авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:   || 2 | 3 | 4 |
-- [ Страница 1 ] --

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

ФГОУ ВПО "Ульяновская

государственная сельскохозяйственная академия"

Всероссийский совет молодых учёных и специалистов аграрных образовательных и научных учреждений

Ульяновское региональное отделение Российского союза молодых ученых

Совет молодых ученых и специалистов при Губернаторе Ульяновской области Материалы III-й Международной научно-практической конференции молодых учёных МОЛОДЁЖЬ И НАУКА XXI ВЕКА Том III Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Ульяновск 2010

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

ФГОУ ВПО "Ульяновская

государственная сельскохозяйственная академия"

Всероссийский совет молодых учёных и специалистов аграрных образовательных и научных учреждений

Ульяновское региональное отделение Российского союза молодых ученых

Совет молодых ученых и специалистов при Губернаторе Ульяновской области Материалы III-й Международной научно-практической конференции молодых учёных МОЛОДЁЖЬ И НАУКА XXI ВЕКА Том III Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Ульяновск Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Материалы Международной научно-практической конференции молодых учёных «Молодёжь и наука XXI века». Ульяновск: Ульяновская ГСХА, 2010, т. 3, - 102 с.

Редакционная коллегия:

А.В.Дозоров, ректор (гл. редактор) Д.А.Васильев (зам.гл. редактора), И.С. Королёва, Ю.Б. Васильева Авторы опубликованных статей несут ответственность за патентную чистоту, достоверность и точность преведенных фактов, цитат, экономико-статистических данных, собственных имен, географических названий и прочих сведений, а также за разглашение данных, не подлежащих открытой публикации. Статьи приводятся в авторской редакции.

Печатается на средства научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии УГСХА.

© ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия», Том 3.





Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 619: ИЗМЕНЕНИЕ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАКТЕРИОФАГОВ РОДА PROVIDENCIA ПРИ ХРАНЕНИИ CHANGE LYTIC ACTIVITY KIND PROVIDENCIA STORAGE BACTERIOPHAGES Д.А. Васильев, Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.Ю. Акимов N.G. Bart, S.N. Zolotukhin, D.A. Vasilyev, D.Yu. Akimov Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА The research innovation centre of microbiology and biotechnology Ulyanovsk state academy of Agriculture Study of changes in lytic activity of bacteriophages in storage due to the devising of optimal storage conditions and multiplicity of reseeding of production strains, and with a shelf life of phage preparations. In our study was a task - to study changes in the activity of bacteriophage genus Providencia in storage.

Изучение изменения литической активности бактериофагов при хранении связано с изысканием оптимальных условий хранения и кратности пересева производственных штаммов, а также со сроком годности фаговых препаратов.

В результате проведенных исследований нами были выделены бактериофагов рода Providencia, устойчивых к хлороформу – 11 и к температуре - 1, образующих прозрачные колонии различного диаметра от 1,0 до 5,0 мм или стерильные пятна в виде зон лизиса, диаметром от 5,0 до 9,0 мм. Литическая активность выделенных фагов по методу Аппельмана составляет от 10-6 до 10-10, по методу Грациа – от 1 х 109 до 1 х Литическую активность селекционированных штаммов определяли на плотных (по Грациа) и в жидких питательных средах (по Аппельману).

Исследовали 2 штамма бактериофагов с наибольшей литической активностью F-67 УГСХА и F-87 УГСХА, активных в отношении бактерий рода Providencia rettgeri.

Фаги хранили во флаконах емкостью 10 мл в условиях холодильника в виде лизатов бульонных культур без консерванта при температуре 4-60С. Литическую активность определяли по истечении каждых 6-х месяцев в течение 24 месяцев, т.е. было проведено 4 опыта.

В основу метода для определения литической активности фагов положена схема, предложенная Грациа (1936). Наличие фага в фильтрате выявляли путем высева на плотные питательные среды (1,5% мясопептонный агар) методом агаровых слоев.

Сущность метода заключается в следующем: 1,5% мясопептонный агар с генцианвиолетом накануне опыта разлили по чашкам по 25-30 мл.

Чашки, прикрытые стерильной бумагой, высушивали под бактерицидной лампой в течение нескольких часов, затем закрывали крышками и в перевернутом виде оставляли на ночь при комнатной температуре для полного высушивания агара в чашках, так как малейшее увлажнение может исказить результаты опыта.

Предварительно разлитый в пробирку 0,7% агар в количестве 2,5 мл расплавляли и остужали до 46-470С. 1 мл исследуемого фильтрата вносили в 2,5 мл 0,7% агара, туда же вносили 0,2 мл индикаторной культуры Providencia rettgeri № 104а и 102д.

Смесь осторожными движениями распределяли по поверхности 1,5% агара, для затвердения чашки оставляли на столе в течение 30 минут, а затем выдерживали в термостате при 370С в течение 20-24 часов. При наличии фага на чашках обнаруживали негативные колонии или зоны лизиса.



Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Определение литической активности бактериофагов по методу Аппельмана (выражается степенью разведения). Готовили ряд пробирок из нейтрального стекла одинакового диаметра со стерильным МПБ по 4,5 мл. В первую пробирку вносили 0,5 мл фага. Затем делали последовательные разведения, перенося отдельными пипетками из пробирки в пробирку по 0,5 мл бактериофага. Использовали 10 пробирок. Из последней пробирки 0,5 мл выливали в дезраствор, затем во все пробирки вносили по 0,2 мл часовой индикаторной бульонной культуры. 11 и 12 пробирки являются контрольными, в первой из них находится бульон и культура без фага, во второй – один бульон (контроль на стерильность). Все 12 пробирок помещали в термостат при 37°С на 4 часа. Титр фага устанавливали по последней, прозрачной пробирке ряда и выражали разведением фага.

В результате проведенных исследований было установлено следующее:

через каждые 6 месяцев исследуемые бактериофаги F-67 УГСХА и F-87 УГСХА литическую активность практически не меняли.

Литическая активность фагов Providencia Фаги Сроки Литическая Литическая активность по активность по Аппельману Грациа 10-7 – 10-9 1 х F-67 УГСХА Июль 10-7 – 10-9 1 х Январь 10-6– 10-8 1 х Июль 10-6 – 10-8 1 х Январь 10-8 – 10-10 1 х F-87 УГСХА Декабрь 10-8 – 10-10 1 х Июнь 10-8 – 10-10 1 х Декабрь 10-8 – 10-10 1 х Июнь Анализируя результаты проведенных исследований, можно сделать вывод, что разные штаммы селекционировнных нами фагов бактерий рода Providencia rettgeri обладали высокой литической активностью, бактериофаги практически не теряли свою активность в процессе долгого хранения. Таким образом, целесообразно использовать для конструирования лечебно-профилактических и диагностических фаговых препаратов данные штаммы, так как они не изменили литическую активность по истечении 24 месяцев.

Литература 1. Адамс М. Бактериофаги. – М., 1961. – С. 521.

2. Ганюшкин В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии // Учебное пособие. – Ульяновск. – 1988. – С. 45.

3. Гольдфарб Д.М. Бактериофагия // М.: Медгиз. – 1961. – С. 297.

4. Ревенко И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике // - Киев: Урожай, - 1978. – С. 88.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 619: РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ, ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ПСЕВДОМОНОЗА РЫБ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ БАКТЕРИОФАГОВ DEVELOPMENT OF METHODS FOR DIAGNOSIS, TREATMENT AND PREVENTION FISH’S PSEVDOMONOZA USING A BIOLOGIKAL PRODUKT BASET ON THE PHAGES Д.А. Викторов, О.А. Тен, И.И. Богданов D.A. Viktorov, O.А. Ten, I.I. Bogdanov Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА The research innovation centre of microbiology and biotechnology Ulyanovsk state academy of Agriculture Subject of the project relates to the veterinary industry's fisheries.

The project aims at creating a biological product based on the phages and the development of methods of its application for diagnosis, treatment and prevention fish's psevdomonoza caused by the bacterium Pseudomonas putida.

As a result, the project will be obtained on the basis of biologic bacteriophages and developed the methods of its application for diagnosis, treatment and prevention psevdomonoza fish. It is predicted that this biological product will be in high demand in the laboratory and veterinary services, fish farming, because the method of its application is an advanced and modern, and completely accessible to fish farms.

Biological product for the diagnosis will be issued in the form of suspension of phage corpuscles determined titer in the substrate myasopeptonnogo broth in a sterile glass vial. Biological product for treatment and prevention psevdomonoza fish is planned to produce a liquid or dry form.

Псевдомонозы рыб – это инфекционное заболевание, характерное для многих видов рыб, которое наносит ощутимый экономический ущерб рыбоводческим хозяйствам [1].

Возбудителями псевдомоноза рыб является целый ряд патогенных штаммов флюоресцирующих бактерий рода Pseudomonas. У рыб чаще встречаются виды:

Pseudomonas putida, Pseudomonas cyprinisepticum, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aureofaciens, Pseudomonas chlororaphis, Pseudomonas dermoalba, Pseudomonas intestinalis [1].

При остром течении инфекции рыбы вялые, слабо реагируют на внешние раздражители, хаотично плавают у поверхности воды. На брюшной стенке, плавниках, жаберных крышках видны точечные и пятнистые, а в склере глаз серповидные кровоизлияния;

на теле очаговое или диффузное ерошение чешуи.

Брюшко увеличено в объеме, мягкой консистенции. Отмечают одно- или двустороннее пучеглазие. Анальное отверстие обычно воспалено и выпячено.

