авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
-- [ Страница 1 ] --

Научно-исследовательский инновационный

центр микробиологии и биотехнологии

Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии

ВОПРОСЫ

МИКРОБИОЛОГИИ,

ВИРУСОЛОГИИ, ЭПИЗООТОЛОГИИ,

ВеТеРИнаРнО-СанИТаРнОй ЭКСПеРТИЗЫ

И БИОТеХнОЛОГИИ

Материалы Международной

научно-практической конференции

АгрАрНАя НАУкА и обрАзовАНие НА

совреМеННоМ этАпе рАзвития:

опыт, проблеМы и пУти их решеНия 26-28 мая 2009 года том IV УЛЬЯнОВСК - 2009

Научно-исследовательский инновационный

центр микробиологии и биотехнологии

Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии

ВОПРОСЫ

МИКРОБИОЛОГИИ,

ВИРУСОЛОГИИ, ЭПИЗООТОЛОГИИ,

ВеТеРИнаРнО-СанИТаРнОй ЭКСПеРТИЗЫ

И БИОТеХнОЛОГИИ

Материалы Международной

научно-практической конференции

АгрАрНАя НАУкА и обрАзовАНие НА

совреМеННоМ этАпе рАзвития:

опыт, проблеМы и пУти их решеНия 26-28 мая 2009 года том IV УЛЬЯнОВСК - 2 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», Ульяновск:, гсхА, 2009, т. 4, - 153 с.

редакционная коллегия:

А.в.Дозоров, ректор (гл. редактор) в.А.исайчев, Д.А. васильев, с.Н.золотухин Авторы опубликованных статей несут ответственность за патентную чистоту, достоверность и точность приведенных фактов, цитат, экономико статистических данных, собственных имен, географических названий и прочих сведений, а также за разглашение данных, не подлежащих открытой публика ции. Статьи приводятся в авторской редакции.

печатается по решению кафедры на средства научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии УгсхА ISBN 978-5-902532-56- Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Вступление.

Предлагаемый тематический сборник научных работ «Вопросы микро биологии, эпизоотологии, ветеринарно - санитарной экспертизы и биотехноло гии» выпускаемый кафедрой с 1990 года является восьмым. Будем надеяться, что традиция, которой уже двадцать лет не прервётся и продолжится. За послед ние два года к данному циклу сборников научных работ сотрудников кафедры и наших коллег из НИИ прибавилось два сборника с аналогичным названием.



Они выпускаются по итогам межвузовских студенческих научных конференций «Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии», которые проводятся кафедрой МВЭиВСЭ УГСХА.

Заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно - санитарной экспертизы УГСХА, доктор биологических наук, профессор, академик РАЕН Д.А. Васильев.

4 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии УДК обеспечеНие эпизоотической безопАсНости по лейкозУ крУпНого рогАтого скотА в УльяНовской облАсти Н.И. Пелевина, Ю.Н. Маркин Управление ветеринарии Ульяновской области Лейкозы сельскохозяйственных животных в настоящее время – одна из наиболее острых общебиологических и социальных проблем. Лейкоз крупного рогатого скота в структуре инфекционной патологии животных в Российской Федерации в последние годы занимает первое место. Такое же положение и в Ульяновской области, из инфекционных болезней в 2008 году 45 % занимает лейкоз.

Таблица 1.

Сальмонеллёз 7% Пастереллёз 18% Лейкоз 45% Колибактериоз 30% Заболевание наносит экономический ущерб из-за недополучения моло ка, приплода, племенного молодняка, преждевременной выбраковкой коров и быков-производителей, расходов на проведение оздоровительных мероприятий и создаёт не безопасность населению.[1] [3][12] На 1 января 2008 года в субъектах РФ имелось 2411 неблагополучных пунктов по лейкозу крупного рогатого скота, заболело 54 тыс. голов.[8] Большое количество неблагополучных пунктов имеется в смежных об ластях и республиках (Самарская, Саратовская, Пензенская, Мордовия, Чува шия, Татарстан) от 40 до 130 неблагополучных пунктов.

В Ульяновской области количество неблагополучных пунктов вольирует с 1977 года по 2008 год с 3 до 26 (таблица 2). За этот период оздоровлено 8 хо зяйств. Период вспышек и увеличения неблагополучных пунктов наблюдался в период 1992 – 1997 гг и 2006 – 2008 гг.

Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии На 1 января 2009 года в области зарегистрировано 26 неблагополучных пунктов по лейкозу.

Таблица 2.

Таблица № Количество неблагополучных пунктов 18 17 17 16 16 16 пункты 15 15 13 10 10 5 5 5 5 4 4 4 3 3 3 1977 1978 1979 1980 1981 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 Основной причиной распространения лейкоза в области явился ввоз по головья тёлок и быков-производителей из неблагополучных регионов Советско го Союза в период 1975 – 1984 гг. - это Прибалтика, Ленинградская, Московская, Смоленская, Воронежская области;

Украина, Белоруссия (включая Чернобыль скую зону) и быков-производителей в областное племенное объединение из ФРГ (из 5 голов – 3 реагировали положительно по РИД на лейкоз). За этот пери од на 80 % был заменён районированный скот бестужевской и симментальской породы на менее устойчивый чёрно-пёстрый.

Сохранению лейкоза способствует не выполнение в хозяйствах организационно-хозяйственных мероприятий – отсутствие нумерации скота, искусственного осеменения, родильных отделений и изоляторов, наличие до статочного количества нетелей для замены больных коров.[7] [10] Одним из факторов сдерживания распространения лейкоза в хозяйствах области является регулярные лабораторные исследования, которые делают воз можность контролировать лейкозную ситуацию, изолировать носителей и убой больных – основного источника болезни.





До 1989 года не была утверждена реакция РИД по выявлению вирусо носителей, исследования проводились только по гематологии (поздняя стадия заболевания), что не давало своевременно защищать от лейкоза крупный рога тый скот, а только сдерживать его рост. С 1977 года исследовано по гематологии 23734,4 тыс. голов, выделено было 31940 гембольных – 1,3 % от исследованных.

Процент выделения больных с 2004 – по 2008 гг снизился с 5,3 % до 0,3 %.

6 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Таблица 3.

Таблица Исследование по гематологии (в тыс. гол.) 170, 155,8 154, 137, 123, 114, 109 109, 105, 100 92, 91, 83, 77,176, 73, 71, 61, 60 59, 56,1 55, 50,450,5 49,1 48,249, 46,7 46, 43, 40 40, 24, 1977 1978 1979 1980 1981 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 год Таблица № Выявлено больных, голов 2500 1923 1808 297 280 231 228 218 184 181 157 1977 1978 1979 1980 1981 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 Всё больное поголовье изолируется и сдаётся на убой.

С 1991 года внедрена совершенная ранняя серологическая диагностика на лейкоз по РИД, что позволило проводить качественное исследование ввози мого скота, животных общественного и частного сектора в области. [6] [9] С 1987 года в хозяйствах исследовано серологически 1390,4 тыс. голов, выделено положительно реагирующих 201,9 тыс. голов или 14,5 % к исследо ванным. За три года (2006 – 2008 гг) процент заражённости лейкозом крупного рогатого скота снизился с 29,6 % до 20,3 %. Большое количество исследований были проведены в 1989 – 1993 гг в период массового ввоза чёрно-пёстрого скота Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии и составил 84,3 тыс. голов – 182,6 тыс. голов – 124,7 тыс. голов, процент зара жённости составил от 13 % до 12,6 – 11,2 %. В настоящий период 2005 – гг исследования снизились из-за уменьшения поголовья в хозяйствах области и составляет 51,4 тыс. голов – 48,9 тыс. голов.

Таблица 4.

Таблица № Диаграмма результатов исследований крупного рогатого скота на лейкоз по серологии в количество общественном секторе по Ульяновской области за 1987 - 2008 гг.

голов (тыс.) 182, Количество голов (тыс.) РИД положительно реагирующ ие 160 153, Количество голов (тыс.) 140 132,7 исследованных по РИД 124, 84, 78, 80 57, 60 51,4 48, 42,8 39,8 40, 37,6 35,6 36, 40 30,8 30,2 28,2 27, 27, 23, 19, 15,8 14,2 14, 20 13,4 12, 11 9, 9,5 8, 7, 7,5 6,3 6,2 5, 5,6 5, 4,5 4,6 3, 2, 2, 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 Все районы и хозяйства области разбиты по степени носительства виру са лейкоза: до 10 % - 4 района, до 30 % - 15 районов, свыше 30 % - 3 района.

Большой процент носительства лейкоза сохраняется в Барышском райо не – 43,6 %, Мелекесском – 40,8 %, Сенгилеевском – 43,5 %, Карсунский – 30, %.

Вирусоносительство среди возрастных групп значительно снизилось.

(таблица 6) Половозрастные группы 2007 год 2008 год Тёлки от 6 до 12 мес. 15,2 % 13,7 % Тёлки от 1 г до 2-х лет 23,1 % 18 % Нетели 27,5 % 19,4 % Коровы 47,6 % 26,9 % Быки-производители 20 % 14,9 % Впервые в Ульяновской области с 2004 года проводятся исследования в частном секторе, гематологическим методом за этот период исследовано голов взрослых животных, выделено больных 1952 головы или 0,4 % от иссле дованных, за 2008 год – 0,2 %, что указывает на незначительное распростране ние лейкоза в личных хозяйствах граждан.

Учитывая серьёзную обстановку по лейкозу крупного рогатого скота Правительством Ульяновской области приняты неотложные меры по профилак 8 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии тике и ликвидации заболевания. Принят Закон Ульяновской области по обеспе чению благополучия животноводства в период 2005 – 2012 гг., где обращено внимание на своевременную диагностику лейкоза, финансирование противо эпизоотических мероприятий и оснащение ветеринарных лабораторий совре менным оборудованием и приборами, утверждена Министром сельского хозяй ства Ульяновской области Программа «По неотложным мерам профилактики и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота на 2007 – 2010 годы в хозяйствах Ульяновской области».

По каждому неблагополучному пункту разработаны оздоровительные мероприятия по ликвидации лейкоза с учётом процента вирусоносительства, утверждённые администрацией района, хозяйств и согласованы с управлением ветеринарии Ульяновской области, где обращено внимание на изолированное выращивание молодняка, подготовку нетелей для замены больных лейкозом жи вотных, закупку племенного скота из благополучных хозяйств других регионов РФ.

