектром антагонистической активности к различным видам условно-патогенных (патогенных) микроорганизмов;

не проявлять ингибирующего эффекта в отношении представителей нормальной микрофлоры;

проявлять иммуностимулирующую активность в отношении клеточных и гуморальных факторов неспецифического иммунитета;

при многократном и продолжительном применении не вызывать аллергизации и гиперсенсибилизации макроорганизма.

С целью выбора бактериальных штаммов пробиотических микроорганизмов, оптимально отвечающих решению поставленной задачи были изучены биологические свойства четырех штаммов Bacillus subtilis В 2335, В-4759, В-2895, В-3679 и пяти штаммов бактерий рода лактобацилл:

Lactobacillus acidophilus 2707, Lactobacillus plantarum 8P-A3, Lactobacillus fermentum 90T-C4, Lactobacillus fermentum B-4916, Lactobacillus buchneri (таблицы 48, 49).

Таблица 48 – Оценка антагонистической активности культур Bacillus и Lactobacillus (M±m, n=3) Зоны угнетения роста тест-культур, мм № Candida albicans pyogenes ATCC aeruginosa Staphylococcus Культуры Streptococcus Pseudomonas epidermidis п/ штаммов п 1 2 3 4 5 Bacillus subtilis 1. 24,6±2,5* 25,2±1,9* 27,4±3,2* 21,9±2,0* В- Bacillus subtilis 2. 21,3±2,1* 20,7±1,8* 22,5±2,4* 23,2±2,6* В- Bacillus subtilis 3. 21,8±2,2* 20,9±1,8* 23,4±2,6* 22,0±1,9* В- Bacillus subtilis 4. 25,1±2,0* 21,5±1,9* 24,7±2,5* 26,3±2,8* В- Lactobacillus 5. 19,8±1,6* 21,4±1,9* 22,3±2,4* 23,9±2,7* acidophilus Lactobacillus 6. 25,3±3,2* 24,0±2,7* 23,6±1,9* plantarum 8P-A Lactobacillus 7. 12,8±1,1* 10,8±0,9* 14,4±1,3* 8,6±0,6* fermentum 90T C Lactobacillus 8. 17,2±1,6* 19,3±1,8* 20,5±1,9* 10,4±0,8* fermentum B Окончание таблицы 1 2 3 4 5 9. Lactobacillus 18,9±1,6* 10,6±0,9* 12,0±1,1* 12,3±1,1* buchneri Контроль 10. (стерильное 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0, вазелиновое масло) Примечание:

- * - достоверные (р0,05) различия по U-критерию Манна-Уитни по отношению к группе «Контроль (стерильное вазелиновое масло)».

Таблица 49 – Количественные показатели активности перитонеальных макрофагов у белых мышей после введения им внутрибрюшинно культур пробиотических штаммов в дозе 104 кл.мл-1 (M±m, n=3) Величина Величина Культуры Культуры № фагоцитар- № фагоцитар штаммов штаммов п/п ного п/п ного Bacillus subtilis Lactobacillus индекса, % индекса, % Bacillus subtilis Lactobacillus 1. 24,0±1,6* 6. 19,6±1, В-2335 acidophilus Bacillus subtilis Lactobacillus 2. 22,8±1,4* 7. 30,1±3,2* В-4759 plantarum 8P-A Bacillus subtilis Lactobacillus 3. 20,3±1,3 8. 17,7±1, В-2895 fermentum 90T-C Bacillus subtilis Lactobacillus 4. 26,5±2,4* 9. 19,2±1, В-3679 fermentum B- Контроль Lactobacillus (интактные 5. 18,0±1,2 10. 22,4±2, buchneri животные) Контроль (интактные 11. 21,2±2, животные) Примечание:

- * - достоверные (р0,05) различия по U-критерию Манна-Уитни по отношению к группе «Контроль (интактные животные)».

Как видно из данных таблиц 48 и 49 в сравнительных испытаниях наивысшие результаты как по величине показателя антагонистической активности, так и по уровню стимулирования активности перитонеальных макрофагов показали бактериальные культуры таких штаммов как: Bacillus subtilis В-3679 и Lactobacillus plantarum 8P-A3.

Отметим также, что и биохимическая активность у штамма Bacillus subtilis В-3679, определяемая по показателям величины и скорости синтеза протеолитических и амилолитических ферментов, также была выше, чем у культур других сравниваемых штаммов (см. стр. 311-312, рисунки 44, 45).

Укажем также, что для лактобацилл существенное значение принадлежит уровню их кислотообразования, поскольку синтез органических кислот существенным образом влияет на их антагонистическую активность. Так, для изучаемых штаммов лактобацилл он (по результатам определения в культуральной жидкости титрометрическим методом) составил следующие количества в градусах Тернера (°Т): Lactobacillus acidophilus 2707 – 87-95, Lactobacillus plantarum 8P-A3 – 180-185, Lactobacillus fermentum 90T-C4 – 85-92, Lactobacillus fermentum B-4916 – 93-97, Lactobacillus buchneri 2 – 95-99.



Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 10 |
 

Похожие работы:





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.