Нередко псевдомонозы вызывают гибель отдельных животных или даже массовый помор рыбы. В случаях, когда летальный исход не наступает, переболевшая рыба теряет вес и товарные качества [4].

В настоящее время диагноз на псевдомонозы ставят на основании результатов бактериологического исследования с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков и патологоанатомических изменений [5].

Типирование до вида не производится, так как существующие методы бактериологической диагностики требуют значительных затрат времени и материалов, а современные методики, такие как полимеразная цепная реакция или Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии иммуно-ферментный анализ, требуют дорогостоящего оборудования, материалов и высококвалифицированных специалистов [4], [5], [6].

Поскольку существующие методы диагностики не предусматривают типирование возбудителей псевдомонозов до вида, лечение заболевания заключается в применении антибиотиков широкого спектра [4]. Как известно, антибиотики пагубно влияют на рост и развитие сразу нескольких видов и даже родов бактерий. В результате их применения погибают не только патогенные бактерии, вызывающие заболевание, но и естественная сапрофитная микрофлора, играющая существенную роль в функционировании биоценозов, круговороте азота и других веществ, разложении органических остатков. Кроме того, антибиотики «заодно» убивают и полезную микрофлору желудочно-кишечного тракта, вызывая дисбактериоз кишечника, токсическое поражение печени, почек и других органов, проявляются нарушения иммунитета. В результате организм поражает секундарная инфекция. При длительном применении антибиотиков бактерии адаптируются к их действию, что вызывает появление мутантных антибиотикоустойчивых форм микробов. Всё это указывает на несостоятельность современных методов диагностики и лечения псевдомонозов рыб.

Предлагаемый нами биопрепарат для диагностики, лечения и профилактики основан на использовании гомологичных бактериофагов бактерий вида Pseudomonas putida. Фагоиндикация представляет собой ускоренный метод обнаружения бактерий в различных материалах с помощью специальных индикаторных фагов [2]. Фаги обладают выраженной избирательностью литического действия в отношении определенных видов бактерий. Благодаря высокой специфичности индикаторный фаг не реагирует на присутствие в исследуемых образцах посторонней микрофлоры, что дает возможность проводить индикацию того или иного возбудителя без его выделения в чистой культуре [2], [3].

Применение данного биопрепарата в целях диагностики, лечения и профилактики псевдомоноза рыб имеет ряд преимуществ перед существующими методиками:

- типирование возбудителя осуществляется до вида;

- время постановки диагноза сокращается до 18 часов;

- не требуется наличие дорогостоящего оборудования и материалов;

- не требуется высококвалифицированного труда специалистов;

- биопрепарат для лечения активен только в отношении конкретного вида возбудителя;

- полная безвредность бактериофага для организма животного (не вызывает ухудшение иммунитета, дисбактериоз, поражение органов);

- применение биопрепарата для лечения не вызывает гибель сапрофитной микрофлоры, адаптацию бактерий к антибиотикам и появление мутантных антибиотикоустойчивых форм бактерий;

- являясь живым агентом, бактериофаги, применяемые для лечения и профилактики, размножаются, самовосполняя свою популяцию, что обеспечивает экономию средств;

- производимая рыбная продукция не будет содержать антибиотики.

Кроме того, фаги обладают высокой специфичностью, а значит действуют строго на определенный вид возбудителя, что делает возможным сохранение полезной микрофлоры организма и естественной микрофлоры биоценоза.

Перечисленные преимущества обуславливают необходимость разработки данного биопрепарата, поскольку методика его применения является передовой и современной, и абсолютно доступна для рыбоводческих хозяйств.

Биопрепарат для диагностики будет выпускаться в виде взвеси фаговых корпускул определённого титра в субстрате мясопептонного бульона в стерильном Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии стеклянном флаконе. Биопрепарат для лечения и профилактики псевдомоноза рыб планируется выпускать в жидком или в сухом виде.

Прогнозируется, что данный биопрепарат будет широко востребован в лабораториях и ветеринарных службах рыбоводческих хозяйств.

Литература 1. Бактерии рода Pseudomonas. Смирнов В.В., Киев: Наук. Думка, 1990.

2. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. И.П. Ревенко.

К., «Урожай», 1978.

3. Бактериофагия. Д.М. Гольдфарб. М., Медгиз, 1961.

4. Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации псевдомоноза рыб, Минсельхозпрод России, Департамент ветеринарии, 1998.

5. Методические указания по лабораторной диагностике псевдомонозов рыб, Минсельхозпрод России, Департамент ветеринарии, 1998.

6. Система тестов для диагностики псевдомоноза рыб, вызываемого бактерией Pseudomonas putida. Викторов Д.А., Богданов И.И., Шестаков А.Г. Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины. Покров, ВНИИВВиМ, 2009.

УДК 619: БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ БАКТЕРИЙ РОДА AEROMONAS И МЕТОДЫ ИХ ДИАГНОСТИКИ BIOLOGICAL FEATURES OF SORT AEROMONAS AND METHODS OF THEIR DIAGNOSTICS И.Г. Горшков, Т.И. Канаева I.G. Gorshkov, T.I. Kanaeva Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА The research innovation centre of microbiology and biotechnology Ulyanovsk state academy of Agriculture In this article we can regard biological expecialities of Aeromonas’s view and methods of it`s diagnostic.

Бактерии рода Aeromonas были идентифицированы еще в конце XIX века Санарелли (1891г). Он выделил из крови и лимфы инфицированной лягушки микроб, который назвал Bacillus hydrophilus fuscus, затем Честер в 1901 году переименовывает Hydrophilus fuscus в Bacterium hydrophilum, как он считал для лучшего описания особенности этого микроба (3). Длительное время Aeromonas считали сапрофитами, циркулирующими в воде открытых водоемов.

Свое название род Aeromonas получил благодаря способности бактерий выделять газ. Дальнейшие исследования Aeromonas привели к разделению группы на подвижные и неподвижные виды.

Таксономические работы, которые базируются на фенотипических особенностях, разделяют Aeromonas сначала на виды и подвиды. Присутствие или отсутствие каких-либо селективных особенностей и их комбинаций друг с другом делают возможным классификацию видов и подвидов, и, соответственно, описание новых видов. Процесс классификации бактерий данного рода еще не завершен.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Дифференциация подвижных видов рода Aeromonas по биохимическим признакам Признак A.hydro- A.caviae A.eucre- A.schu- A.sob- A.vero phila nophila bertii ria nii Образование индола + + + - + + Проба с метиловым красны + + В + - + Реакция Фогеса-Проскауэ + - - - В + Использование цитрата В в - в - + (среда Симмонса) Образование H2S + - - - - Гидролиз мочевины - - - - - Фенилаланиндезаминаза - - В в + (+) Лизиндекарбоксилаза В - - + + + Аргининдигидролаза + + + + + Орнитиндекарбоксилаза - - - - - + Гидролиз желатины + + + + + (+) Рост в присутствии KCN + + + - - В Использование малоната - - - - - Образование кислоты из Д- + + + + + + глюкозы Образование газа из Д-глюк + - + - - + Образование кислоты из Адонитола - - - - - L-арабинозы + + + - - Д-арабитола - - - - - Целлобиозы - (+) + - в (+) Дульцитола - - - - - Эритритола - - - - - Д-галактозы + + + + + + Глицерола + в + в в + Мио-инозитола - - - - - Лактозы В в - - - Мальтозы + + + + + + Д-маннитола + + + - в + Д-маннозы (+) в + + + + Мелибиозы - - - - - В-метил-Д-глюкозида В - - - в (+) Рафинозы - - - - - L-рамнозы - - - - - Салицина + + + - - + Д-сорбитола - - - - в Сахарозы + + В - в + Трегалозы + + + + в + Д-ксилозы - - - - - Гидролиз эскулина + + + - - + Мукат, кислота - - - - - Тартрат (среда Джорданса - - - - - + Использование ацетета В в В в в (+) Липаза (кукурузн масло) В + - + - + ДНКаза + + + + + + Восстановление нитрата + + + + + + Оксидаза + + + + + + Цитрат (среда Кристенсена - в - + - + Просветление среды с + в В + в (+) тирозином Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Aeromonas обитают в водных жизненных пространствах. Концентрация микроорганизмов зависит от температуры и степени загрязнения воды.

Температурный оптимум находится между 22 и 28 градусами (4). Поэтому особенно в летние месяцы происходит массовое развитие Aeromonas. В естественных условиях бактерии способны размножатся при температуре от 4 до 45 градусов Цельсия а также при pH – среде между 4,5 и 9,8. pH- оптимум находится между 6,5 и 7,5. Инфекция вызываемая Aeromonas, может привести к состоянию опасному для жизни. Аэромоноды вызывают экзогенную инфекцию при осложнении ран и других повреждений кожи. Бактериемия или сепсис развиваются при эндогенной инфекции, когда Aeromonas поражают желудочно-кишечный тракт. У старых и имунноослабленных людей такие инфекции могут вызвать летальный исход.

Наряду с частыми случаями кишечных инфекций, вызванных аэромонадами, описываются воспаление миндалин, раневые инфекции после повреждений или операций, аспираторная пневмония, менингит, перитонит и сепсис при лейкемии, цирроз печени, гематобластомы, карциномы. Aeromonas могут также вызвать сепсис при ревматической лихорадке и желчной инфекции печени и урогенитальной системы.