Особое внимание уделяется профилактике и оздоровлению от лейкоза племенных хозяйств, которых в области 18. Мероприятия по оздоровлению про водятся поэтапно, учитывая наличие вирусоносителей, племенной молодняк выращивается изолированно и продаётся после 2-х кратного отрицательного результата по РИД в хозяйства области и за её пределы.[4] [5] Со стороны Управления ветеринарии приняты серьёзные меры контро ля оздоровительных мероприятий, в каждом районе образованы оперативные группы при администрации районов, ежеквартально вопросы оздоровления хо зяйств от лейкоза рассматриваются на Коллегии Управления ветеринарии.

Оказана материальная помощь: за 2006 – 2008 гг. приобретено 19 спец машин, в т.ч. 6 дезустановок, 12 аэрозольных генераторов, спецодежды 300 ком плектов для районных ветеринарных станций, в 3-х ветеринарных лабораториях установлены современные диагностические комплексы – ИФА и ПЦР для ран ней диагностики лейкоза.

Вопросы профилактики лейкоза в области неоднократно рассматрива ются с приглашением ведущих учёных Москвы, Новосибирска. Казани, респу блик СНГ и из-за рубежа.

Планируется до 2012 года значительно сократить количество неблаго получных пунктов, улучшить безопасность лейкозной ситуации, что позволит обеспечивать жителей Ульяновской области доброкачественной продукцией животноводства.

Литература:

1. Апалькин В.А. Особенности эпизоотического процесса лейкоза круп ного рогатого скота в Алтайском крае. Эпизоотические профилактики и меры с инфекционными болезнями животных. Сб. научных трудов СОРАСХН. Ново сибирск, 1993 с. 105-111.

2. Бурба Л.Г., Валихов А.Ф., Горбатов В.А. и др. Лейкозы и злокаче ственные опухоли животных. Под редакцией В.П. Шишкова, Л.Т. Бурбы./ М.:Агропромиздат, 1988, с. 400.

3. Горбунов А.П., Кузнецов А.П. Лейкоз крупного рогатого скота в Во логодской области. Вологда, 2004, 70 с.

4. Гулюкин М.И., Замараева Н.В. Вирусная концепция лейкоза крупно Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии го рогатого скота. Тез. докл. науч. конф., посвящ. 50 летию Алтайского НИВС.

Барнаул. 1997, с. 29-30.

5. Кисилёв А.В. Пути передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота и отработка модели оздоровления племенных ферм от лейкоза. Дисс. кандидата ветеринарных наук. Новосибирск, 1991.

6. Нахмансон В.М. Современная концепция эпизоотического процесса лейкоза крупного рогатого скота. СО РАСХН, 1993 № 3, с. 48-50.

7. Разумовская В.В. Совершенствование мер борьбы с лейкозом крупно го рогатого скота в Алтайском крае. Проблемы профилактики и лечения заболе ваний сельскохозяйственных животных. Труды Свердловской НИВС. Екатерин бург. 1995, с. 71-73.

8. Рождественский И.К., Яременко И.А., Киш Л.К. Эпизоотическая си туация в РФ за 2007 год. Газета «Ветеринарная жизнь» № 9 май 2008 г.

9. Симонян Г.А., Колчин П.Д. с соавт. Новый метод борьбы с лейкозом «Молочное и мясное скотоводство». 1993. № 4 с.2-8.

10. Смирнов П.Н. и соавт. Система борьбы с лейкозом крупного рогатого скота с принципиальной схемой организации оздоровительной работы – рекомендации Новосибирская СО РАСХН 1991.

11. Смирнов Ю.П. Эпизоотология и ликвидация лейкоза крупно го рогатого скота. Сборник научных трудов НИВИ НВ РАСХН 1993 с. 3-11.

12. Татарчук А.Т., Донник И.М., Красноперов В.А.Уральская си стема оздоровительных противолейкозных мероприятий. Екатеринбург, 1996.

10 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии УДК 619:616.98:578:577. коНстрУировАНие рекобиНАНтНой плАзМиДы Для ДиАгНостических тест-систеМ, выявляющих вирУс АртритА-эНцефАлитА коз Е.И. Барышникова, С.Ж. Цыбанов, А.С. Казакова, А.С. Малоголовкин E.I. Baryshnikova, S.G. Tsybanov, A.S. Kazakova, A.S. Malogolovkin ГНУ всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии The SRI National Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology of Russia This article describes the research of recombinant plasmid with Caprine arthritis encephalitis virus gag-gene part insertion. This construction might be used as positive control PCR diagnostic system. The specificity of recombinant plasmid in PCR and Real Time PCR was checked.

Артрит-энцефалит коз (АЭК) – симптомокомплекс, характеризующийся развитием демиелизирующего энцефалита, прогрессирующего артрита и ин терстициальной пневмонии. Болезнь широко известна во Франции. Чаще вирус встречается в районах интенсивного козоводства – Европе, Австралии, США.

Поэтому основной задачей для ветеринарной службы РФ является предупре ждение импорта зараженного вируса АЭК скота. В настоящее время широко распространен прямой способ выявления генома вируса на основе полимераз ной цепной реакции (ПЦР). Одним из компонентов ПЦР тест-системы должен быть положительный контроль ПЦР (ПК), который является индикатором усло вий проведения реакции. Основными требованиями, предъявляемыми к ПК, яв ляются специфичность, легкая воспроизводимость (накопление) и длительный срок его хранения. В настоящее время имеет место использование плазмидного вектора, в который встроен ПЦР-продукт данного вируса заведомо известного размера.

Материалы и методы В качестве вектора для клонирования была выбрана плазмида pTZ57R, референс-штамм вируса АЭК (Европейский) (кат. № 75- 63). В качестве носите 63).

ля экспрессирующей конструкции выбраны компетентные клетки авирулентных штаммов. –-1 (). При работе использовали общепринятые мето. -1 ).

-1 ).

ды выделения нуклеиновых кислот и постановки молекулярно-биологических реакций (полимеразной цепной реакции (ПЦР), обратной транкрипции (ОТ ПЦР), рестрикции, лигирования [2] с применением ферментов фирмы и Fnts (Tq® ys, AMV Rvs Tnspts, T4 DNA s), набор реактивов для проведения R T ПЦР в присутствии интеркалирую щего красителя SYBR nI.

Результаты Подбор праймеров был осуществлен на основе анализа опубликованных Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии в nBnk первичных последовательностей геномов изолятов возбудителя АЭК с использованием прикладных программ Bdt 6.0 и O 6. Праймеры были подобраны на область начала -гена, т.к. она является консервативной и по -гена, зволяет производить дифференциацию от близкородственных вирусов (рис.1).

Для исключения возможности гибридизации рассчитанных праймеров с гено мами других организмов, они были проверены при помощи программы BASTn (http://www.nb.n.nh.v/BAST/), что позволило выявить комплементар ность рассчитанных праймеров с геномами только возбудителя АЭК.

Рис 1. Схема генома АЭК с указанием расположения рассчитанных праймеров Примечание:

1. Стрелками указаны участки расположения генов вируса АЭК 2. TR U5, TR U3 – длинные концевые повторы 3`и 5`-концы Проводили однораундную ПЦР с предварительной ОТ-ПЦР. Комплемен тарную ДНК (кДНК) получали в результате предварительного отжига прайме ров при 72С в течение 5 мин и последующего синтеза кДНК при 42С в течение 30мин. Затем проводили ПЦР при следующих температурных режимах: денату рация при 95С-3мин 10с х 1цикл;

95С-20с, отжиг - 56С-15с, элонгация - 72С 23с х 40 циклов [3]. В результате реакции получили ПЦР-продукт размером пар оснований (п.о.).

Для клонирования провели очистку ПЦР-продукта от агарозного геля с помощью экстракции смесью фенол-хлорофор-изоамиловый спирт (25:25:1) и преципитации этанолом. Осаждённую ДНК растворили в деионизованной воде Лигирование проводилось по Т-концам в области мультиклонировочно го сайта плазмиды pTZ57/R/T с использованием 5 ед.акт. Т4 ДНК-лигазы при 140С в течение 2 часов.

Затем проводили трансформацию в компетентных клетках -1. В ре -1.

зультате было получено 58 клонов белого цвета, среднего размера ( 0,7-0,8мм).

Для дальнейшего скрининга отобрали пять колоний клеток., содержащих рекомбинантную плазмиду. Клоны выращивали в среде 1SOB, содержащей ампицилин, при 370С в течение 18 часов. Плазмидную ДНК (pDNA) выделяли методом экстракции смесью фенол-хлороформ-изоамиловый спирт (25:25:1) и последующей преципитацией этанолом.

12 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Рис 2. Схематичное изображение исходной плазмиды и рекомби нантной плазмиды, полученной в ходе молекулярнобиологических мани пуляций 1 2 3 4 5 М 6 7 8 Рис. 3. Электрофореграмма продуктов ПЦР, полученных из ДНК, выде ленной из клеточных клонов..

Трек 1 – клон. pTZ57R/1/3 разведение 1:10 (0,2 µ на реакцию);

Трек 2 – клон. pTZ57R/1/3 разведение 1:10 (0,5 µ на реакцию);

Трек 3 – клон. pTZ57R/1/3 разведение 1:10 (1 µ на реакцию);

Трек 4 – клон. pT57R/1/3 разведение 1:100 (0,2 µ на реак 57R/1/ R/1/ /1/ 1/ 1/3 цию);

Трек 5 – клон. pT57R/1/3 разведение 1:100 (0,5 µ на реак 57R/1/ R/1/ /1/ 1/ 1/3 цию);

Трек 6 – клон. pT57R/1/3 разведение 1:1000 (0,5 µ на реак 57R/1/ R/1/ /1/ 1/ 1/3 цию);

Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Трек 7– исходная плазмида pTZ57R не несущая ДНК-встройки Трек 8 – исходная плазмида pTZ57R не несущая ДНК-встройки Трек 9 – отрицательный контроль ПЦР М – маркер молекулярного веса 100 п.о.

Анализировали возможность использования выделенной плазмидной ДНК для ПЦР в качестве положительного контроля с диагностическими прай мерами к -гену вируса АЭК. В качестве матрицы использовали необработан -гену ную рестриктазами плазмидную ДНК. При оптимизации реакции наилучшие результаты были получены при нагревании pDNA до 98С в течение 5 мин. с последующим быстрым охлаждением проб при помещении их в лед или замо роженный песок перед постановкой ПЦР.

