авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 13 |
-- [ Страница 1 ] --

Проведение школы-конференции осуществлено при поддержке

Российского фонда фундаментальных исследований

Мирошников А.И., Председатель оргкомитета.Председатель ПНЦ РАН,

Председатель программного комитета

конференции

Программный комитет:

Овчинников Л.П., академик, директор ИБ РАН

Шувалов В.А, академик, директор ИФПБ РАН

Боронин А.М., член-корр. РАН, директор ИБФМ РАН,

Фесенко Е.Е., член-корр. РАН, директор ИБК РАН

Иваницкий Г.Р., член-корр. РАН, директор ИТЭБ РАН Кудеяров В.Н., д.б.н., проф., директор ИФХБПП РАН Пермяков Е.А., д.б.н., проф., директор ИБП РАН Лахно В.Д., д.ф-м.н., директор ИМПБ РАН Дагкесаманский Р.Д., д.ф-м.н., директор ПРАО АКЦ ФИАН Тирас Х.П., д.б.н., проф., ректор ПущГУ Оргкомитет:

Савинцев И.В., Заместитель председателя оргкомитета. Зам. председателя ПНЦ РАН Хохлова Т.И., ИБП РАН, Заместитель председателя оргкомитета. Председатель Совета молодых учёных, исследователей и специалистов ПНЦ РАН Петрова Р.Р., ИБК РАН, Координатор оргкомитета Мубаракшина Э.К., ИБК РАН, секретарь Дёмин Д.В., ИФБП РАН, секретарь Назарова Г.Н., ПНЦ РАН, учёный-секретарь Михайлов А.В., ИФХиБПП РАН, Отдел информационной поддержки Кондратьев М.С., ИБК РАН, Отдел информационной поддержки Осипенко М.А., ИБК РАН, «Общая и функциональная биохимия», руководитель секции Таланов Е.Ю., ИТЭБ РАН, «Общая и функциональная биохимия», руководитель секции Шапырина Е.В., ИБФМ РАН, «Молекулярная биология», руководитель секции. Координатор пленарной секции.

Лаптева Ю.С., ИБП РАН, «Молекулярная биология», руководитель секции Квиткина А.К., ИФХиБПП РАН, «Экология», руководитель секции Темралеева А.Д., «Экология», руководитель секции Гудков С.В., ИТЭБ РАН, «Физиология животных и биомедицина», руководитель секции Марсагишвили Л.Г., ИТЭБ РАН, «Физиология животных и биомедицина», руководитель секции Чурочкина О.А., ФИБХ РАН, «Прикладная биотехнология», руководитель секции Самаркина О.Н., ФИБХ РАН, «Прикладная биотехнология», руководитель секции Овчинников А.Ю., ИФХиБПП РАН, «Почвоведение и биогеохимия», руководитель секции Храмцова Е.А.а, ИБК РАН, «Биофизика клетки, органов и систем», руководитель секции Кабанов А.В., ИБК РАН, «Биофизика клетки, органов и систем», руководитель секции Лисов А.В., ИБФМ РАН, «Биология и экология микроорганизмов», руководитель секции Немашкалов В.А., ИБФМ РАН, «Биология и экология микроорганизмов», руководитель секции Соболев Е.В., ИМПБ РАН, «Математические проблемы биологии», руководитель секции Шигаев А.С., ИМПБ РАН, «Математические проблемы биологии», руководитель секции Антонова О.Ю., ИБК РАН, «Приборы и методы для биологии, биотехнологии и медицины», руководитель секции Кубасова Т.С., Пущинский музей экологии и краеведения, «Социокультурная ниша биологии», руководитель секции Леонова М.М., ИФПБ РАН, «Фотобиология и физиология растений», руководитель секции Запрудина М.В., вёрстка Хохлов А.А., дизайн УДК 573.4;



574.6;

577.1;

577.2;

577.3;

577.4;

581.5;

591.1;

631. БИОЛОГИЯ – НАУКА ХХI ВЕКА: 14-я Пущинская международная школа-конференция молодых ученых, (Пущино, 19 - 23 апреля 2010 года). Сборник тезисов.