В определителе Берджи (1997) род Aeromonas описан как факультативная анаэробная граммотрицательная палочка. Она вместе с Vibrio, Photobacterium и Plesiomonas образует семейство Vibrionacea. Aeromonas описывают как палочку с округленным концом. Диаметр между 0,3 и 1 нм и 1-3,5 нм в длину. Встречаются одиночно, парами или в короткой цепи (2). Переходные стадии до сих пор неизвестны. Большинство подвижных видов оснащено жгутиками.

На данный момент в России диагностирование Aeromonas в различных видах исследуемого материала ведется по одному нормативному документу «Методы исследований объектов окружающей среды и патологического материала на аэромонады», разработанному в Московском научно-исследовательском институте гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана в 1980 году. Пробы воды и их разведения высевают по 0,5 мл в жидкую среду накопления, в состав которой входят: сульфат магния, К 2НР, желатин, крахмал (среда А-1). Через 24 ч инкубирования посевов в термостате при температуре 30°С производят пересев на плотную дифференциально-селективную среду, в состав которой кроме перечисленных компонентов (среда А-1) входят:

водный раствор кристаллического фиолетового и трифенилтетрахлорид (среда А-2).

Посевы на плотной селективной среде инкубируют в термостате при температуре 28-30 °С в течение 42-48 ч. Характеристика колоний Aeromonas на плотной дифференциально-селективной среде (среда А-2): крупные с вишневым центром и узким бесцветным ободком. Однако использование предлагаемых дифференциально-селективных питательных сред А-1 и А-2 не позволяет достаточно квалифицированно проводить работу по выявлению аэромонад в пищевых продуктах. Окончательная идентификация аэромонад требует постановки дополнительных тестов, что усложняет исследование и увеличивает продолжительность.

Зарубежные авторы предлагают другой тип селективной среды для идентификации Aeromonas на основе триптикосоевого агара. Её разработкой занимались Shotts и Rimler (1973), но это среда пригодна только для выделения подвижных форм Aeromonas. Этo среда, которую называют агаром R-S, включает в себя следующиe компоненты: в дистиллированной воде объемом 1 литр L-лизин гидрохлорид (5.0), L-орнотин гидрохлорид (6.5), L-цистеин гидрохлорид (0.3), мальтоза (3.5), тиосульфат натрия (6.8), бромфенол синий (0.03), цитрат аммония железа (0.8), Дезоксихолат натрия (1.0), новобиоцин (0.005), дрожжевой экстракт (3.0), поваренная соль (5.0), и агар (13.5). Смесь постоянно размешивается при Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии медленном нагрeвании и кипятится в течение 1 минуты. pH среда доводится до нейтрального (7.0), и затем охлаждается до 45°C, далее разливается в стерильные чашки Петри. При проращивании после пересевания на нее пробы при 37 0С в течение 24-48 часов подвижные Aeromonas дают желтые колонии, бактерии других родов окрашиваются иначе.

Также были разработаны и переменяются тест-системы на отдельные виды Aeromonas. Так, в 1993 году был разработан тест ПЦР для штаммов A. sobria (Calabrez и Lintermans), а Джозефанд и Карнахэн в своих работах в 1994 году говорят уже о 14 тестах ПЦР, разработанных для Aeromonas.

В настощий момент в доступной для нас литературе отсутствует информация об использование метода ИФА для рода Aeromonas из окружающей среды и инфицированных рыб.

Литература 1. Канаева Т.И. Разработка методов выделения и идентификации бактерии Aeromonas hydrophila. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Саратов, 2009.

2. Определитель бактерий Берджи. М.: Мир, 1997.

3. Knut Karst. Vorkommen von vermehrungsfaehigen Aeromonasarten in Rohrinkrustationen eines staedtischen Wasserversordnungssystems.//Dissertation zur Erlangung des Doctorgrades der Zahnmedizin des Fachbereichs Humanmedizin der Johann Wolfgang Goethe Universitaet Frankfurt am Main, 2001.

– С. 8-11.

4. http://koiclubsandiego.org/library/FHB68.pdf УДК 619: КАЧЕСТВЕННЫЙ МЕТОД ОЦЕНКИ РИСКА ВОЗНИКНОВЕНИЯ АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ В КРУПНЫХ И МЕЛКИХ СВИНОВОДЧЕСКИХ ХОЗЯЙСТВАХ УЛЬЯНОВСКОЙ ОБЛАСТИ QUALITATIVE METHOD OF THE ESTIMATION OF RISK OF OCCURRENCE OF THE AFRICAN PLAGUE OF PIGS IN LARGE AND SMALL PIG-BREEDING ECONOMY OF THE ULYANOVSK REGION Ю.Б. Васильева, Е.В. Сульдина, Т.Л. Чернова J.B. Vasileva, E.V. Suldina, T.L. Chernova Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА The research innovation centre of microbiology and biotechnology Ulyanovsk state academy of Agriculture The authors present data on risk assessment African swine fever in large and small pig farm Ulyanovsk region.

Ульяновская область является крупным транспортным узлом:

железнодорожные и автомобильные дороги на Москву, Казань, Уфу, Саратов, речные и авиалинии связывают её со многими городами страны и зарубежья.

Восприимчивое поголовье региона составляет более 120 тысяч домашних свиней и около 5 тысяч диких кабанов. Все эти условия способствуют возникновению вспышек и распространению этого заболевания на территории Ульяновской области.

Целью исследования является изучение риска возникновения африканской чумы свиней в мелких и крупных хозяйствах Ульяновской области.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Для оценки риска заноса возбудителя африканской чумы свиней мы использовали качественный метод анализа «дерево решений» – это логическая структура, представленная в виде «если…то». Узлы дерева – это рассматриваемые параметры, а ветви – возможные альтернативные значения атрибутов.

Объектами данного исследования стали два различных по виду пользования хозяйства области: крупный свиноводческий комплекс – СКИК «Новомалыклинский»

и личное фермерское хозяйство, расположенное в Сурском районе.

Свинокомплекс СКИК - «Новомалыклинский» расположен в Новомалыклинском районе, вблизи от автотрассы и лесополосы. Крупнейшее в области предприятие закрытого типа с соблюдением принципа «всё пусто - занято».

Карантинирование вновь поступивших животных осуществляется в соответствии в ветзаконодательством. Поголовье прививается от КЧС и рожи. Регулярно проводятся санитарные работы. Имеется санитарная бойня. Дезпропускник при въезде.

Итак, рассмотрим риск заноса возбудителя африканской чумы свиней в СКИК «Новомалыклинский».

Первый параметр – кормовая база. На комплексе используется своя кормовая база на 85%, остальные корма приобретаются в районе. Добавки и премиксы закупаются, промышленного производства. Дача пищевых отходов исключена, соответственно риск алиментарного заражения незначительный.

Второй параметр - оценка контакта с другими животными (дикими, бродячими, грызунами, птицей). Свинокомплекс является предприятием закрытого типа, полностью огорожен металлическим забором. Вход рабочих осуществляется только после переодевания. Контакт с бродячими и дикими животными исключен.

Проводится плановая дератизация. Но на территории комплекса расположены склады, где постоянно обитают дикие голуби, поэтому риск заражения поголовья контактным путем умеренный.

Подставляя данные в комбинационную матрицу, получаем, что общий риск заноса АЧС в хозяйство является низким.

Следующий параметр – возможность заноса возбудителя антропогенным путём.

Всем работникам комплекса запрещается держать на личном подворье свиней.

Работникам запрещается приносить на комплекс продукты питания. На территорию запрещён вход посторонним лицам и автотранспорту. Риск – низкий.

Оценка риска, связанная с обновлением поголовья. Свиньи для комплекса приобретены от российских поставщиков при его комлектовании. Зачастую используется свой ремонтный молодняк и осуществляется незначительная закупка хряков из Дании. Технологический цикл от 150 до 180 дней. Риск заражения, связанный с ротацией поголовья, низкий.

Вновь подставляем данные в комбинационную матрицу. Общий риск заноса низкий.

Оцениваем общую вероятность заноса африканской чумы свиней на СКИК «Новомалыклинский». Также подставляя данные: общий риск заноса АЧС (при оценке кормовой базы и контакта с дикими животными) – низкий и общий риск заноса АЧС (при оценке вероятности заноса антропогенным путём и риска, связанного с ротацией поголовья) – низкий. Получается, что общий риск заноса АЧС на территорию свинокомплекса является низким. Его можно считать таковым, если постоянно будут соблюдаться следующие условия: закрытый тип хозяйствования и содержания животных (исключается контакт с дикими животными и гематофагами);

собственное восполнение поголовья (исключается завоз с приобретаемыми животными);

используется своя кормовая база (исключается завоз с кормами и боенскими отходами);

четкая система перемещения и учёта животных (бирки, выщипы, тату);

квалифицированные ветврачи, следящие за состоянием здоровья (своевременное выявление и лабораторная диагностика при подозрении на АЧС);

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии запрет сотрудникам содержания собственного поголовья свиней (предотвращается механическая передача).

Исследуемое нами частное хозяйство расположено в Сурском районе, вблизи лесополосы и на значительном расстоянии от автомагистрали. Животные вакцинируются против рожи и КЧС. Регулярно проводится чистка помещения, в котором содержатся свиньи.

Теперь рассмотрим риск заноса возбудителя африканской чумы свиней в частное подворье.

Первый показатель – кормовая база. В хозяйстве используются корма местного производства и пищевые отходы, поэтому имеется умеренный риск алиментарного заражения.

Следующий показатель - оценка контакта с другими животными (дикими, бродячими, грызунами, птицей). Хозяйство не закрытого типа, поэтому возможен косвенный и прямой контакт с дикими, бродячими животными, домашними плотоядными, грызунами, птицам. Риск заражения контактным путем – умеренный.