Для подбора оптимальной концентрации матрицы для ПЦР были при готовлены разведения 1:10, 1:100, 1:1000. Результаты представлены на рис3.

Для изучения эффективности использования полученную рекомбинант ную плазмиду анализировали в R T ПЦР в присутствии интеркалирую щего красителя SYBR n I. Путем варьирования количества праймеров (0,5 1,5µ), матрицы 1:1000 (0,2-1 µ), dNT (2-3 µ), MC2 (2-3 µ) были подобраны оптимальные соотношения компонентов реакционной смеси: матрица 1: – 0,5 µ, праймеры 1,5 µ концентрацией 10 p.., MC2 – 2,5 µ, dNT– 2,5 µ.

Реакцию проводили на приборе Rt n 6000 (Cbtt Rsh).

Выводы.

В результате исследований нами была получена рекомбинантная плаз мида, несущая встройку -гена вируса АЭК размером 178 п.о. Специфичность рекомбтнантной плазмиды проверена в ПЦР и R T ПЦР. Полученная кон струкция может быть использована в качестве ПК в тест-системе для выявления вируса АЭК методом ПЦР и R T ПЦР.

Литература:

1.Инфекционная патология животных: В 2т./ под ред. А.Я. Самуйлен ко, Б.В. Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С. Воронина.-М.:ИКЦ «Академкнига», Т.1.-2006.-1911с.

2. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клони рование / Т. Маниатис, Э. Фриг, Дж. Сэмбрук // М.: Мир. – 1984.- 480 с.

3. Методические рекомендации по выявлению РНК вируса артрита энцефалита коз методом полимеразной цепной реакции/РАСХН;

ГНУ ВНИИВ ВиМ. – Покров, 2006.-13с.

14 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии УДК: 619:616-036.22:616.98:578. оцеНкА зАболевАеМости листериозоМ в УльяНовской облАсти ESTIMATION OF DISEASE THE LISTEROSIS IN THE ULYANOVSK AREA Д.Н. Хлынов, А.М. Фуныгин, И.В. Семенков D.N.Hlynov, A.M.Funygin, I.V.Semenkov Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии, УГСХА The Research innovative centre of microbiology and biotechnology, The Ulyanovsk state agricultural academy Last years growth of development of branch of animal industries becomes perceptible. So, in territory of the Ulyanovsk area cattle-breeding complexes in No vomalyklinsky and Cherdaklinsky districts are already placed in operation. Build ing of pig-breeding complexes in Veshkajmsky and Nikolaevsk districts is planned.

In this connection the livestock of agricultural animals will increase and the risk of occurrence of disease will be enlarged by a listerosis.

Листериоз - инфекционное заболевание животных и человека, харак теризующееся септическими явлениями, поражением центральной нервной си стемы и генитального аппарата. Эта инфекция встречается на всех континентах, в странах с различными социально-экономическими и климатическими усло виями у разных домашних, диких животных и человека. Листериоз не является сезонным заболеванием, часто связан с погрешностями в кормлении. В основ ном протекает в виде отдельных случаев, но иногда может принять характер энзоотии. Молодняк заболевает чаще, чем взрослые животные. Особенно под вержен заболеванию мелкий рогатый скот.

Источниками и путями передачи инфекции служат больные и переболев шие домашние и безнадзорные кошки и собаки, попугаи (контактный путь пере дачи), грызуны, которые своими экскрементами инфицируют корма, воду, под стилку, инфицированные овощи и другие пищевые продукты (алиментарный путь), а также женщины - носители в период беременности (трансплацентар ный, вертикальный путь). Заражение происходит в основном через желудочно кишечный тракт, но возможно аэрогенное инфицирование, а так же через конъ юнктиву.

Впервые диагноз на листериоз на территории Ульяновской области был поставлен в конце 50-х годов. Постоянная регистрация вспышек листериоза появилась с середины 80-х годов.

Согласно данных управления ветеринарии Ульяновской области за по следние пять лет заметен резкий спад заболеваемости животных листериозом.

Это напрямую связано с сокращением численности поголовья сельскохозяй ственных животных. Редкие вспышки листериоза встречаются в частных сек торах Ульяновской области. Так в 2004 году в Сенгилеевском районе листериоз был установлен с плода абортированного овцой. В 2006 году на территории Ба Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии рышского района листериоз был зафиксирован у свиньи. В 2007 году в Меле кесском районе возбудитель заболевания был выявлен так же с патологического материала павшей свиньи.

В последние годы отмечается рост развития отрасли животноводства.

Так, на территории Ульяновской области уже введены в эксплуатацию живот новодческие комплексы в Новомалыклинском и Чердаклинском районах. Запла нировано строительство свиноводческих комплексов в Вешкаймском и Нико лаевском районах. В связи с этим возрастет поголовье сельскохозяйственных животных и увеличится риск возникновения заболевания листериозом.

Редкие сообщения о заболевании листериозом у людей связаны и с малым числом практических лабораторий, способных выделять листерию или обнаруживать антитела к ней. Несмотря на относительно невысокую заболе ваемость человека, случаи смертельных исходов у заболевших регистрируются часто, а среди новорожденных - даже в 70-80%.

Высокая летальность при листериозе связана с тяжелыми клиническими формами: сепсисом у новорожденных и листериозным менингоэнцефалитом у взрослых, которые регистрируются ежегодно. Число летальных случаев в по следние шесть лет возросло.

Помимо беременных и новорожденных, листериоз наиболее часто по ражает людей пожилого и старческого возраста, у которых регистрируются наи более тяжелые формы болезни У человека листериоз характеризуется многообразием клинических форм: глазо-железистая - 49,44%;

ангинозно-железистая - 2,22%;

менингиаль ная - 13,35%;

септическая - 17,22%;

смешанная (в том числе в виде носитель ства) - 17,77%.(По данным Центра Гигиены и эпидемиологии).

Всего в 2007 году в Поволжье зарегистрировано 10 случаев листериоза, в том числе 2 случая у детей (в 2006 году - 13 случаев). Зарегистрированы пять летальных исходов.

Остается актуальной проблема заболеваемости листериозом среди бере менных женщин. В 2007 году зарегистрировано 2 случая заболеваний у женщин с отягощенным акушерским анамнезом, наблюдавшихся в женских консульта циях.

По данным Ульяновского областного центра гигиены и эпидемиологии за период с 2000 – по 2007 год по Ульяновской области зафиксировано 11 случа ев заболевания листериозом.

st nytns - мелкая подвижная палочка, не образующая спор и хорошо окрашивающаяся по методу Грама. Она относится к группе корине бактерий, среди которых наиболее известна дифтерийная палочка, поэтому бак териологи часто первоначально диагностируют листерию как дифтероид (т.е.

подобную дифтерии) и лишь в результате дополнительных исследований раз личают эти бактерии между собой.

Она способна размножаться при 4-6°С в почве, воде, на растениях, пи щевых продуктах. Поэтому листерий способны накапливаться при хранении продуктов в домашних холодильниках, когда многие другие бактерии гибнут или прекращают размножаться и не составляют конкуренции для значительного увеличения микробной массы листерий. Такая особенность микробов объясняет распространенное название листерий как “микроб холодильника”. В этой связи хранение зараженных пищевых продуктов в холодильниках не предотвращает, а 16 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии часто, наоборот, способствует листериозу у людей при отсутствии дополнитель ной обработки таких продуктов. Аналогичным образом соление овощей, молоч ных и мясных продуктов, которое губительно для многих микробов, помога ет размножению листерий, выдерживающих 6-20% концентрации поваренной соли. Наиболее часто заражение происходит при контакте с больными живот ными и птицей или при употреблении инфицированных продуктов животного происхождения или растительных, загрязненных выделениями животных или почвой - обычной средой обитания листерий. Среди таких продуктов наиболь шую опасность представляют салаты из сырой капусты, мягкие сыры, мясные полуфабрикаты, в том числе из птицы. Сырое мясо и мясные продукты могут быть заражены в 30-50%. Возможность заражения листериозом значительно возрастает в случаях профессиональной связи человека с животными, птицей или сырьем. Поэтому работники животноводческих ферм, птицефабрик, мясо комбинатов, молокозаводов, пищеблоков и другие составляют группу риска.

В большинстве случаев Листериоз регистрируется в виде гастроэнте ритической формы, которая проявляется тошнотой, рвотой, болями в животе, поносом обычно на фоне повышения температуры тела до 38-39°С. Листериоз может ограничиться указанной симптоматикой, однако нередко через 3-4 дня состояние больного внезапно резко ухудшается и определяются признаки по ражения центральной нервной системы (ЦНС) в виде менингита, энцефалита или их сочетания.

Диагностика листериоза представляет значительные трудности в связи с многообразием клинических проявлений и сходством с рядом других более часто встречаемых заболеваний (токсоплазмоз, сифилис, герпетическая, стафи лококковая инфекция, иерсиниоз и т.д.). Поэтому диагноз не может быть уста новлен только на основании клинической картины. Данные анамнеза, в том чис ле эпидемиологического, в сочетании с характерной клиникой позволяют лишь предположить листериоз. Для подтверждения диагноза необходимо лаборатор ное исследование крови, и выделений больного, которое заключается в обна ружении листерии или нахождении в сыворотке крови специфических антител, уровень которых нарастает в динамике болезни.

На сегодняшний день есть необходимость усовершенствования методик по диагностике данного заболевания, а также методик выделения листерий из пищевых продуктов.

Значение диагностики и идентификации листерий в пищевых продуктах очень велико, и учитывая то что знания о механизме развития заболевания углу бляются и расширяются есть основания думать что все вопросы связанные с ранней диагностикой и профилактикой листериоза со временем будут решены.

Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии УДК 615.371: иММУННо-биологическАя АктивНость МикрокАпсУлировАННой ДНк С. Ю. Белов S.Yu. Belov ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии (Владимирская область, Покров, Россия) State Research Institution the National Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology of Russia (SRI NRIVVaMR) of the Russian Agricultural Science Academy, Pokrov, Vladimir region, Russia.

Работа относится к области нанотехнологий и технологиям соматической генной терапии. Представлены результаты получения микрокапсул и иммобилизации в них ДНК вируса болезни Ауески и плазмидной ДНК. Микрокапсулирование ДНК может быть использовано как способ доставки ДНК-вакцин.