Международная школа-конференция молодых ученых – ежегодное научное мероприятие, организуемое и проводимое Пущинским научным центром РАН, институтами ПНЦ, Пущинским государственным университетом на базе Пущинского научного центра Российской академии наук. Целью школы-конференции является ознакомление молодых ученых с перспективами и новейшими достижениями в области физико-химической биологии. Работа школы-конференции проводится в форме пленарных и секционных заседаний по следующим направлениям: молекулярная биология, общая и функциональная биохимия, биофизика и биомедицина, биология и экология микроорганизмов, почвоведение и биогеохимия, экология животных и растений, математическая биология, прикладная биотехнология. Пленарные заседания включают в себя лекции ведущих российских ученых, охватывающие перспективные направления физико-химической биологии;

молодые исследователи имеют возможность доложить результаты своей работы в форме устных сообщений и стендовых докладов в ходе секционных заседаний. Помимо научных мероприятий в программу работы школы-конференции входят экскурсии по институтам ПНЦ РАН, выставки научного оборудования, круглые столы-диспуты по актуальным проблемам современной науки, культурная программа. В работе школы-конференции ежегодно принимают участие более 500 молодых исследователей из городов России, стран СНГ и дальнего зарубежья ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ВЛИЯНИЕ АГОНАЛЬНОЙ ФАЗЫ ГИПОТЕРМИИ НА СУБСТРАТНУЮ СПЕЦИФИЧНОСТЬ МОНОАМИНОКСИДАЗЫ МОЗГА Абдуллаев В.Р.1, Абдуллаев Р.А. Дагестанский государственный университет, Махачкала (Россия), Институт “ЮЖДАГ”, Дербент (Россия).

E-mail: boys11@mail.ru Для решения фундаментальных проблем биологической и медицинской химии, непосредственно связанных с актуальными задачами современной теоретической и клинической медицины первостепенное значение имеет изучение природы ключевых ферментов. К числу таких систем принадлежат аминооксидазы окислительные ферменты, которые катализируют дезаминированием важнейшие нейромедиаторов и биогенных аминов участвующих в регуляции функции ЦНС.

Результаты исследования активности моноаминоксидаз (МАО) типа А и Б показывают, что окислительное дезаминирование серотонина в митохондриальной фракции мозга интактных крыс протекает более интенсивно, чем дезаминирование бензиламина. При этом активность дезаминирования ГАМК, гистамина, спермина, глюкозамина на один порядок ниже, чем серотонина.





У животных после глубокой гипотермии 20°С интенсивность окислительного дезаминирования серотонина в митохондриальной фракции мозга несколько возрастает, а бензиламина существенно не изменяется. При гипотермии 16-15°С активность моноаминоксидазы типа А снижается на 19%, а моноаминоксидазы типа Б остается на уровне найденной у контрольной группы животных.

При сверхглубокой гипотермии в митохондриях мозга параллельно со снижением активности МАО типа А значительно интенсифицируется дезаминированием гистамина, спермина, глюкозамина. Модификация свойств МАО, в частности приобретение ею способность дезаминировать глюкозамин, являющийся компонентом мембран, может способствовать нарушению мембранных структур при сверхглубокой гипотермии.

АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМА ГОЛОВНОГО МОЗГА В ДИНАМИКЕ ЗИМНЕЙ СПЯЧКИ Абдуллаев В.Р.

Дагестанский государственный университет, Махачкала (Россия).

E-mail: vagab@mail.ru Зимняя спячка мелких грызунов является прерывистым процессом.

Считают, что вход в спячку и выход из нее являются потенциально опасными периодами, когда у животных происходит резкая смена одного метаболического состояния на другое. В результате этого в тканях зимоспящих животных интенсифицируется процессы образования активных форм кислорода (АФК).

Несмотря на потенциальную возможность активации процессов образования АФК, в тканях зимоспящих животных не возникают патологические изменения.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Исследование антиоксидантных ферментов в коре больших полушарий головного мозга сусликов показал, что осенью перед погружением в спячку активность супероксиддисмутазы (СОД) снижается на 50%. Самая низкая активность СОД в головном мозге сусликов наблюдается при кратковременной и месячной спячке. Только после 6-ти месяцев гибернации активность СОД существенно возрастает.

В отличие от СОД, активность каталазы в коре больших полушарий мозга сусликов повышается при подготовке к зимней спячке, и остается повышенной на этапах, кратковременной, 1-но, 3-х, 6-ти месячной спячки. Активность каталазы головного мозга в начале, середине и конце баута, а так же при межбаутном пробуждении резко повышается по сравнению с таковой у животных в начале спячки.

Исследование низкомолекулярных гидрофильных антиоксидантов в коре больших полушарий головного мозга сусликов показало, что их уровень перед погружением в спячку более чем в 2 раза превышает летний контрольный уровень. Общая активность гидрофильных антиоксидантов в мозге остается высокой до конца спячки, а также через две недели после окончательного пробуждения животных. Спонтанные пробуждения животных способствуют повышению в мозге активности низкомолекулярных гидрофильных антиоксидантов относительно их уровня в торпидном состоянии.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЛЕКТИНОВ АЗОСПИРИЛЛ НА СОДЕРЖАНИЕ ОКСИДА АЗОТА В КОРНЯХ ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ Аленькина С.А., Наконечная О.И., Никитина В.Е.

Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, г. Саратов (Россия) E-mail: аlenkina@ibppm.sgu Исследователями молекулярных механизмов функционирования микробно-растительных ассоциаций ведется активный поиск рецепторных структур микро- и макропартнеров и изучение ответных реакций, возникающих при установлении ассоциативных взаимодействий. В ассоциации «пшеница Azospirillum» большой интерес представляют бактериальные лектины в связи с их известными информационными функциями в различных биологических системах.

Было показано, что лектины азоспирилл наряду с другими поверхностными структурами способны не только участвовать в адгезии бактерий на корнях растений, но и влиять на метаболизм растительной клетки стимулировать прорастание семян, проявлять по отношению к растительной клетке митогенную и ферментмодифицирующую активности. Оставался открытым вопрос, изменение метаболизма растительной клетки под действием лектинов азоспирилл происходит с участием NO-синтазной сигнальной системы или без нее. Ключевой молекулой-синтазной сигнальной системы является оксид азота (NO).

Показано, что лектины двух штаммов азоспирилл — A. brasilenseSp7 и его мутанта по лектиновой активности A. brasilenseSp7.2.3 в концентрации 40 мкг/мл вызывает два пика индукции синтеза оксида азота в корнях проростков пшеницы, происходящей через 3 и 26 ч совместной инкубации. Различия между лектинами родительского и мутантного штаммов наблюдались лишь в случае 26 - часовой инкубации и лектин родительского штамма в большей степени активировал продукцию оксида азота в корнях. Добавление в среду инкубации корней с лектинами кальция в виде СаСl2 (0,1мМ) приводило к снижению индуктивной ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ активности обоих лектинов после 26 ч инкубации.

Таким образом, данные свидетельствуют о том, что лектины азоспирилл способны активировать продукцию оксида азота, и тем самым выступать в качестве индукторов адаптационных процессов корней проростков пшеницы.

ВЛИЯНИЕ МЕГАФЕРОНА НА СОДЕРЖАНИЕ ПРОДУКТОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ ПЕЧЕНИ ОБЛУЧЕННЫХ КРЫС Альметова Ф.Э., Умарова Г.Б., Гафуров М.Б.

Национальный университет Узбекистана им. М. Улугбека, Ташкент (Узбекистан).

E-mail: surae_dalimova@mail.ru Многочисленными исследованиями установлено, что рентгеновское облучение в дозе 1,5-2,0 Грей вызывает стойкие изменения в составе хроматина и синтеза белка в клетках печени, по направленности напоминающие изменения, происходящие при ускоренном старении животных. Кроме того, у животных при облучении указанными дозами наблюдаются характерные для спонтанного старения изменения и со стороны других показателей, в частности интенсивности ПОЛ, внутри- и внеклеточного перераспределения электролитов, микросомального окисления и др.

Целью исследования явилось установление антиоксидантного действия нового супрамолекулярного комплекса, состоящего из мегосина (производное госсипола) и глицирризиновой кислоты (выделена из корня солодки). 6-ти месячные крысы, весом 180-200 гр. облучали дозой 2 Грей на установке РУМ- (мощность дозы 0,87 Гр/мин, при 15 мА, 180 кВ). Через день после облучения экспериментальным животным вводили мегаферон в дозе 750 мкг/1000гр веса тела в течение 3 суток.

Было установлено, что содержание конечного продукта ПОЛ- МДА в результате облучения увеличивается на 90-100%. Введение мегаферона приводило к снижению МДА на 75%. Полученные данные свидетельствуют, что ионизирующее излучение вызывает интенсификацию процессов ПОЛ в мембранах гепатоцитов. Мегаферон, являясь хорошим антиоксидантом, способствует стабилизации мембран путем снижения содержания продуктов липопероксидации.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-МНОЖЕСТВЕННЫХ ФОРМ БЕЛКОВ В ИЗУЧЕНИИ ПОЛИМОРФИЗМА СОРТОВ ПШЕНИЦЫ Ахмадиева А.А., Шаяхметов И.Ф., *Никонов В.И., Коновалова Т.Н.

Башкирский государственный университет, *Башкирский НИИ сельского хозяйства РАСХН, Уфа, IzgamSh@mail.ru Задачей настоящих исследований было выявление гетерогенности запасных белков – глиадинов и эстеразного комплекса в зерновках пшеницы с использованием электрофоретического анализа с целью структуризации генетического разнообразия районированных в республике Башкортостан сортов за последние годы. Такой подход уже более 30 лет успешно применяется для решения различных фундаментальных и прикладных проблем генетических ресурсов растений. Позерновой электрофоретический анализ глиадина установил наличие значительного внутривидового полиморфизма по данному признаку. Анализ электрофореграмм белков (глиадинов) показал, что каждый изученный сорт имеет свой характерный спектр. При этом наибольшее число компонентов содержит -зона электрофореграмм – до 8 полос;

- до 3;