Общий риск заноса АЧС в хозяйство - умеренный.

Третий параметр оценки - возможность заноса возбудителя антропогенным путём.

Хозяин подворья имеет контакт с другими животными, в том числе и свиньями.

Делаем вывод, что риск высокий.

Заключительный показатель - оценка риска, связанная с обновлением поголовья. В данном хозяйстве используется собственный ремонтный молодняк. Риск заражения – незначительный.

Подставляя полученные данные в комбинационную матрицу, получаем, что общий риск заноса АЧС в хозяйство является умеренным.

Оценивая общую вероятность заноса африканской чумы свиней в частное подворье Сурского района в третью комбинационную матрицу, подставляем результаты первых двух. Риск умеренный - обусловлен он следующими факторами: возможен выгульный тип содержания и не исключается контакт свиней с дикими животными и гематофагами;

совместное содержание с другими видами животных, в т.ч. с выпасаемыми;

приобретением кормов, продуктов животного происхождения из неблагополучных регионов;

использование пищевых отходов без термической обработки в кормлении животных;

отсутствие системы учёта животных;

несвоевременное выявление и оповещение при подозрении на АЧС;

отказ от отчуждения и вынужденного убоя личного поголовья;

высокий риск механического распространения вируса фермерами, ветврачами и др.;

отсутствие безопасных мест для утилизации трупов;

нерегулярные дезинфекция и дезинсекция, без контроля эффективности.

Таким образом, по результатам качественно-сравнительного анализа, риск заноса африканской чумы свиней на территорию личного хозяйства является умеренным, но значительно превышающим риск в крупном свиноводческом комплексе.

Литература 1. http://www.rospotrebnadzor.ru/documents/letters/2550/.

2. http://vet73.ulgov.ru - Управление ветеринарии Правительство Ульяновской области.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 619: ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ И ОБОСНОВАНИЕ ЕГО РАЗРАБОТКИ ДЛЯ AEROMONAS HYDROPHILA ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY AND SUBSTANTIATION OF ITS WORKING OUT FOR AEROMONAS HYDROPHILA И.Г. Горшков, Т.И. Канаева I.G. Gorshkov, T.I. Kanaeva Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА The research innovation centre of microbiology and biotechnology Ulyanovsk state academy of Agriculture The main idea of this article is a necessity of creation of Test-system ELISA, for relief of methodic.

Aeromonas hydrophila - факультативная анаэробная грамотрицательная палочка с округленным концом, диаметр бактерии от 0,3 до 1 нм и 1-3,5 нм в длину, встречаются одиночно, парами или в короткой цепи (2).

A. hydrophila – распространенная бактерия, её можно легко обнаружить в стоячей, проточной, водопроводной и морской воде и почве, она была обнаружена во всех частях света. A. hydrophila также встречается в молоке и продуктах его переработки, мясопродуктах, рыбе и других морепродуктах (1).

Но данных о частоте обнаружении в продуктах санитарного контроля Aeromonas hydrophila на территории России нет, несмотря на, то что, роль Aeromonas hydrophila в возникновении пищевой инфекции уже доказана. Есть данные, говорящие о том, что микроорганизм является достаточно частой причиной острых кишечных заболеваний, в том числе и эпидемических вспышек среди людей.

В связи с этим в 1986 году, во время работы 14-го Международного конгресса микробиологов в Манчестере было проведено специальное рабочее совещание по проблеме аэромонадной инфекции (1).

Методы диагностики Aeromonas hydrophila, предлагаемые в различных методиках, требуют большого количества реактивов и продолжительны по времени (выращивание на селективных средах и постановка биохимических тестов).

Одним из наиболее часто используемых методов в микробиологии является в настоящее время иммуноферментный анализ (далее ИФА), в котором ферменты выступают в качестве неотъемлемого компонента тест-системы.

Сущность ИФА заключается в специфическом взаимодействии антитела и антигена с последующим присоединением к полученному комплексу коньюгата (антивидового иммуноглобулина, меченого ферментом). Фермент вызывает разложение хромоген-субстрата с образованием окрашенного продукта, который выявляется визуально либо фотометрически (3).

Существует множество вариантов постановки ИФА, из которых наибольшее практическое значение получил гетерогенный твердофазный иммуноферментный анализ.

Использование твердой фазы позволяет упростить процесс разделения компонентов реакции за счет иммобилизации одного из компонентов на твердой фазе и удаления субстанций, не участвующих в реакции.

Самым распространенным способом иммобилизации антител или антигенов является адсорбция - процесс, при котором часть молекул за счет ионных и гидрофобных взаимодействий, а также с помощью образования водородных связей присоединяется к поверхности твердой фазы. В качестве твердой фазы в большинстве Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии коммерческих диагностических наборов используют полистироловые планшеты или полистироловые шарики.

Для ферментативной метки коньюгата могут быть применены разнообразные ферменты: пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, бета-галактозидаза, глюкозооксидаза.

Широкое использование стандартной конфигурации 96-луночного планшета позволило унифицировать оборудование, необходимое для проведения иммуноферментного анализа. Принципиальная схема иммуноферментного анализа состоит из нескольких стадий.

Стадия 1. Специфические антигены пришиты к пластику лунок планшета. В лунку добавляется исследуемая сыворотка, и если в ней есть антитела (эти антитела называются первыми) к данным антигенам, во время инкубации происходит взаи моузнавание, в результате которого образуется принципиально значимая связь антиген/антитело.

Стадия 2. После отмывки лунок от несвязавшихся (а значит неспецифичных) субстанций в каждую лунку добавляются так называемые вторые антитела. Они узнают человеческие антитела определенного типа (IqA, IqG, IqM). К этим вторым антителам химически пришит активный фермент. Такое комплексное соединение называется коньюгат. Во время инкубации происходит взаимоузнавание первых и вторых антител, в результате чего в лунке образуется структура типа «сэндвич».

Стадия 3. После отмывки несвязавшегося коньюгата в лунку добавляется бесцветный субстрат, на который действует фермент. В результате субстрат превращается в окрашенный продукт. Количество окрашенного продукта измеряется на фотометре при определенной длине волны.

Таким образом, количество цветного продукта прямо пропорционально количеству фермента в лунке, а, значит, и количеству коньюгата в «сэндвиче». Количество коньюгата прямо пропорционально тому количеству комплекса антиген - антитело, которое получается на стадии 1 ИФА. Следовательно, измерение развившейся цветной реакции на стадии точно коррелирует с наличием специфических антител в анализируемой сыворотке. Время проведения анализа от 1-го до 3-х часов (4).

Для облегчения методики диагностики Aeromonas hydrophila следует разработать тест систему ИФА, что позволит ускорить процесс идентификации бактерии, как из проб продуктов питания, так и из проб, полученных от инфицированных (контаминированных) животных. Также метод ИФА позволит проводить одновременное исследование (испытание) сразу нескольких проб (образцов).

Литература 1. Канаева Т.И. Разработка методов выделения и идентификации бактерии Aeromonas hydrophila. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Саратов, 2009.

2. Определитель бактерий Берджи. М.: Мир, 1997.

3. Новые методы иммуноанализа. М., 1991.

4. Knut Karst. Vorkommen von vermehrungsfaehigen Aeromonasarten in Rohrinkrustationen eines staedtischen Wasserversordnungssystems. //Dissertation zur Erlangung des Doctorgrades der Zahnmedizin des Fachbereichs Humanmedizin der Johann Wolfgang Goethe Universitaet Frankfurt am Main, 2001.

– С. 8-11.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 619: БАКТЕРИЯ ВИДА AEROMONAS SALMONICIDA BACTERIUM OF KIND AEROMONAS SALMONICIDA Н.Г. Горшкова, Т.И. Канаева N.G. Gorshkova, T.I. Kanaeva Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА The research innovation centre of microbiology and biotechnology Ulyanovsk state academy of Agriculture In this article we can regard the history, of tribe Aeromonas’s nomemklatura, so short characteristic of bacteria Aeromonas salmonicida.

Впервые вид Aeromonas описал в своей работе Санарелли в 1891 году, хотя Циммерман уже в 1890 году в Хемнице смог выделить Bacillus punctatus из питьевой воды, а Эрнст в 1890 году выделил из лягушки Bacillus rancidа, но описание этих видов оказалось недостаточным для однозначного присвоения их к современному виду Aeromonas.

Свое название вид Aeromonas получил благодаря способности бактерий выделять газ. Затем вид разделился на две группы: подвижные и неподвижные виды. Последние сначала описывались как Baccilus эпидемии форели и лишь позднее как Bacterium salmonicida и Aeromonas salmonicidа.

Таксономические работы, которые базируются на фенотипических особенностях, разделяют Aeromonas сначала на виды и подвиды. Присутствие или отсутствие каких – либо селективных особенностей и их комбинаций друг с другом делают возможным классификацию видов и подвидов, и, соответственно, описание новых видов. Процесс классификации еще не завершен.

В определителе Берджи (1997) род Aeromonas описан в 5 главе как факультативная анаэробная граммотрицательная палочка. Она вместе с Vibrio, Photobacterium и Plesiomonas образует семейство Vibrionacea. Aeromonas описывают как палочку с округленным концом. Диаметр между 0,3 и 1 нм и 1-3,5 нм в длину. Встречаются одиночно, парами или в короткой цепи. Переходные стадии до сих пор неизвестны. Большинство подвижных видов оснащено жгутиками.