The work covers nanotechnology and some technologies for somatic gene therapy. Some results for production of microcapsules for Aujeszky’s disease virus DNA and plasmid’s DNA and immobilization within them are represented. DNA mi crocapsulation may be used as a DNA-vaccine delivery means.

Введение.

Одним из наиболее важных направлений прикладных исследований на сегодняшний день в медицине является поиск эффективного и безопасного ме тода доставки лекарственных препаратов и генно-инженерных конструкций в определенные зоны организма. Некоторые из разработанных методов являются эффективными, но не всегда безопасными, другие - вполне безопасны, но часто оказываются малоэффективными при доставке. Представляемая нами техноло гия доставки генетического материала с использованием нетоксичных наноча стиц и биополимеров представляется свободной от указанных недостатков. Не оспоримым преимуществом предлагаемого метода капсулирования и доставки является то, что не требует большого количества наработки генетического материала, поскольку это трудоемкий и дорогостоящий процесс.

Целью нашей работы являлась разработка получения микрокапсул с регулируемыми параметрами (диаметр, толщина оболочки, состав и проницае мость мембраны), способа инкапсулирования нуклеиновых кислот, а также ис следования в культуре клеток и на животных адресной доставки генетического материала.

Материалы и методы.

В работе использовали ДНК вируса болезни Ауески (ВБА) штамм МК 25 и плазмиду pTKSh, имеющую в своем составе участок генома, кодирующий полипептид Е2 вируса классической чумы свиней (КЧС), любезно предоставле на д.б.н. Н.Н. Власовой (ГНУ ВНИИВВиМ).

Для проведения инкапсулирования ранее [1,2] были отобраны 3 пары полимеров: поли––лизин / альгинат, ДЕАЕ– декстран / каррагинан и сульфат 18 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии хитозана / каррагинан, являющиеся биодеградируемыми и биосовместимыми полимерами и при формировании мультислойной оболочки образующими ме ханически прочную мембрану.

Синтез частиц СаСО3 проводили по методу Д.В. Володькина [2,4] ДНК включалась в микрочастицы одновременно с образованием частиц СаСО методом соосаждения, усовершенствованному О.Е.Селиной и др. [5,6].

Получение мультислойных полиэлектролитных микрокапсул проводили методом послойной адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов на сферические макропористые карбонатнокальциевые микрочастицы.

Процесс формирования микрокапсул, содержащих иммобилизованную ДНК, включал три основные стадии, которые представлены на рисунке 1:

Рис.1. Схематическое изображение формирования многослойной мембраны путем последовательной адсорбции ПЭ.

Рис. 2 Фотографии CaCO3 микрочастиц и полых микрокапсул, полученных на их осно ве. А, В- микрочастицы CaCO3;

С, D- полые ПЭ микрокапсулы;

электронная микроскопия, х Результаты.

Электронно-микроскопические исследования микрокапсул с заключен ной в них ДНК показали, что размер микрокапсул составляет 1-2 мкм, а толщи на оболочки 0,2 мкм.

Для оценки эффективности переноса ДНК в эукариотические клетки была выбрана ДНК вируса болезни Ауески (ВБА), т.к. ее введение в чувстви Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии тельную систему приводит к продуктивной вирусной инфекции, которую мож но наблюдать как n vv, так и n vt. Работу проводили в двух направлениях:

на животных и в культуре клеток.

Выделение и очистку ДНК осуществляли фенольно-детергентным ме тодом. Для выделения ДНК ВБА вирус концентрировали с помощью преципи тации с ПЭГ-6000 в 100 раз. При изучении сорбции ДНК в порах СаСО3, уста новлено, что максимальная сорбция ДНК ВБА из водного раствора составляла 85-90% от начальной концентрации.

С целью формирования стенки микрокапсул на микрочастицы СаСО3, содержащие ДНК ВБА поочередно наносили полимеры поли--лизина и альги ната с последующим растворением карбонатного матрикса.

Оценку биологической активности микрокапсулированной ДНК прово дили на кроликах.

Таблица 1. Эффект микрокапсулированной ДНК ВБА при введении кроликам Вид Форма заболева- Результат ПЦР Наличие ЦПД при ин живот- ния, (печень, мозг, селе- фицировании суспезией ного пал/выжил органов зенка) кроли- острая, гибель на + + ки 4-5 сутки, 2/ вялотекущая легоч ная форма, гибель + + на 21сутки, 2/ кроли- клинические при- - нет ки, кон- знаки не троль выявлялись Контрольным животным инокулировали нативную ДНК в водном рас творе. Кролики (50% животных), которым вводили ДНК в микрокапсулах в количестве 6 мкг, пали на 4 и 5 сутки, а у остальных на 6-7 сутки развилась легочная форма болезни. Контрольные животные оставались клинически здоро выми. 10% суспензию печени и мозга павших и забитых животных исследовали методом ПЦР со специфическими праймерами к p 50 ВБА.

ДНК вируса болезни Ауески была выявлена в печени и мозге, инфициро ванном суспензией органов животных, которым вводили ДНК в микрокапсулах.

В контрольной группе ДНК ВБА в суспензии органов не выявляли. Аналогич ные результаты были получены при инокуляции суспензии органов от павших кроликов в культуру клеток.

20 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Рис. 2. Результаты ПЦР-анализа для выявления ДНК ВБА:

Треки:

1- маркер 100 п.о.;

4- проба 10%-ой суспензии печени (кролик 2);

2- проба 10%-ой суспензии мозга (кролик 2);

5- ДНК ВБА (штамм МК-25);

3- проба 10%-ой суспензии мозга (кролик 1);

6- проба 10 %-ой суспензии печени (кролик 1);

При разработке генно - инженерных вакцин (ДНК-вакцин, или вакцин поколения) плазмидную ДНК (вектор) с встроенным геном протективного бел ка вводят непосредственно в организм животного. Поэтому исследовали индук цию антител у мышей в ответ на введение плазмидной ДНК в микрокапсулах различной композиции: (/A)3, (CH-2(d)/C)3, (ДЕАЕ-dxtn/C)3. Для трех групп опытных мышей (по 12 мышей в группе) был создан одинаковый режим содержания.

На 14-е сутки в сыворотках крови мышей, иммунизированных микро капсулами (CH-2(d)/C)3, наблюдали наиболее высокий титр антител. На 21-е сутки титры антител сывороток крови при иммунизации микрокапсулами (ДЕАЕ-dxtn/C)3 и (CH-2(d)/C)3 сравнялись и были в 3-4 раза выше, чем в случае иммунизации микрокапсулами (/A)3. (таб. 2) Таблица 2. Титр антител при иммунизации мышей микрокапсула ми разного состава, содержащими плазмиду pTKShi.

Взятие Титр антител крови, (/A)3 (CH-2(d)/C)3 (ДЕАЕ-dxtn/C) сутки 14 1:800-1:1600 1:6400-1:25600 1:6400-1: 21 1:3200-1:6400 1:12800-1:25600 1:12800-1: Примечание: Титр нормальной сыворотки белой мыши (0) – 1: Как видно из данных, представленных в таблице, при введении одина кового количества инкапсулированной плазмидной ДНК, индукция антител за висела от композиционного состава микрокапсул.

Определение титра специфических антител в сыворотках крови мышей, Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии инокулированных препаратами плазмид проводили методом непрямого твердо фазного ИФА. Результаты оценивали спектрофотометрическим методом с по мощью Mutskn MCC 340 (bsysts, Fnnd) при = 405 нм.

Выводы.

Использование описанного выше метода доставки генетического мате риала с использованием микросфер в ветеринарной медицине позволит не толь ко эффективно доставлять биологически активные молекулы сквозь различные барьеры организма, которые они не способны преодолевать самостоятельно (ферментные системы макроорганизма), но и существенно снижать эффектив ную дозу вводимого препарата.

Литература:

1. A. Btkwk, W. Byk,, y 51 (7-8), (2006), 547- 2. Btkwk A., Wndy Ch., Hunk D. // Abstt Bk f snd Intntn Sypsu n ytyts, Tndh, Nwy 1998,. 14.

3. Mht R. I., Tkku Y., Hshd M. (1997). J. Du Ttn. 4, 337 4. tv A.I., Vdkn D.V., Sukhukv.B. (2005) Bthn.., 21, 918-925.

5. В.И. Балышева, Н.Н. Власова, О.Е. Селина, С.Б. Белов, Е.А. Маркви чева, Г.Б. Сухоруков, Российский ветеринарный журнал. 2007. №1, стр. 25-26.

6. О.Е. Селина, С. Ю. Белов, Н.Н. Власова, В.И. Балышева и др., Био органическая химия, V 35,№ 1, 2009. 113- рАзрАботкА систеМы тестов Для выДелеНия и иДеНтификАции PSEUDOMONAS PUTIDA Викторов Д.А., Богданов И.И., Шестаков А.Г., Васильев Д.А.

Working out of the scheme of allocation and system of tests for identification Pseudomonas putida.

sudns putd – важный в научном и практическом отношении ми кроорганизм, широко населяющий биосферу и принимающий активное участие в её процессах. Штаммы данной бактерии крайне гетерогенны в отношении ис точников углеродного питания, ассимилируют от 32 до 84 различных субстра тов, благодаря чему sudns putd используют для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. sudns putd является возбудителем псевдо моноза у прудовых рыб, сопровождающееся массовой гибелью рыбы, а также причиной возникновения язвенных и гнойных ран кожи у морских млекопитаю щих. В ряде случаев вызывает гнойно-воспалительные процессы у человека и животных, приводя к таким заболеваниям как инфекции нижних дыхательных путей, абсцессы, бактериемию, раневую инфекцию, инфекции мочевыводящих путей. (Vnnt J,1995) Кроме того, sudns putd является фитопатоге Vnnt ном, поражающим различные растения (Беляков, Ряпис, 1988;

Sznk, 1991 и др.) Однако, в других случаях, широко населяя ризосферу, играет важную роль 22 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии в защите растений от бактериальных и грибных заболеваний, что позволяет ис пользовать их в качестве средств биологической борьбы с вредителями сельско го хозяйства, а так же для стимуляции роста растений.

Выше перечисленные причины, наряду с отсутствием достоверных ме тодов лабораторной идентификации псевдомонад, обуславливают научный и практический интерес к sudns putd.

Целью исследования является разработка схемы выделения и системы тестов для идентификации sudns putd. Выделение данного микроорга.

низма из объектов окружающей среды с использованием разработанной схемы.

В качестве образцов для исследования использовали сточные воды го рода Ульяновска.

Первоначальным этапом схемы выделения являлся посев 1 мл исследуе мого субстрата на 5 мл синтетической среды – бульон с сукцинатом натрия и солями следующего состава:

Сукцинат натрия – 4 г, Нитрат калия – 0,5 г, Фосфат калия двузамещённый – 0,5 г, Сульфат магния – 0,2 г, Хлорид кальция – 0,1 г, Вода дистиллированная – 1 л.

Сукцинат натрия в данной среде служит единственным источником углерода и доступен в качестве питательного субстрата для бактерий нефермен тирующей группы. Нитрат калия служит источником азота, фосфат калия дву замещённый, сульфат магния и хлорид кальция необходимы для обеспечения биохимических процессов в клетках sudns putd.

После 48-72 часов культивировния при оптимальной для sudns putd температуре (23-25C), наблюдалось помутнение прозрачного бульона, образование поверхностной плёнки, осадка, в некоторых случаях окраска среды в желтовато-зеленоватый цвет, очевидно, за счёт выделяемых бактерией пиг ментов.

Из бульона с сукцинатом натрия и солями производили посев по методу Дригальского на чашки Петри с средой Хью-Лейвсена, в которую добавляли фурадонин в качестве ингибирующего агента, подавляющего рост грамполо жительных палочек и кокков и грамотрицательных палочек семейства nt bt. (Афонин Э.А., 1999) После культивирования на данной среде с её поверхности отвивали колонии различной морфологии, но дающие положи тельную реакцию, то есть, утилизирующие глюкозу путём окисления.

На этом этапе, при использовании разработанной нами схемы выделения и питательных сред, было выделено 65 штаммов, относящихся к бактериям не ферментирующей группы.

После получения чистых культур, проводилось исследование их биохи мических свойств по предлагаемым нами тестам:

- тест на оксидазу, - тест на каталазу, - рост на агаре с 0,2% хлоридом бария, - окраска по Граму и микроскопия, - тест на подвижность, Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии - рост при 4C, - рост при 41C, - рост на бульоне с ацетамидом, - тест на желатиназу.

Все 65 культур, были способны использовать сукцинат натрия в качестве источника углерода, давали положительную реакцию на среде Хью-Лейвсена, являлись оксидазо- и каталазоположительными. Для постановки теста на окси дазу использовался 1% раствор 2-N-диметилпарафенилендиамина, теста на ка N-диметилпарафенилендиамина, -диметилпарафенилендиамина, талазу – 3% раствор перекиси водорода, которые наносили на колонии бактерий на мясопептонном агаре. Способность к росту на агаре с 0,2% хлоридом бария проверялась, наряду с окраской по Граму и тестом на подвижность, с целью выявления родовой принадлежности исследуемых штаммов: большинство ви дов рода sudns не устойчивы к солям двухвалентного бария. Все псев домонады при окраске по Граму выявляются как грамотрицательные палочки, большинство видов, в том числе и sudns putd, подвижны благодаря на, личию полярных жгутиков.

Способность утилизировать ацетамид исследовалась для выявления вида sudns uns, большинство штаммов которого способны к его утилизации, в отличие от штаммов sudns putd, ни один из которых не способен утилизировать ацетамид.

sudns putd растёт в интервале температур от 4 до 28C (Смирнов, Киприанова, 1990), в связи с этим, все этапы культивирования проводили при температуре 23-25C. Способность к росту при 4C и 41C, а так же способность разжижать желатин, исследовались для дифференцирования sudns putd от штаммов других псевдомонад, отличающихся по этим признакам, в частно сти, от 29 видов: sudns uns, sudns usns, sud, usns,, ns ns, sudns yphy, sudns p, sudns hphs, sudns h, sudns dnut, sudns fs, sudns d, sudns, sudns ndn, sudns pktt, sudnsn psudns, sudns psud, sud,,, ns shph, sudns syn, sudns vsus, sudns vdv.

Оценка способности к росту при 4C и 41C проводилась культивирова C C нием в питательном бульоне при соответствующей температуре в течении часов. Если спустя указанное время питательный бульон с внесённой культурой не приобретал характерного помутнения, результат теста считался отрицатель ным. Определение фермента желатиназы (тест на разжижение желатина) прово дили по стандартной методике – путём засева чистой культуры уколом в столбик застывшего 15%-ного раствора желатина в питательном бульоне с последующей инкубацией при оптимальной для исследуемой культуры температуре. (Сидо ров М.А., 1995) После выполнения всех вышеперечисленных тестов нами были получе ны результаты, приведённые в таблице 1.

24 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Таблица 1. Результаты тестов, проведённых на 65 выделенных штаммах Количество штаммов с Процент штаммов с положи положительными для тельными для sudns Тест sudns putd ре- putd результатами зультатами Рост на бульоне 65 с сукцинатом на трия Реакция на среде 65 Хью-Лейвсена Оксидаза 65 Каталаза 65 Рост на агаре 65 с 0,2% хлоридом бария Окраска по Граму 65 Подвижность 64 98, Рост при 4C 65 Рост при 41C 64 98, Рост на бульоне 64 98, с ацетамидом Тест на желати- 35 53, назу По данным определителя бактерий Берджи (1997), для вида sud ns putd характерны следующие результаты по указанным тестам:

Реакция, характерная для вида Тест sudns putd Способность утилизировать сукцинат + натрия Реакция на среде Хью-Лейвсена + Оксидаза + Каталаза + Рост на агаре с 0,2% хлоридом бария Окраска по Граму Подвижность + Рост при 4C + Рост при 41C Способность утилизировать ацетамид Тест на желатиназу Исходя из этих данных, нами был сделан вывод, что из 65 выделенных Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии культур, 32 штамма (49,2%) проявляют аналогичные свойства, что позволяет отнести их к виду sudns putd.

Таким образом, разработанная нами схема позволяет дифференцировать sudns putd от других видов бактерий и выделять данный микроорга низм из объектов окружающей среды.

Литература:

1. Беляков В.Д., Ряпис Л.А. Сапрофиты медицинского значения и при рода их патогенности на примере псевдомонад // Экология возбудителей сапро нозов. М., 1988. С.7-20.

2. Бухарин О.В., Литвин В.Ю. Патогенные бактерии в природных экоси стемах. Екатеринбург: УрО Ран, 1997. 277 с.

3. Определитель Берджи. В 2-х т.Т.1: Пер. с англ./Под ред. Дж.Хоулта, Н.Крига, П.Снита, Дж.Стейли, С.Уилльямса. – М.: Мир, 1997. – 432с.: ил.

4. Рубан Е.Л. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas.

М.: Наука, 1986.

5. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Федотов В. Б Определитель зоопа тогенных микроорганизмов. М.: Колос, 1995. – 391с.: ил.

6. Смирнов В.В., Киприанова Е.А. Бактерии рода Pseudomonas. Киев.

Наукова думка, 1990, с. 176-187.

7. Cpn.,Russ M.V vntn by Pseudomonas putida f th bn zn uutn n tu nd n tssus (pt study). xp Ony 2002;

24:

231-233.

8. un CM, Vujh, Ndn MS t. Ipt f BA dt n th th py nd ut f vntt-sstd pnun. Chst. 1997;

111(3): 677-85.

9. Sznk. Nuk nyss f sudns usns-putd hz pn nd tub suf pputn f th ptt utv Hunn Rs (Cntbu tn t th bty f tt) // At hytth. t nt. Hun., 1991. V.26.

N.3-4..3-4.

10. Vnnt J, Bn DJ, Sut M t. Th pvn f ns nftn n ntnsv n up. Rsuts f th upn pvn f nftn n ntnsv (IC) study. JAMA;

1995;

274(8): 639-44.

26 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии УДК 616.981.42.615. эпизоотология брУцеллезА крУпНого рогАтого скотА в региоНАх респУблики кАзАхстАН А.Т. Даугалиева ГУ «Национальный центр мониторинга, референции, лабораторной диагностики и методологии в ветеринарии»

We have analyzed epidemiology situations on brucellosis large horned live stock in republic for 2006-2008 y.y. in article.

Data of the official veterinary reporting show deterioration epidemiology conditions on brucellosis.

Республика Казахстан расположена в центре Евроазиатского материка.

Территория республики простирается от нижнего течения Волги на западе до Алтая на востоке на 3,0 тыс. км., от Западно-Сибирской равнины на севере до Тянь-Шанских горных хребтов на юге на 1600 км. Общая протяженность гра ниц Казахстана свыше 15 тыс.км., из них 12 тыс.км. сухопутных и более 3 тыс.

км. – водные (Каспийское и Аральское море). Большая протяженность границы с другими странами увеличивает риск заноса бруцеллезной инфекции в ранее оздоровленные районы Казахстана и наоборот. По величине площади среди Ре спублик СНГ Казахстан занимает второе место после Российской Федерации.

В административно- территориальном отношении республика разделена на областей. Внутри республики различают 5 внутри республиканских районов:

северный, центральный, южный, западный и восточный.

Проблема бруцеллеза, наиболее опасного в социально-экономическом отношении заболевания животных и людей в Республике Казахстан, несмотря на принимаемые усилия ветеринарных и медицинских специалистов, остается нерешенной.

Проблема бруцеллеза острая и актуальная для современного здра воохранения и ветеринарии, потому как ежегодно происходит выявление небла гополучных хозяйств. Эпизоотическая обстановка по бруцеллезу в Республи ке Казахстан остается неблагополучной и определяется наличием бруцеллеза среди сельскохозяйственных животных – мелкого и крупного рогатого скота, являющихся основным источником возбудителя бруцеллеза для людей. Забо леваемость людей бруцеллезом в любом конкретном районе мира очень точно отражает заболеваемость среди животных. В настоящее время в нашей респу блике мероприятия по ликвидации бруцеллеза проводятся на основе плановых диагностических исследований и последующего уничтожения положительно реагирующих животных [1,2,3].

Данные официальной ветеринарной отчетности за последние годы в Ре спублике Казахстан свидетельствуют о значительном обострении, ухудшении эпизоотической обстановки по бруцеллезу. Особую тревогу вызывает эпизо отическая ситуация в Республике по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота. Эпизоотическая ситуация в Республике по бруцеллезу крупного и мелко го рогатого скота за восьмилетний период остается напряженной.

Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Одной из особенностей краевой эпизоотологии бруцеллеза является неравномерно выраженная инфицированность животных. Общее количество неблагополучных пунктов по бруцеллезу с\х животных резко отличается по областям Республики. Наибольшее количество пунктов регистрируется в юго восточных регионах Республики.

В Республике Казахстан проводится большая работа по профилактике бруцеллеза благополучных и оздоровлению неблагополучных хозяйствующих субъектов. В связи с изменением форм собственности хозяйствующих субъек тов, культуры введения животноводства, происходит смещение акцентов при разработке способов прижизненной диагностики, средств специфической про филактики, а также систем мер борьбы с бруцеллезом животных. Наряду с оздо ровлением хозяйств от хронической инфекции, в благополучных сельхозформи рованиях продолжаются выделяться серологически реагирующие животные.

Таблица 1. Заболеваемость по бруцеллезу крупного рогатого скота за 2006-2008 г.г. в благополучных хозяйствующих субъектах.

Наимено- Исследовано (тыс) Выделено больных голов вание об- всего % зараженности № ластей 2006 2007 2008 2006 2007 2008 2006 2007 Акмолин 1 466,0 513,37 417,4 837 1150 2333 0,2 0,2 0, ская Актюбин 2 358,0 395,26 503,6 1985 2673 7649 0,6 0,7 1, ская Алматин 3 981,0 735,12 155,9 1074 730 845 0,1 0,1 0, ская Атырау 4 109,0 144,97 709,4 241 549 1226 0,2 0,4 0, ская 5 ВКО 733,0 697,2 743,1 1529 1549 5572 0,2 0,2 0, Жамбыл 6 383,0 269,42 409,3 507 542 2972 0,1 0,2 0, ская 7 ЗКО 527,0 469,41 437,8 2662 4988 4496 0,5 1,1 Караган 8 456,0 412,18 391,9 2890 3461 3606 0,6 0,8 0, динская Кызылор 9 251,0 219,03 253,3 328 251 473 0,1 0,1 0, динская Костанай 10 569,0 541,01 470,6 927 1126 4899 0,2 0,2 ская Манги 11 13,0 11,73 11, стауская Павлодар 12 346,0 371,62 311,6 2192 1667 3669 0,6 0,4 1, ская 13 СКО 383,0 623,0 312,8 308 292 365 0,08 0,05 0, 14 ЮКО 724,0 679,2 562,2 454 331 503 0,06 0,05 0, Итого: 6299,0 6082,52 5695,2 15934 19309 38608 0,3 0,3 0, 28 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии По данным таблицы 1 - в 2006 году в благополучных по бруцеллезу хо зяйствах было исследовано 6 299 000 крупного рогатого скота, при этом выделе но 15 934 реагирующего скота в 676 хозяйствующих субъектах. Сдано на убой 15 919 животных, осталось на передержке 17. В 2007 году было исследовано 6 082 520 крупного рогатого скота, при этом выделено 19 309 реагирующего скота. В 2008 году было исследовано 5 695 200 крупного рогатого скота, при этом выделено 38 608 реагирующего скота. Число реагирующих на бруцеллез скота в благополучных хозяйствах колебалось от 0,3% (2006-2007 г.г.) до 0,7 % (2008г.).

За 2006-2008 годы в благополучных по бруцеллезу регионах отмечено повсеместное выделение реагирующих (в 13 областях республики), за исклю чением Мангистауской области, специализирующейся на разведение верблюдо водства.

Анализ данных по эпизоотической ситуации по бруцеллезу крупного рогатого скота за трехлетний период наблюдения 2000-2003 идет на спад (с неблагополучных пунктов до 9 соответственно). Начиная с 2004 года по год, наблюдается рост заболеваемости (с 25 неблагополучных пунктов до 47).

На конец 2008 года регистрируется 47 н/п пункта.

Таблица 2. Заболеваемость по бруцеллезу крупного рогатого скота за 2006-2008 г.г. в неблагополучных хозяйствующих субъектах.

№ Наименование Выделено больных голов Неблагополучных пун п.п. областей ктов всего 2006 2007 2008 2006 2007 1 Акмолинская 2 Актюбинская 374 184 8 3 Алматинская 11509 4 Атырауская 5 ВКО 419 693 55196 6 2 6 Жамбылская 7 ЗКО 1115 1378 19101 6 8 8 Карагандин- 477 422 21022 6 4 ская 9 Кызылордин- 6527 ская 10 Костанайская 11964 11 Мангистауская 12 Павлодарская 677 700 27290 8 8 13 СКО 12 14 ЮКО 142 102 2 Итого: 3216 3479 152609 68 26 По данным таблицы 2- за 2006 г. в неблагополучных пунктах выделено по серологическим исследованиям реагирующих животных 3 216. За 2007 г.

Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии выделено реагирующих животных 3 479, в 2008 г. – 152 609. В 2008 г. в ре спублике на конец года осталось 47 неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота пункта. Для сравнения, в 2007 г. в республике числилось неблагополучных пункта;

в 2006 г. – 38 неблагополучных пункта. В результа те проведения мероприятий оздоровлены от бруцеллеза полностью 2 пункта в Северо-Казахстанской области и 2 в Южно-Казахстанской. Наиболее неблаго получная обстановка по бруцеллезу КРС за период 2006-2008 гг. складывается в таких областях как: Восточно-Казахстанская и Западно-Казахстанская, Павло дарская, Карагандинская. Динамика роста неблагополучных пунктов идет с во влечением в этот процесс ранее благополучных по этой инфекции территорий (Алматинской, Кызылординской, Костанайской областей).

Интересно отметить, что неблагополучные пункты по бруцеллезу круп ного рогатого скота регистрировались в 6 областях в 2007 г., в 7 областях - в 2006 и 2008 г.г.

Результаты исследования животных приведены в таблице 3.

Таблица 3. Количество реагирующего на бруцеллез крупного рога того скота, выявленного в неблагополучных и благополучных сельхозфор мированиях Республики Казахстан за 2006 -2008 годы.

№ Реагирующие животные в разных пун- 2006 2007 п/п ктах Число животных 1 Выделено реагирующих в неблагополуч- 3 216 3 479 152 ных пунктах 2 Выделено реагирующих в благополуч- 15 934 19 309 38 ных пунктах 3 Выделено реагирующих в неблагополуч- 19 150 22 788 191 ных и благополучных сельхозформиро ваниях ВСЕГО:

Как видно из таблицы 3, за этот период времени, в них выделено по се рологическим исследованиям реагирующих животных в неблагополучных пун ктах соответственно 3 216;

3 479;

152 609.

Таким образом, анализ официальных ветеринарных данных эпизоотиче ской ситуации по бруцеллезу животных показывает, что заболевание, к сожале нию, еще распространено во всех регионах республики.

Литература:

1 Вершилова П.А., Голубева А.А. и др. Бруцеллез / Под ред. Вершиловой П.А.-М.: Медицина, 1972.-439 с.

2 Димов С.К. Теория, практика управления эпизоотологическим процес сом бруцеллеза: автореф.... докт. вет. наук.-Новосибирск,1993.-44 с.

3 Иванов Н.П. Бруцеллез сельскохозяйственных животных, методы и средства борьбы с ним. –Алматы, 2002.-267 с.

30 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии УДК 619:618. бАктериологическАя коНтАМиНАция МАтки У свиНоМАток BAcTERIOLOgIcAL KONTAMINAcIYA UTERUS AT SOwS С.Н. Иванова, Н.Ю. Терентьева, М.А. Багманов S.N. Ivanova, N.U. Terentjeva, M. A. Bagmanov Ульяновская ГСХА Ulianovsk state agricultural academy The сomposition and structure of microflora uterine contents at syndrome ММА differs the big variety in reproductive bodies both separate conditional pathogenic kinds of microorganisms, and high frequency and a variety of their as sociations, bring about development of pathology beside sows.

As a result of bacteriological research 34 cultures have been allocated and 12 kinds of the microorganisms belonging to the following sorts are identified:

Staphylococcus, Streptococcus, Enterobacteriaceae and Candida. Staphylococcus, Streptococcus, Esherichia, Proteus, Enterrococcus, Corynebacterium and Candida.

From 17 tests uterine a secret mainly allocated E. coli, St. еpidermidis, Str. haemo lyticus, Enterococcus faecalis, St. saprophyticus, St. aureus and Candida krurei.

Данные последних лет свидетельствуют о значительно возросшем ко личестве случаев акушерско-гинекологических заболеваний в промышлен-ном свиноводстве. При этом нередко регистрируются послеродовые заболевания свиноматок, которые проявляются в форме синдрома метрит-мастит-агалактии.

В этиологии развития послеродовой патологии большой интерес пред ставляет изучение вопросов бактериальной контаминации матки у свиноматок и видовом составе микрофлоры, выделяемой из гениталий, как при нормальных, так и при патологических родах [1,2,3,4].

В связи с этим, определенный научный интерес и практическую значи мость работы приобретает изучение видового состава бактериальной флоры, поражающей гениталии свиноматок, а также выяснение их устойчивости к ан тибактериальным препаратам.

Материалы и методы. Исследования проводились на свинокомплек се ООО «Волжский» Чердаклинского района Ульяновской области. Иссле дованию на выделение микробных культур было подвергнуто 17 свиноматок крупной белой породы с клиническими признаками синдрома ММА в ранний послеродовый период. От животных получали маточно-цервикальный секрет в количестве 1-2 мл.


После взятия, секрет помещался в стерильную пробирку и направлялся в Чердаклинскую районную ветеринарную лабораторию и МУЗ «Городская поли клиника №5» для бактериологического исследования: на определение видового состава бактериальной флоры, поражающей гениталии свиноматок, а также вы яснения и установления чувствительности выделенной микрофлоры к антибио тикам разных групп (согласно, общепринятых методик).

Результаты исследований. Данные о видовом составе микробов, вы Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии деленных из маточно-цервикального секрета, приведены в таблице 1.

Таблица 1. Бактериологическая контаминация матки у свиноматок в ранний послеродовый период (n=17) № № Выделенный вид микроорганизмов п\п проб 1 59674. + St. еpdds + St. hytus 2 94567.