К настоящему времени признаны 15 видов бактерий Aeromonas: A. hydrophila, A. bestiarum, A. salmonicida, A. caviae, СМИ A., A. eucrenophila, A. sobria, A. veronii (биогруппы sobria и veronii), A. jandaei, A. schubertii, A. trota, A. allosaccharophila, A.

encheleia, A. popoffii и A. culicicola. В дополнение к этим разновидностям две группы скрещивания ДНК (HG11 и HG13) остаются без имени разновидностей (Soler и др.

2004).

В более ранней литературе возбудитель упоминался как «бактерия» или Бацилла salmonicida (McСrou 1952), позже Griffin и др. (1953) переименовал ее в Aeromonas salmonicida. McCarthy (1977) классифицировал A. salmonicida в две группы, включающие типичные и нетипичные напряжения (McCarthy 1977). Попов (1984) разделил A. salmonicida на три подразновидности: subsp. salmonicida, subsp.

achromogenes и subsp. masoucida, с типичным изолирует принадлежность первым подразновидностям. Четвертая подразновидность, subsp. smithia, была предложена Ostin и др. (1989), и subsp. pectinolytica Pawana и др. (2000). Типичное представление A. salmonicida subsp. salmonicida, формируют очень гомогенную группу (Belland & Trust 1988, Ostin и др. 1989, Toranzo и др. 1991, Dalsgaard и др. 1994, Nilsen и др.

1994b, Miyata и др. 1995, Umelo & Trust 1998, Livesley и др. 1999, О'Hiki и др. 2000), в то время как таксономия нетипичного A. salmonicida все еще неоднозначна, Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии независимо от попыток классифицировать их в несколько подразновидностей (Bernoth 1997b, Вон 1997, Wiklund & Dalsgaard 1998).

Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida – грамотрицательная факультативная анаэробная неподвижная, не образующей спор палочка (Griffin и др. 1953).

Оптимальная температура роста 20-22 C (Griffin и др. 1953). Максимальная температура роста - 34.5 C и минимальные 6 C (Griffin и др. 1953). Оптимальная pH среда от 5.3 до 9.0, в зависимости от состава культурной среды. В окраске Грамма преобладают короткие палочковидные нмбактерии с округленными концами, ширина 1 и длиной 1.7-2нм (Griffin и др. 1953), причем некоторые бактерии могут встречаться как одиночно, так и в парах и цепях различной длины.

Поверхность A. salmonicida заключена белковую оболочку, поверхностный слой (А –слой) которой, главным образом, состоит из A-белка и липополисахаридов.

Морфология нетипичного A. salmonicida является по существу тем же самым как тем из A. salmonicida subsp. Salmonicida, но размер колоний может быть меньшим, например. Биохимическая характеристика нетипичного A. salmonicida является более сложной чем тот из subsp. salmonicida, частично из-за разнородности среди этой группы, и частично из-за большого разногласия между различными лабораториями в результатах биохимических тестов на тех же самых культурах.(Dalsgaard и др. (1998).

У инфекций Aeromonas salmonicida есть обширный диапазон хозяина, в пресноводной и в морской среде и у дикой и обработанной рыбы всех возрастов (Herman 1968, McCarthy1977a, Bernoth 1997a, Wiklund & Dalsgaard 1998). Рыбы семейства Salmonidae, как полагают, являются самыми восприимчивыми к фурункулезу, особенно голец (Salvelinus fontinalis (Mitchill)), Атлантический лосось (Salmo salar L.) и также озерная форель (Salmo trutta L.) О типичной и нетипичной инфекции A. salmonicida сообщили во всем мире, за исключением Новой Зеландии и Южной Америки (Bernoth 1997a). Нетипичные инфекции, однако, происходят чаще всего в умеренных областях северного полушария, включая Канаду, США, Японию и центральную и Северную Европу (Wiklund & Dalsgaard 1998).

Механизм передачи A. salmonicida инфекция все еще сомнителен, несмотря на то, что болезнь известна и исследуется уже больше 100 лет (Munro & Hastings 1993). Жабры, кожа и раны скорее всего являются главными маршрутами заражения для A. salmonicida (Hodgkinson и др. 1987, Svendsen и др. 1999). Инфекция A.

salmonicida может легко распространяется через воду (McCarthy1977).

Кроме того, возможна вертикальная передача через зараженную икру.

Эксперименты McCarthy (1977) указали, что вертикальная передача - не существенный путь для фурункулеза. Маловероятен случай, что зараженные рыбы нерестятся, и если все таки оплодотворённые яйцеклетки будут случайно загрязнены, то A. salmonicida вряд ли выживет к стадии личинки. Тот же McCarthy также утверждал, что в свете отрицательных вертикальных экспериментов передачи и продемонстрированного короткого выживания A. salmonicida на икре рыбы, обычная дезинфекция икры является ненужной.

Достаточно большое значение имеет изучение бактерий вида Aeromonas salmonicida, так как они являются причиной возникновения фурункулеза рыб, и в основном затрагивают семейство Salmonidae, что наносит значительный экономический ущерб, но разработанной схемы выделения и идентификации нет.

Литература 1. Канаева Т.И. Разработка методов выделения и идентификации бактерии Aeromonas hydrophila. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Саратов, 2009.

2. Определитель бактерий Берджи. М.: Мир, 1997.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии 3. Cipriano C. Rocco. Graham L. Bullock. Furunculosis And Other Diseases Caused By Aeromonas salmonicida.// Fish Disease Leaflet, 2001.

4. Hirvela-koski Varpu. Fish pathogens aeromonas salmonicida and renibacterium salmoninarum: diagnostic and epidemiological aspects.// academic dissertation, Helsinki, on September 23th 2005.

5. Knut Karst. Vorkommen von vermehrungsfaehigen Aeromonasarten in Rohrinkrustationen eines staedtischen Wasserversordnungssystems.//Dissertation zur Erlangung des Doctorgrades der Zahnmedizin des Fachbereichs Humanmedizin der Johann Wolfgang Goethe Universitaet Frankfurt am Main, 2001. - С. 8-11.

УДК 619: К ВОПРОСУ О ВЫДЕЛЕНИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИИ ВИДА AEROMONAS SALMONICIDA TO THE QUESTION ON ALLOCATION AND IDENTIFICATION OF THE BACTERIUM OF KIND AEROMONAS SALMONICIDA Н.Г. Горшкова, Т.И. Канаева N.G. Gorshkova, T.I. Kanaeva Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА The research innovation centre of microbiology and biotechnology Ulyanovsk state academy of Agriculture In this article we can regard the question of bacterie’s allocation and identification Aeromonas salmonicida from environment’s objects.

Aeromonas salmonicida - малоизученный болезнетворный возбудитель заболеваний рыбы.

Бактерии вида Aeromonas – психрофильные обитатели водного биотопа и занимают доминирующую роль в богатых питательным веществом водоемах (Schubert, 1967). Впервые бактерии этого рода были выделены Циммерманом уже в 1890 г. К настоящему времени признаны 15 видов бактерии Aeromonas: A. hydrophila, A. bestiarum, A. salmonicida, A. caviae, СМИ A., A. eucrenophila, A. sobria, A. veronii (биогруппы sobria и veronii), A. jandaei, A. schubertii, A. trota, A. allosaccharophila, A.

encheleia, A. popoffii и A. culicicola. В дополнение к этим видам две группы скрещивания ДНК (HG11 и HG13) остаются без названия (Soler и др. 2004).

В определителе бактерий Берджи (1997) выделяется четыре подвида A.

salmonicida;

- а именно, salmonicida, masoucida, achromogenes и smithia.

Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida – грамотрицательная неподвижная факультативная, анаэробная палочка, не формирующая споры (Griffin и др. 1953).

Размер 1.7 нм – 1.0 нм. Оптимум роста 20-22 С. Оптимальная pH среда от 5.3 до 9.0, в зависимости от состава культурной среды.

Поверхность A. salmonicida заключена в белковую оболочку, поверхностный слой которой, главным образом состоит из A-белка и липополисахаридов.

Оксидаза и каталаза положительна. Разжижает желатин. Восстанавливает нитраты, продуцируют ДНКазу. Чувствителен к цефалотину и/или ампициллину.

Для бактериологической экспертизы обычно используют в качестве патологического материала внутренние органы: почка, повреждения в мускулах и коже. Кожная слизь и жабры могут также использоваться в качестве образцов для выделения.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Дифференциация неподвижных видов рода Aeromonas по биохимическим признакам Тест A. media A. salmonicida achromogenes masoucida salmonicida smithia Индол В + + - Проба с метиловым красным + + + + Реакция Фогеса-Проскауэ - - + - Использование цитрата В - - - (среда Симмонса) Образование H2S - - + - + Гидролиз мочевины - - - - Фенилаланиндезаминаза В - - - Лизиндекарбоксилаза - В В В Аргининдигидролаза + + + + (-) Орнитиндекарбоксилаза - - - - Гидролиз желатина + + + + + Рост в присутствии KCN + - - Использование малоната - - - Образование кислоты из Д- + + + + (+) глюкозы Образование газа из Д- - - + + (+) глюкозы Образование кислоты из Целлобиозы + - - - Дульцитола - - - Эритритола - - - Д-галактозы + + + + Глицерола В В в В (-) Мио-инозитола - - - - Лактозы В - - - Мальтозы + + + + Д-маннитола + - + + Д-маннозы + + + + Мелибиозы В-метил-Д-глюкозида Раффинозы - - - - L-рамнозы - - - Салицина В В в В Д-сорбитола - - - - (-) Сахарозы + + + - В Трегалозы + + + + Д-ксилозы - - - - Гидролиз эскулина В - + + Мукат, кислота - - - Тартрат (среда Джорданса) В - - Использование ацетета В Липаза (кукурузн масло) В + + + ДНКаза + + + + + Восстановление нитрата + + + + Оксидаза + + + + + Цитрат (среда Кристенсена) - - - Просветление среды с В тирозином Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии -0-10% штаммов положительные, (-)11-25%штаммов положительные, в-26 75%штаммов положительные, (+) 76-89% штаммов положительные, +90-100% штаммов положительные Анализируя данные таблиц, можно сказать, что дифференциация бактерий вида Aeromonas salmonicida основывается на реакциях с лизиндекарбоксилазой, реакция Фогесса – Проскауэ.