3 86742. vus 4 85324 St. hytus + St. еpdds 5 85418 ntus fs + Cndd ku + Cndd bns 6 85412 St. еpdds + ntus fs 7 58822 St. hytus + St. spphytus 8 58072 St. hytus + St. spphytus St. spphytus + Cynbtu ysttds + St.

9 hytus 10 58465. + Cndd ku 11 59854 St. uus + St. hns 12 56954 ntus fs + St. uus 13 57920 St. еpdds +.

14 58968.

15 54968. + St. еpdds 16 57900. + St. еpdds 17 58366. + St. wffi Из 17 проб маточно-цервикального секрета преимущественно выделя ли. (47,05%), St. еpdds (35,29%), St. hytus (29,41%), nt us fs (17,64%), St. spphytus (17,64%), St. uus (11,7%) и Cndd ku (11,7%) соответственно.. выделяли как в ассоциациях (75,0%), так и в монокультуре (25,0%).. vus выделялся только в монокультуре (12,5%).

Все остальные виды микроорганизмов выделялись в ассоциациях (таблица 2).

В результате исследования было выделено 34 культуры и иденти фицировано 12 видов микроорганизмов, принадлежащих следующим ро дам: Stphyus (St. uus, St. еpdds, St. spphytus, St. hns), Stptus (St. hytus, St. wffi), shh (. ), tus (.

vus), ntus (. fs), Cynbtu (С. ysttds) и грибы рода Cndd (C. ku, C. bns).

32 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Таблица 2. Количество выделенных культур микроорганизмов, при синдроме ММА у свиноматок Всего выделено Виды Кол-во % от в монокультуре в ассоциациях микроорганиз- культур 17 (чистом виде) мов проб кол-во % кол-во % St. uus 2 11,7 - - 2 100, St. еpdds 6 35,29 - - 6 100, St. spphytus 3 17,64 - - 3 100, St. hns 1 5,8 - - 1 100, St. hytus 5 29,41 - - 5 100, St. wffi 1 5,8 - - 1 100,. 8 47,05 2 25,0 6 75,. vus 1 5,8 1 12,5 - Cndd ku 2 11,7 - - 2 100, Cndd bns 1 5,8 - - 1 100, Cynbtu 1 5,8 - - 1 100, ysttds ntus 3 17,64 - - 3 100, fs ИТОГО 34 200 3 8,8 31 91, В удельном весе ассоциативной микрофлоры маточного секрета боль ных свиноматок выделялись микробные ассоциации следующего состава:.

+ St. еpdds (3 пробы);

St. uus + St. hns (1 проба);

St. hytus + St. spphytus (2 пробы);

. + Cndd ku (1 проба);

St. hytus + St. еpdds (1 проба);

. + St. еpdds + St. hytus (1 проба);

. + St. wffi (1 проба);

ntus fs + Cndd ku + Cndd bns (1 проба).

Кроме изучения видового состава выделенных бактерий и грибов нами были проведены также исследования по определению их чувствительности к антибактериальным средствам (таблица 3).

Так, штаммы стафилококков были наиболее чувствительными к ванко мицину (100,0%), ципрофлоксацину (100,0%), линкомицину (83,3%), оксацил лину (83,3%) и гентамицину (66,6%), менее чувствительны к эритромицину (33,3%) и были индифферентны к остальным исследуемым антибиотикам: ам пициллину, пенициллину, стрептомицину, бисептолу, левофлоксацину, левоми цетину, клиндомицину, цефотаксиму, цефтазидиму, сульбактаму, линезолиду, норфлоксацину и нитрофурантаену. Но проявили устойчивость по отношению к бета лактамным антибиотикам в 100% случаях.

Штаммы стрептококков были высокочувствительны к оксациллину (100,0%), гентамицину (100,0%), ванкомицину (100,0%), ципрофлоксацину (100,0%), линкомицину (100,0%), левофлоксацину (100,0%), левомицетину (100,0%), ампициллину (80,0%);

менее чувствительны к клиндомицину (60,0%) ИССЛЕДУЕМЫЕ КУЛЬТУРЫ Stphyus Stptus. ntus tus чув. уст. чув. уст. чув. уст. чув. уст. чув. уст.

Антибиотики % % % % % % % % % кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во иссл. культур иссл. культур иссл. культур иссл. культур иссл. культур Оксациллин 6 5 83,3 1 16,6 5 5 100 - - 8 6 75,0 2 25,0 3 - - - - 1 - - - Гентамицин 6 4 66,6 2 33,3 5 5 100 - - 8 2 25,0 6 75,0 3 3 100 - - 1 - - - Ванкомицин 6 6 100 - - 5 5 100 - - 8 - - - - 3 3 100 - - 1 - - - Ципрофлокса- 6 6 100 - - 5 5 100 - - 8 8 100 - - 3 - - - - 1 - - - цин Линкомицин 6 5 83,3 1 16,6 5 5 100 - - 8 - - - - 3 - - - - 1 - - - Эритромицин 6 2 33,3 4 66,6 5 2 40,0 3 60,0 8 - - - - 3 - - - - 1 - - - Ампициллин 6 - - - - 5 4 80,0 1 20,0 8 6 75,0 2 25,0 3 3 100 - - 1 1 100 - Пенициллин 6 - - - - 5 - - - - 8 - - - - 3 - - - - 1 - - - Стрептомицин 6 - - - - 5 - - - - 8 - - - - 3 - - 3 100 1 - - - Бисептол 6 - - - - 5 - - - - 8 8 100 - - 3 - - - - 1 - - - Левофлокса- 6 - - - - 5 5 100 - - 8 - - - - 3 - - - - 1 - - - цин Левомицетин 6 - - - - 5 5 100 - - 8 - - - - 3 - - - - 1 - - - Клиндомицин 6 - - - - 5 3 60,0 2 40,0 8 - - - - 3 - - - - 1 - - - Цефотаксим 6 - - - - 5 - - - - 8 8 100 - - 3 - - - - 1 1 100 - Цефтазидим 6 - - - - 5 - - - - 8 8 100 - - 3 - - - - 1 1 100 - Сульбактам 6 - - - - 5 - - - - 8 8 100 - - 3 - - - - 1 1 100 - Линезолид 6 - - - - 5 - - - - 8 - - - - 3 3 100 - - 1 - - - Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Норфлоксоцин 6 - - - - 5 - - - - 8 8 100 - - 3 - - - - 1 - - - Нитрофуран- 6 - - - - 5 - - - - 8 8 100 - - 3 - - - - - - - - таен Бета лактам ные 6 - - 6 100 5 - - - - 8 - - - - 3 - - - - - - - - антибиотики 34 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии и к эритромицину (40,0%) и были индифферентны ко всем остальным исследуе мым антибактериальным средствам.

Штаммы. были наиболее чувствительны (100,0%) к бисептолу, це фотаксиму (100,0%), ципрофлоксацину (100,0%), цефтазидиму (100,0%), суль бактаму (100,0%), норфлоксацину (100,0%), нитрофурантаену (100,0%), окса циллину (75,0%), ампициллину (75,0%);

менее чувствительны к гентамицину (25,0%) и были индифферентны к ванкомицину, линкомицину, эритромицину, пенициллину, стрептомицину, левофлоксацину, левомицетину, клиндомицину, линезолиду и бета лактамным антибиотикам.

Бактерии рода протей характеризовались следующей чувствительно стью к препаратам. К. vus наиболее высокой чувствительностью облада ли ампициллин (100,0%), цефотаксим (100,0%), цефтазидим (100,0%), сульбак там (100,0%). И был индифферентен к оксациллину, гентамицину, ванкомицину, ципрофлоксацину, линкомицину, эритромицину, пенициллину, стрептомицину, бисептолу, левофлоксацину, левомицетину, клиндомицину, линезолиду, норф локсацину и нитрофурантаену.

При определении чувствительности выделенной микрофлоры к анти биотикам установили, что микроорганизмы обладали значительной устойчи востью к наиболее широко применяемым антибиотикам: гентамицину (75,0%), эритромицину (60,0-66,6%) и клиндомицину (40%).

Выводы. Таким образом, состав и структура микрофлоры маточного содержимого отличается большим разнообразием как отдельных патогенных и условно-патогенных видов микроорганизмов, так и их ассоциаций, приводящей к развитию патологии у свиноматок. Наиболее часто при синдроме ММА выде ляются следующие микроорганизмы: стафилококки, стрептококки и кишечная палочка.

Анализируя данные наших исследований по антибиотико чувствительности, можно заключить, что практически ни один из доступных антибиотиков не подавлял роста большей части выделенных штаммов микро организмов.

Литература:

1.Гельвиг Э.-Г. Заболевания свиней /Э. – Г. Гельвиг;

Пер. с нем. – М.:

ООО «Издательство Астрель», 2003. – С. 41.

2.Методические указания по диагностике, лечению и профилактике по слеродовых заболеваний у свиноматок. – Воронеж, 1986 – 23 с.

3.Михайлов Н.Н., Зудилин В.А. Лечение гинекологических болезней у свиней // Ветеринария. – 1980. - №4. - С.48-49.

4.Плешакова В.И., Серебряков В.В. Синдром метрит-мастит-агалактии свиноматок (ММА) // Ветеринария. – 2006. - №3. – С.48-49.

Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии УДК 619:618.14- МикрофлорА секретА МолочНой Железы У свиНоМАток при сиНДроМе Метрит-МАстит-АгАлАктия MIKROFLORA SEcRET OF THE MAMMARY gLAND BESIDE SOwS AT SYNDROME METRIT-MASTITIS-AgALAKTIYA С.Н. Иванова, Н.Ю. Терентьева, М.А. Багманов S.N. Ivanova, N.U. Terentjeva, M.A. Bagmanov ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

FGU SVT «Ulianovsk state agricultural academy»

At syndrome ММА symptoms of defeat of a uterus, mammary gland, with the subsequent infringement of a lactation come to light. Organized bacteriological analysis of the tests of milk has shown, that milk of the sound sows did not contain pathogenic microflora while in test of milk received from sick sows were allocated pathogenic microorganisms – St. aureus, Str. viridans, Str. agalactiae, Str. iwoffi and E. coli. Studying of sensitivity of the allocated microflora to antibiotics has shown about purchase by the basic activators of this disease of significant stability to most widely used antibiotics: to erythromycin, to lincomycin, to gentamycin and ampicillin.

Практика показала, что среди различных акушерско-гинекологических заболеваний свиноматок, особое место занимает патология, проявляющаяся в форме симптомокомплекса метрит-мастит-агалактии, имеющего место в ран нем послеродовом периоде. Его проявление начинается с воспаления матки, патологический процесс гематогенным путем распространяется на молочные пакеты, вызывая воспаление. Следствием этого заболевания является снижение или прекращение секреции молока, изменение его качества, что приводит к вы сокой заболеваемости, отставанию в росте и развитии, а зачастую и к гибели новорожденных поросят, и в конечном итоге нарушению ритма производства свинины [2].

При ММА поражается до 45-60%, а в отдельных случаях до 70-80% функционирущих долей молочной железы. При воспалительном процессе в мо лочных железах свиноматок происходят морфологические и функциональные изменения, в результате снижается способность к секреции молока, ухудшается качество. При потреблении такого молока у поросят нарушается формирова ние клострального иммунитета, снижается общая резистентность, появляются желудочно-кишечные расстройства, нередко сопровождающиеся массовым от ходом поросят [1,3,4].

При постановке диагноза на ММА бактериологические исследования являются обязательными, т.к. они достоверно характеризуют степень контами нации молочной железы различной микрофлорой, видовую принадлежность и патогенность микроорганизмов. Бактериологические исследования позволяют не только выявить конкретных возбудителей синдрома ММА, но и определить эпизоотическую ситуацию на свиноводческих комплексах и правильно выбрать 36 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии тактику лечения при данном заболевании.

Исходя из изложенного, перед нами стояла цель: изучить видовой состав микрофлоры секрета молочной железы свиноматок с клиническими признаками синдрома ММА в ранний послеродовый период и определить чувствительность выделенной микрофлоры к антибиотикам разных групп.

Материалы и методы. Работа проводилась на свинокомплексе ООО «Волжский» Чердаклинского района Ульяновской области. Клинические иссле дования проводились на основных свиноматках крупной белой породы в раннем послеродовом периоде. Лабораторные исследования секрета молочной железы проводились в бактериологическом отделе Чердаклинской районной ветеринар ной лаборатории и МУЗ «Городская поликлиника №5».

Бактериологическому анализу подвергались пробы молока (молозива), полученные от больных свиноматок. Для контроля и сопоставления выделен ных видов микроорганизмов, исследовали молоко, взятое от клинически здоро вых животных. Всего было подвергнуто бактериоло-гическому исследованию 10 проб молока, в том числе от животных, имевших отчетливо выраженные признаки синдрома ММА – 7 проб молока и от здоровых свиноматок – 3 пробы молока.

Также по принципу пар аналогов в ранний послеродовый период форми ровались 2 группы свиноматок по 10 голов в каждой для сравнительной оценки клинических параметров у здоровых и больных животных.

Перед взятием проб молока для бактериологического исследования со ски тщательно обмывали теплой мыльной водой, вытирали насухо стерильным ватным тампоном и дезинфицировали 70° спиртом. После этого молоко сдаи вали в стерильные колбочки. Для исследования брали вторые и третьи порции сдаиваемого молока. После отбора, пробы секрета молочной железы от свино маток доставляли в лабораторию в течение 3-4 часов для бактериологического исследования.

Выделение чистых культур бактерий и грибов проводили на различных питательных средах: МПБ, МПА, Эндо, ЖСА, ДИФ-3, кровяной агар, агар Са буро (Е.В.Серебряков, 1991;

Д.А.Васильев с соавт., 1998). Видовую принадлеж ность бактерий устанавливали с помощью «Определителей микробов» М.А.

Сидорова с соавт. (1995) и Берджи (1997). При этом учитывали величину вырос ших колоний на агаре, их форму, окраску, структуру, время образования, очерта ния краев и другие свойства.

Чувствительность выделенных культур к различным препаратам, как раздельно, так и в ассоциации, в нативном материале определяли методом бу мажных дисков, пропитанных антибиотиками (оксациллин, гентамицин, ванко мицин, ципрофлоксацин, линкомицин, эритромицин, ампициллин, пенициллин, стрептомицин, бисептол), согласно «Методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сель скохозяйственных животных» (М., 1971).

Результаты исследований. Диагностика ММА основывалась на про ведении клинического осмотра больных свиноматок, выявлении симптомов поражения матки, молочной железы и нарушения лактации. С целью раннего выявления больных животных проводили термометрию всех опоросившихся свиноматок в течение первых суток после опороса. При этом у клинически здо ровых животных температура тела не превышала 39,3°С. У заболевших темпе Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии ратура тела повышалась до 41°С, учащался пульс до 110-120 уд/мин и дыхания до 20-25 в минуту. Непосредственно сразу после родов отмечалась общая сла бость, животные покрывались испариной.

Наружные половые органы были отечны, гиперемированы, слизистая вульвы ярко красного цвета, из половой щели выделялся жидкий слизисто гнойный экссудат с красноватым или буроватым оттенком до 300 мл. Одно временно со стороны молочной железы наблюдали снижение или прекращение секреции молока. При исследовании молочной железы устанавливали, что мо лочные пакеты отечные, болезненные, горячие на ощупь, покрасневшие. У неко торых свиноматок отмечали отек и гиперемию внутренней поверхности бедра, хромоту при ходьбе. Молоко из пораженных пакетов было водянистым с бело ватым или желтоватым оттенком, или имело включения хлопьев казеина. Чаще поражались 1-2, реже 3 и более долей молочной железы. Кроме того, выявляли существенное снижение секреции молока. Из-за нарушения лактации потреб ность поросят в молозиве не удовлетворялась. Поросята проявляли беспокой ство. В дальнейшем становились вялыми, цвет кожного покрова был бледно серым. У многих наблюдалась диарея, приводящая к гибели на 2-3 день.

При бактериологическом исследовании молока было выявлено 6 ми кробных культур, из которых патогенные культуры в чистом виде были выделе ны от 2 животных из 10 исследованных (20%), а у остальных 8 животных была обнаружена смешанная микрофлора (80%). Результаты бактериологического ис следования секрета молочной железы от здоровых (n=3) и больных синдромом ММА свиноматок (n=7) представлены в таблице 1.

Таблица 1.Обсемененность секрета молочной железы здоровых и больных синдромом ММА свиноматок (n=10) Вид Исследован- Патогенные Непатогенные микро- ные организмов штаммы кол- % от Здоро- Больные Здоровые Больные во исх-х вые свиномат- свиноматки свиноматки проб свино- ки матки кол- % кол- % кол- % кол- % во во во во St. uus 2 20,0 - - 1 50,0 - - 1 50, St.. pd- 3 30,0 - - - - 1 33,3 2 66, ds St. vdns 1 10,0 - - 1 10,0 - - - St. -. 10,0 - - 1 10,0 - - - t St. wffi 1 10,0 - - 1 10,0 - - -. 5 50,0 - - 3 60,0 - - 2 40, ИТОГО 13 130,0 0 0 7 53,84 1 33,3 5 38, 38 Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии Данные таблицы 1 показывают, что молоко здоровых свиноматок не содержало патогенной микрофлоры. Из непатогенных были выявлены: St.

еpdds в 33,3% проб.

Таблица 2. Чувствительность выделенных культур к антибиотикам разных групп Исследуемые культуры Стафилококки Стрептококки Кишечная палочка Антибио тики чув. уст. чув. уст. чув. уст.

иссл. культур иссл. культур иссл. культур кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во кол-во % % % % % % О кс а ц и л - 5 4 80 1 20 3 - - - - 5 - - - лин Ге н т а м и - 5 3 60 2 40 3 - - - - 5 2 40 3 цин В а н ком и - 5 3 60 2 40 3 - - - - 5 - - - цин Ципроф- 5 5 100 - - 3 - - - - 5 - - - лок сацин Линкоми- 5 3 60 2 40 3 1 33,3 2 66,6 5 - - - цин Эритроми- 5 2 40 3 60 3 - - - - 5 - - - цин Ампицил- 5 - - - - 3 3 100 - - 5 2 40 3 лин Пеницил- 5 - - - - 3 - - - - 5 3 60 2 лин Стрептоми- 5 - - - - 3 2 66,6 1 33,3 5 - - - цин Бисептол 5 - - - - 3 - - - - 5 5 100 - При исследовании 7 проб молока от больных свиноматок были выделе ны следующие микроорганизмы: St. uus – 2 штамма, из которых 1 (50,0%) был патогенен, St. vdns – 1 патогенный штамм (10,0%), St. t - патогенный штамм (10,0%), St. wffi – 1 патогенный штамм (10,0%),.

Вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ВСЭ и биотехнологии – 5 штаммов, из которых 3 (60,0%) обладали патогенными свойствами. Из не патогенных наблюдали: St. еpdds – 2 штамма (66,6%), St. uus – 1 штамм (50,0%) и. – 2 штамма (40,0%).

При бактериологическом исследовании установили, что микрофлора се крета молочной железы при синдроме ММА имеет в своем составе микробные ассоциации следующего состава: St. pdds + St. uus, St. pdds + St.

vdns, St. t +..

Как видно из данных таблицы 1, доминирующим видом, как по частоте, так и по количеству выделенных микробных культур явились St. еpdds и..

Результаты определения чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам разных групп (таблица 2) показали, что в 100% случаях выделен ные штаммы стафилококков проявили чувствительность к ципрофлоксацину, 80% к оксациллину. Чувствительность стафилококков к гентамицину, ванкоми цину и линкомицину была ниже и составила соответственно 60%, 40% были малочувствительны к эритромицину. К ампициллину, пенициллину, стрептоми цину и бисептолу штаммы стафилококков проявили индифферентность. Также 60% оказались устойчивыми к эритромицину, менее устойчивыми 20% к окса циллину.

У стрептококков наивысшую чувствительность проявил ампициллин 100%. К стрептомицину были чувствительны 66,6%, малочувствильны к лин комицину 33,3%. К оксациллину, гентамицину, ванкомицину, ципрофлоксацину, эритромицину, пенициллину и бисептолу были индеферентны все выделенные нами, штаммы стрептококков.

Штаммы кишечной палочки в 100% случаях были чувствительны к би септолу, в 60% случаях – к пенициллину;

малочувствительны в 40% случаях к гентамицину и ампициллину. К оксациллину, ванкомицину, ципро-флоксацину, линкомицину, эритромицину, стрептомицину Е. оказалась индеферентной.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
 

Похожие работы:





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.