К сожалению, в научных публикациях мало информации, поэтому приходится основываться на публикациях зарубежных авторов.

Исходя из вышеизложенного, цель нашей работы является: разработка параметров выделения и идентификации бактерий вида Aeromonas salmonicida из объектов внешней среды.

Литература 1. Канаева Т.И. Разработка методов выделения и идентификации бактерии Aeromonas hydrophila. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Саратов, 2009.

2. Определитель бактерий Берджи. М.: Мир, 1997.

3. Cipriano C. Rocco. Graham L. Bullock. Furunculosis And Other Diseases Caused By Aeromonas salmonicida.// Fish Disease Leaflet, 2001.

4. Hirvela-koski Varpu. Fish pathogens aeromonas salmonicida and renibacterium salmoninarum: diagnostic and epidemiological aspects.// academic dissertation, Helsinki,on September 23th 2005.

5. Knut Karst. Vorkommen von vermehrungsfaehigen Aeromonasarten in Rohrinkrustationen eines staedtischen.

Wasserversordnungssystems.//Dissertation zur Erlangung des Doctorgrades der Zahnmedizin des Fachbereichs Humanmedizin der Johann Wolfgang Goethe Universitaet Frankfurt am Main, 2001. – С.8-11.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 619:616.98:579.852. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ АНАЭРОБНОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ (НЕКРОТИЧЕСКОГО ЭНТЕРИТА) ПТИЦ AVIAN NECROTIC ENTERITIS: SOME IMPROVEMENTS IN LABORATORY DIAGNOSTICS А.Н. Древило, О.Б. Новикова A.N. Drevilo, O.B. Novikova Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства All-Russian Research Veterinary Institute of Poultry Science Avian necrotic enteritis is an enterotoxaemia, caused by enteric Gram-positive bacterium Cl.

perfringens. The disease is widespread in poultry and increasing in incidence. Diagnostics of this disease, especially of associative forms is quite difficult. We improved the method of microbiological indication Cl. perfringens for the needs of poultry industry.

Анаэробная энтеротоксемия (некротический энтерит) птиц – это острая анаэробная инфекция, характеризующаяся диффузными фибринозно некротическими поражениями слизистой оболочки тонкого отдела кишечника.

Возбудителем является Clostridium perfringens типов А и С [9] (ранее возбудителем считался Cl.perfringens – типов В, С и D [6]).

Болезнь распространена повсеместно и наносит ощутимый ущерб промышленному животноводству. При субклиническом течении наряду с энтеритами регистрируют некрозы печени и мышечного желудка, что приводит к значительной выбраковке продукции на перерабатывающих предприятиях [9].

Определить причину энтеритов у птиц только по клиническим и патологоанатомическим признакам невозможно [8, 9], для подтверждения необходима лабораторная диагностика.

Согласно действующему ГОСТ [2], для подтверждения диагноза на это заболевание необходимо определить вид и тип возбудителя, выделенного из кишечника павших птиц, по основному летальному токсину в реакции нейтрализации. Однако часто в лабораториях ограничиваются ответом «выделен микроорганизм рода Clostridium», что совершенно неинформативно. Безусловно, индикация анаэробных микроорганизмов более сложна, чем, например, энтеробактерий, но вполне осуществима, даже при отсутствии специального оборудования, если учитывать основные физиологические особенности микроорганизмов данного рода.

Во-первых, основное требование – отбор материала от свежих трупов, поскольку через 3- 4 часа клостридии, обитающие при жизни в кишечнике птиц, павших от самых разных причин, активно проникают в органы и ткани трупа, поэтому обнаружение возбудителя в органах при отсутствии в содержимом кишечника не дает основания для постановки диагноза [6].

Для исследования отбирают измененные участки кишечника с содержимым, брыжеечные лимфатические узлы, кусочки печени, почек, селезёнки. Допускается по ГОСТ [2] и дает лучшие результаты именно отбор кусочков кишечника и паренхиматозных органов, что технически даже проще, чем посев пастеровской пипеткой.

В качестве транспортной среды не рекомендуется использовать физиологический раствор, поскольку он не обеспечивает поддержания стабильных уровней редокс–потенциала и рН, чем существенно ограничивает жизнеспособность анаэробных микроорганизмов.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Мы рекомендуем в качестве транспортной использовать тиогликолевую среду (среда для контроля стерильности), в пробирках по 5 мл. Она избыточно питательна за счет гидролизата казеина и экстракта кормовых дрожжей, содержит восстанавливающий компонент - тиогликолят натрия, небольшое количество агара (0, 075%) для снижения диффузии кислорода в среду, 0,5% глюкозы и имеет слабощелочной рН (7,2). Данная среда позволяет сохранить жизнеспособность таких эпидемически опасных и зоопатогенных микроорганизмов, как клостридии, сальмонеллы и кампилобактерии, до 3-х суток при комнатной температуре и до 5- суток при охлаждении до +4оС.

Индикация Cl.perfringens проще, чем остальных представителей рода, поскольку он является нестрогим анаэробом и обладает рядом морфологических и культурально-биохимических особенностей, отличающих его от других патогенных клостридий. Во-первых, в организме птиц Cl.perfringens образует капсулу, которую легко обнаружить при окраске мазков по Гинсу;

во-вторых, он неподвижен, что легко определяется в мазке «висячая капля» или «раздавленная капля»;

в-третьих, обладает сульфитредуцирующими свойствами, т.е. восстанавливает сульфиты до сульфидов, вызывая почернение в специальных средах, в-четвёртых, – дает быстрый специфический рост в молоке [6].

Согласно ГОСТ [2], из патологического материала делают мазки-отпечатки, которые окрашивают по Граму (Cl.perfringens – грамположительные крупные палочки с закругленными или обрубленными концами, споры крупные, овальные, центрально или субтерминально расположенные), и мазки на капсулу по Гинсу;

далее материал растирают в стерильной фарфоровой ступке с небольшим количеством физиологического раствора, полученный гомогенат засевают в пробирки с жидкими питательными средами.

При использовании среды для контроля стерильности в качестве транспортной можно сделать мазки и посевы из самой среды со дна пробирки, что значительно ускоряет работу.

При посеве на жидкие питательные среды следует помнить, что анаэробный тип дыхания гораздо менее продуктивен, чем аэробный, поэтому объем посева должен быть достаточно большим - 0,5 – 2 мл и производиться пастеровской пипеткой со дна пробирки и на дно, не допуская попадания пузырьков воздуха.

Колонии, выросшие на плотной питательной среде, также отбирают кончиком пастеровской пипетки и помещают на дно пробирки с жидкой питательной средой [6].

Первичный посев, согласно ГОСТ [2], производят в среду Китт-Тароцци (МППБ, мясо-пептонный печеночный бульон с кусочками печени под вазелиновым маслом). Общепризнано, что такая среда наилучшим образом сохраняет жизнеспособность и токсигенность культур клостридий и применяется по целому ряду показаний, среди которых получение роста анаэробных микроорганизмов, в том числе при малом количестве клеток в посевном материале или наличии каких-либо ингибирующих факторов. Перед посевом среду регенерируют – кипятят на водяной бане и быстро охлаждают для удаления растворенного кислорода (свежеприготовленную среду регенерировать не надо).

Однако среда Китт-Тароцци при первичном посеве не дает возможности индикации Cl.perfringens и обладает селективными свойствами только за счет создания анаэробных условий. Поскольку общей особенностью бактериальных болезней в промышленном птицеводстве в настоящее время является развитие смешанных инфекций [1], врачи лабораторий сталкиваются с обилием в первичных посевах микроорганизмов родов Bacillus, Enterococcus, Escherichia, Proteus, Salmonella, Staphylococcus и других, менее требовательных к питательным средам, и по-разному влияющих на рост клостридий;

например, энтерококки образуют Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии молочную кислоту, угнетающую рост клостридий, - для птиц это, несомненно, полезно, но очень затрудняет диагностику.

Для инактивации вегетативных клеток посевы обычно рекомендуют прогреть [2], но Cl.perfringens редко образует споры в организме животных [5, 7], и в результате после прогревания в посевах встречаются лишь спорообразующие микроорганизмы рода Bacillus, обычно B.cereus или B.mesentericus, очень похожие на клостридии морфологически, но синтезирующие фермент каталазу (для его обнаружения достаточно капли перекиси водорода) и способные расти в аэробных условиях на простых питательных средах.

В руководстве [3] рекомендуется делать первичный посев одновременно на среду Китт-Тароцци, молоко по Тукаеву (пептонная вода с 5-6% обезжиренного молока) и железосульфитный агар (Вильсон, Блер, 1924) для индикации сульфитредуцирующих свойств.

Мы предлагаем использовать метод двойной индикации с промежуточным накоплением и производить первичный посев на МППБ и железосульфитное молоко (Робинсон, Стоваль, 1937) [4] или лактозо-сульфитный бульон (lactose sulphite broth, Merck®) в пробирках. На этих средах Cl.perfringens можно выделить в смеси с энтерококками, которые на других средах способны заметно угнетать его рост.

Такой комплексный подход позволяет через 3 - 6 часов оценить рост по нескольким признакам:

1) помутнение и газообразование на МППБ;

2) образование чёрного губчатого сгустка со следами пузырьков газа и прозрачной сероватой сыворотки при посеве в железосульфитное молоко;


либо почернение лактозо-сульфитного бульона.

3) обнаружение в микроскопических препаратах, сделанных из МППБ, крупных грамположительных палочек, не обладающих активной подвижностью при исследовании культуры в препарате «висячая капля» или «раздавленная капля».

При получении указанных результатов можно сделать предварительное заключение об обнаружении в исследуемом материале Cl.perfringens.

Из проб, в которых имеется хотя бы один из вышеперечисленных признаков, мы рекомендуем пересеять материал на какую-либо жидкую питательную среду для накопления Cl.perfringens (МППБ с 1% глюкозы, мясо-казеиновую, казеиново дрожжевую);

при появлении признаков роста (помутнение, газообразование) – на плотную питательную среду с индикаторной системой на сульфитредуцирующие свойства (при наличии анаэростата – на поверхность среды, при отсутствии – глубинным способом) для получения чистой культуры и определения её токсигенности.

При посеве глубинным способом материал перемешивают с расплавленной средой, дают немного застыть и заливают сверху слоем той же среды или голодного агара толщиной не менее 0,2 см. Из почерневших участков среды, пересевая материал со дна чашки пастеровской пипеткой на МППБ, предварительно вырезав маленький участок верхнего слоя стерильным скальпелем или бактериологической петлей, можно получить чистую культуру Cl.perfringens.

При использовании усовершенствованной нами методики было исследовано 146 проб патологического материала от цыплят и кур разного возраста с птицефабрик различного технологического направления: 127 проб от цыплят бройлеров, 4 пробы от родительского стада бройлеров, 15 проб от яичных кур (внутренние органы, кишечник, помёт). От бройлеров мы выделили 7 культур Cl.perfringens;

от яичных кур - 3 культуры, всего 10 культур (из печени, селезёнки, тонкого отдела кишечника). Помимо культур клостридий от птиц были выделены следующие эпидемически опасные и зоопатогенные микроорганизмы: Salmonella Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии enteritidis, Salmonella gallinarum-pullorum, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Campylobacter jejuni и другие.

Таким образом, приведенная схема исследования (первичная индикация – накопление – подтверждающая индикация) дает возможность быстрого выделения чистой культуры возбудителя анаэробной энтеротоксемии птиц даже при сильном обсеменении патологического материала посторонней микрофлорой.

Исследования выполнены при поддержке гранта президента РФ для молодых учёных – кандидатов наук МК-3041.2009.4.

Литература 1. Борисенкова А.Н. Проблема бактериальных болезней птиц на современном этапе развития промышленного птицеводства. // Материалы научно практической конференции, посвящённой памяти академика Россельхозакадемии Р.Н.Коровина 5-6 июня 2007 года «Болезни птиц в промышленном птицеводстве. Современное состояние и стратегия борьбы».

С. 198-202.

2. ГОСТ 26503-85. Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики клостридиозов. М.: Издательство стандартов, 1985. 15 с.

3. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований.

М.: Медицина, 1972. С. 328 – 334.

4. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. под ред. Сидорова М.А. М.:

Колос, 1995. 319 с.

5. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология. М.: «Медицина», 1980. С. 140.

6. Ургуев К.Р. Клостридиозы животных. М.: Россельхозиздат, 1987. 183 с.

7. Garmory H.S. et al. Occurrence of Clostridium perfringens 2-toxin amongst animals, determined using genotyping and subtyping PCR assays // Epidemiological Infectology – 2000. 124, Р. 61 – 67.

8. Songer J.G. Clostridial Enteric Diseases of Domestic Animals // Clinical Microbiology Reviewes. – 1996. 9:2. Р. 216 – 234.

9. Williams R.B. Intercurrent coccidiosis and necrotic enteritis of chickens: rational, integrated disease management by maintenance of gut integrity // Avian Pathology.

– 2005. - 34:3, Р. 159 — 180.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 619: МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ПИРОПЛАЗМИДОЗОВ ЛОШАДЕЙ THE MOLECULAR DETECTION OF EQUINE PIROPLASMOSIS Т.В. Калашникова, М.М. Кузнецова T.V. Kalashnikova, M.M. Kuznetsova Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства Russian Research Institute of Horse Breeding Equine piroplasmosis (babesiosis), caused by Babesia caballi and Babesia equi, is an important protozoan disease worldwide from both veterinary and economic viewpoints.

Babesia caballi and Babesia equi have overlapping geographical distributions. In such areas, a horse may be infected by both species. The protozoan parasites Babesia equi and Babesia caballi replicates within erythrocytes. During the acute phase of infection, B.

equi and B. caballi can reach high levels of parasitemia, resulting in a hemolytic crisis.

Horses that recover from the acute phase of the disease remain chronically infected. The significance of the disease is sufficient that carriers of the infection are prohibited from international movement, a requirement that has substantial economic impact. This restriction is based on the presumption that chronically infected horses serve as reservoirs for vector ticks to acquire and subsequently transmit B. equi or B. caballi.

Пироплазмоз – трансмиссивная природно-очаговая инвазия, возбудителями которой являются простейшие из отряда Piroplasmatidae: Babesia caballi и Theileria equi, паразитирующие в клетках крови. Очаги пироплазмоза привязаны к ареалу его переносчиков – клещей родов Dermacentor и Healomma. Пироплазмоз наносит существенный ущерб коневодству, не только в виде непосредственной гибели животных и вынужденного убоя, но и снижения на длительной срок продуктивности и работоспособности, а также затрат на проведение ветеринарно-санитарных и лечебно-профилактических мероприятий. Диагностика на наличие в крови лошадей возбудителей пироплазмоза является обязательной при ввозе лошадей на территорию Российской Федерации и ряда сопредельных стран. Существующие в настоящее время тест-системы для диагностики пироплазмоза основаны на трудоемких и, зачастую, низкочувствительных и малоэффективных серологических и бактериологических методах. Применение тест-систем, основанных на использовании метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяет с очень высокой степенью специфичность обнаруживать ДНК возбудителей непосредственно в клиническом материале, без предварительного получения чистой культуры. Одним из важнейших достоинств этого метода является возможность быстрого получения результата (в течение нескольких часов) и невысокая стоимость массовых анализов.

Материалом для исследований послужили образцы крови 597 голов лошадей (Equus caballus), доставленных в лабораторию из различных регионов РФ, в том числе и неблагополучных по пироплазмозу (Алтайский, Краснодарский, Пермский, Ставропольский края, Республики Башкирия и Хакасия, Воронежская, Новосибирская, Ростовская и Смоленская области).

Кровь брали из яремной вены с соблюдением мер асептики и антисептики. В качестве антикоагулянта использовали Трилон Б. Кровь доставлялась в лабораторию в течение 1-2 суток после взятия.

Мазки крови окрашивали по Паппенгейму [1] и исследовали при помощи светового микроскопа OptiTech с использованием системы фотодокументирования Webbers MyScope 300M.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии На основании анализа нуклеотидных последовательностей гена 16S рибосомальной РНК, представленных в «GeneBank» Babesia equi и Babesia caballi, были выбраны несколько вариантов праймеров. ДНК выделяли с использованием набора «Diatom DNA Prep 200» («Изоген», г. Москва) по инструкции производителя и амплифицировали с использованием выбранных праймеров. Температура отжига составляла 58 °С. Продукты амплификации анализировали в 2% агарозном геле с добавлением бромистого этидия в гель. Видовую принадлежность возбудителя дифференцировали по массе конечных продуктов амплификации – 203 п.н. для Babesia caballi и 264 п.н. для Babesia equi. Интерпретацию результатов проводили визуально на трансиллюминаторе под УФ излучением.

При исследовании мазков крови обнаружилась следующая картина:

Рисунок 1 – Включения в эритроцитах Эритроциты 393 исследованных животных (увеличение 10х40) окрашивались в розовый цвет и не содержали посторонних включений.

Выявлено 17 образцов с наличием B.caballi и 6 - с B. equi. При этом в 3 образцах была выявлена смешанная инвазия. 19 образцов из дали положительный результат ПЦР, что составило 82,6%.

В 176 образцах были обнаружены темные включения в эритроцитах (от 1 до 10 штук на эритроцит) (рисунок 1), при этом в ряде случаев отмечались гипохромные эритроциты (14 голов), а в эритроцитах нескольких животных (4 головы) были обнаружены кольцевые структуры (рисунок 2).

Рисунок 2 – Кольцевые структуры в эритроцитах (увеличение 10х100) Недиффиренцируемые включения могли являться как признаками хронического течения пироплазмоза, так и остатками ядерного вещества эритроцитов (тельца Хауэлла-Жолли) или нестабильными формами гемоглобина (тельца Гейнца). Методом ПЦР была протестирована 41 случайно отобранная проба, при этом положительный результат дали 17 проб (41,52%). Полученные данные свидетельствуют о том, что применение ПЦР-диагностики позволяет выявить животных-носителей бабезиоза.

Рисунок 3 – Парные грушевидные элементы в эритроцитах (увеличение 10х100) Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Рисунок 4 - Фореграмма продуктов амплификации на наличие ДНК Babesia equi и Babesia caballi Примечание: Трек 1 – смешанная инвазия Babesia equi и Babesia caballi;

трек 2 – положительная реакция на Babesia equi;

трек 3 – положительная реакция на Babesia caballi;

трек 4 – положительный контроль Babesia caballi;

трек 5 – положительный контроль Babesia equi.

В период с 2009 по 2010 гг. нами наблюдались шесть жеребых кобыл, в эритроцитах которых были обнаружены B. caballi, и носительство пироплазмоза было подтверждено методом РСК. В начале 2010 г. две кобылы абортировали, а в мазках крови двух из четырех новорожденных жеребят были обнаружены единичные паразиты B.caballi, что может свидетельствовать о трансплацентарной передаче B.caballi от кобылы жеребенку.

Полученные результаты свидетельствуют, что ПЦР-диагностика может использоваться для выявления животных-носителей или случаев скрытого заболевания бабезиозом (особенно при отсутствии клинических симптомов), что особенно актуально для лошадей аборигенных пород.

Литература 1. Базарнова М.А., Морозова В.Т. Клиническая ветеринарная лабораторная диагностика. М.,1988.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 665.931.7:[664.959.5-404.8:577.114] ИЗУЧЕНИЕ КАЧЕСТВА ЖЕЛАТИНА ИЗ ОТХОДОВ РЫБНОГО СЫРЬЯ ВОЛГО-КАСПИЙСКОГО БАССЕЙНА И ВЬЕТНАМА STUDYING THE QUALITY OF GELATIN FROM FISHING WASTE MATERIALS FROM VOLGA-CASPIAN BASIN AND VIETNAM Т.Х. Као., Р.Г. Разумовская Т.H. Cao., R.G. Razumovskaya Астраханский государственный технический университет Astrakhan state technical university Having gotten gelatina on the basis of raw material from Volga-Caspian basin, and Vietnam. Presentation organoleptic of data on the organoleptic, phisico-chemical, microbiological and functional-technological performance of prototypes.

В соответствии с «Концепцией развития рыбного хозяйства Российской Федерации до 2010г.» одной из первоочередных мер повышения функционирования рыбной отрасли является рациональное использование водных биоресурсов. Одним из основных направлений рационального использования рыбных ресурсов является эффективное использование отходов, образовавшихся при их обработке.

В настоящее время наблюдается повышенный интерес к поиску новых источников сырья и способов их переработки в качественную пищевую продукцию.

Одним из показателей качества продукции является консистенция. Для придания требуемой структуры в пищевые продукты вводят добавки белковой или полисахаридной природы. При этом предпочтительно использовать структурообразователи натурального происхождения, которыми отечественная пищевая промышленность обеспечена недостаточно. Рынок России насыщен в основном структурообразующими добавками зарубежного производства.

Наиболее перспективным направлением в получении новых видов натуральных, недорогих, высококачественных структурообразователей является переработка коллагенсодержащих вторичных рыбных ресурсов (голова, кости, кожа, плавники, чешуя и др.), сырьевая база которых в России используется не полностью [3].

Для решения данной задачи научным коллективом кафедры «Пищевая биотехнология и технология продуктов питания» Астраханского государственного технического университета разработана технология получения ихтиожелатина на основе отходов переработки рыб Волго-Каспийского бассейна и Вьетнама.

Целью данного исследования являлось изучение показателей качества полученного ихтиожелатина. Объектом исследования служил ихтиожелатин в сухом порошкообразном виде, полученный из кожи Вьетнамского сома Pangasius bocoutri и кожи щуки Волго-Каспийского бассейна.

Нами изучены органолептические и физические показатели (внешний вид, цвет, запах, вкус, размер частиц, наличные примеси), химический состав (массовая доля влаги, белка, жира, углеводов, минеральных веществ) и функционально технологические (влагоудерживающая способность, жироудерживающая способность, пенообразующая способность, стабильность пены) и микробиологические показатели ихтиожелатина (количество мезофильных аэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), наличие бактерий группы кишечной палочки (БГКП), патогенной микрофлоры.

Органолептические и физические показатели оценивали в соответствии с нормативной документацией. Результаты исследований показали, что готовый ихтиожелатин является качественным, соответствует требованиям ГОСТ 11293- Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии «Желатин»: полученный продукт имеет внешний вид – порошок, цвет – светло желтый до кремового, без постороннего вкуса и запаха, размер частиц – 2–3мм, наличие примесей – не обнаружены. Ихтиожелатин обладает хорошей желирующей способностью и высокой вязкостью, динамическая вязкость 10% раствора не менее 25 мПа.С. Прозрачность раствора ихтиожелатина с массовой долей 5% составляет более 50%. Водные растворы ихтиожелатина при охлаждении образуют плотный, упругий студень, при нагревании переходят в раствор.

Химические показатели полученного ихтиожелатина определяли стандартными методами по ГОСТ 7636 «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки». Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица Химический состав ихтиожелатина Наименование показателя Массовая доля, % Влага 6,7-11, Белок 87,1-90, Углеводы 0,65-0, Жир 0,35-0, Минеральные вещества 0,9-1, Из таб.1 видно, что ихтиожелатин обладает высоким качеством. Содержание белков коллагеного характера в готовом продукте достигает 90,99%, содержание минеральных веществ и жира незначительно.

В данной работе были определены водо- и жироудерживающая способность методом центрифугирования [4]. Пенообразующую способность и стойкость пены ихтиожелатина определяли растворением навески в воде, взбалтыванием и замером высоты пены [1].

Анализ функционально-технологических свойств показал, что полученный ихтиожелатин характеризуется высокой способностью удерживать влагу и жир.

Влагоудерживающая способность составляет до 500%, жироудерживающая достигает 300%, пенообразующая способность не менее 75%. Образующая пена имеет высокую стабильность.

Микробиологические показатели определяли общепринятыми методами в соответствии с Инструкцией по санитарно - микробиологическому контролю производства пищевой продукции № 5319-91 и ГОСТ 11293-89 [2]. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица Микробиологические показатели ихтиожелатина Наименование показателя Ихтиожелатин Мезофильные аэробные и факультативно анаэробные м/о, КОЕ, в 1г желатина не более Бактерии группы кишечных палочек (колиформные) в 0,01г желатина Не обнаружены Патогенные м/о, в том числе сальмонеллы, в 25г Не обнаружены Из полученных результатов, представленных в таб.2, видно, что количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) в 1г продукта составляют 2*104 КОЕ, что ниже данных предусмотренных стандартом для пищевого желатина. Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) и патогенная микрофлора отсутствуют.

Из результатов проведенных исследований следует, что полученный ихтиожелатин из кожи рыб по разработанному способу имеет высокие Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии органолептические показатели, химический состав с высшим содержанием белка коллагеного характера, обладает рядом ценных функционально-технологических свойств, по микробиологическим показателям не превышает допустимых стандартом норм. В связи с этом можно сделать вывод о том, что использование отходов рыбоперерабатывающих предприятий Вьетнама и Волго-Каспийского бассейна позволит решить проблему утилизации и рационального использования сырья и получить желатин, имеющий широкий спектр использования, а имено применяться как структурообразователь в пищевой промышленности, в медицинских и фотографических целях, использоваться для приготовления микробиологических сред, осветления виноматериалов, напитков и в других целях.

Литература 1. ГОСТ 7636-85. Рыба и продукты переработки рыбы и морских млекопитающих. Методы химического и физического исследования.

2. ГОСТ 11293-89. Желатин. Технические условия.

3. Сколков, С.А. Разработка технологии кожи из шкур рыб Волго-Каспийского бассейна [текст]. Автореф. дис. на соиск. канд. тех. наук: 05.18.04/ Сколков С.А.–М. –2004.

4. Щербаков, В. Г., Иваницкий, С. Б. Производство белковых продуктов из масличных семян [текст]. – М.: Агропромиздат, 1987. – 152 с.

УДК 619: КУЛЬТИВИРОВАНИЕ СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ НА ПЛОТНЫХ СРЕДАХ CULTIVATION OF SULFATE-REDUCING BACTERIA ON SOLID MEDIA Н.Н. Карамышева, А.Г. Шестаков, Д.А. Васильев N.N. Karamysheva, A.G. Shestakov, D.A. Vasilyev Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА The research innovation centre of microbiology and biotechnology Ulyanovsk state academy of Agriculture Resulis of working out of the scheme of allocation and identification of bacteria of kind Desulfovibrio desulfuricans are described. The presented scheme of allocation allows to define in current 96 hours bacteria of this kind.

Сульфатредукция – процесс восстановления минеральных солей сульфатов 2 (SO4 ). Этот микробиолгический процесс является одним из важнейших в круговороте серы на земной поверхности. Этот процесс был открыт русским химиком Н. Д. Зелинским в 1890—1893 гг. Сульфатредукция происходит повсеместно в пресных и соленых водоемах, в болотах, вулканических кратерах, в кишечнике теплокровных животных и т.п. Основная масса сероводорода на планете производится сульфатредуцирующими бактериями. Чистая культура сульфатредуцирующих бактерий была выделена Бейеринком в 1895 г.

Сероводород - токсическое вещество и сильный восстановитель, при окислении которого в воде и иловых отложениях поглощается кислород, и образуются анаэробные зоны. Кроме того, смещение электрохимического потенциала в кислую сторону приводит к порче промышленного оборудования и вызывает коррозии металлов.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 



Похожие работы:





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.