– до 6 и – до 3. Эти компоненты отражают генетические особенности данного вида пшеницы. Сорт озимой пшеницы Башкирская-26, в отличие от других изученных ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ сортов мягкой пшеницы, содержит наименьшее число компонентов – 11. У сортов Эскада-70 и Омская-35 наблюдается наибольшее число компонентов – 16 и 17 соответственно. Сортоспецифические компоненты присутствуют во всех исследуемых образцах пшеницы. Среди сортов твердых пшениц наименьшим количеством компонентов выделяется сорт Башкирская-27;

сорта Безенчукская-200 и НИК содержат 15 и 17 компонентов соответственно. У сорта НИК выявлен внутрисортовой полиморфизм, который заключается в содержании двух типов спектра. Основной спектр составляет 93%, 7% зерна имеет отклонение от основного спектра, которое отражается в структуре – фракции глиадина. На основании изучения изоэнзимного состава эстеразы из зерна различных сортов показано, что изоформы эстеразы зерна пшеницы могут служить дополнительными биохимическими маркерами при изучении генетического разнообразия и использованы, наряду с запасными белками проламинами, в качестве маркера в определении полиморфности селекционного материала.

АНТИОКСИДАНТНЫЕ ФУНКЦИИ ПОЛИАМИНОВ В АДАПТАЦИИ ESCHERICHIA COLI К ДЕЙСТВИЮ АНТИБИОТИКОВ Ахова А.В., Шумков М.С., Зырянова Е.В.

Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь (Россия).

E-mail: akhovan@mail.ru Известно, что действие разнообразных антибиотиков сопровождается развитием в бактериальной клетке окислительного стресса, что становится одной из причин ее гибели. В этой связи представляет интерес изучение роли систем адаптации к окислительному стрессу в формировании антибиотикоустойчивости.

Противостоять окислительному стрессу наряду с ферментами антиоксидантной защиты бактериям позволяют низкомолекулярные вещества - антиоксиданты, в том числе нормальные продукты обмена E. coli полиамины. Целью настоящей работы стало изучение роли антиоксидантных свойств полиаминов в адаптации E. coli к действию антибиотиков разных классов. Фторхинолоновые, -лактамные и аминогликозидные антибиотики вызывали в клетках E. coli повышение продукции гидроксильных радикалов и индукцию гена soxS, уровень экспрессии которого прямопропорционален количеству супероксиданионов. Кроме того, действие антибиотиков сопровождалось фрагментацией ДНК, которая, как известно, является одной из основных мишеней для активных форм кислорода.

Добавка полиаминов путресцина и спермидина в этих условиях снижала как экспрессию soxS, так и количество гидроксильных радикалов. Кроме того, полиамины оказывали протекторное действие на ДНК, снижая степень ее фрагментации, вызванной действием амикацина и левофлоксацина.

Определение минимальных ингибиторных концентраций исследованных антибиотиков и выживаемости E. coli показало, что в конечном итоге действие полиаминов сопровождалось повышением устойчивости микроорганизмов к антибиотикам. Таким образом, полиамины, проявляя антиоксидантные свойства, защищают компоненты бактериальной клетки, в том числе ДНК, от окислительного повреждения, индуцированного действием антибиотиков разных классов, что способствует повышению антибиотикоустойчивости. Работа выполнена по программе президиума РАН МКБ (№ 01200963690) и поддержана грантом РФФИ (№ 09-04-99006-р-офи), а также грантом молодых ученых УрО РАН.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ВЛИЯНИЕ ОКСИГУМАТА НА ФОСФОЛИПАЗНУЮ АКТИВНОСТЬ ПРИ ПРОРАСТАНИИ СЕМЯН АРАХИСА Абдуллаева М.М., Бабаханова Д.Ш., Валиханов М.Н.

Национальный университет Узбекистана, ВУЗ городок, 100174 Ташкент, Узбекистан Известно, что при прорастании семян ряд химических соединений используется в качестве стимулятора. Одним из таких соединений является оксигумат, используемый при выращивании бахчевых культур. Данное соединение влияет на рост, развитие, урожайность и устойчивость растений против различных болезней. В связи с этим целью настоящей работы является изучение влияния оксигумата на фосфолипидный обмен, а именно на активность фосфолипазы-Д при прорастании семян арахиса.

Содержание отдельных фосфолипидов под влиянием оксигумата изменяется интенсивно и обмен фосфолипидов увеличивается в несколько раз.

Это подтверждается увеличением содержания фосфатидной кислоты, являющейся продуктом гидролиза фосфолипидов.

С целью изучения трансферазной активности фосфолипазы-Д при прорастании арахиса нами были взяты пробы из семян выращенных в водной и оксигуматной средах с 1 по 3 день. Инкубацию проводили с 0 до 120 минут и при этом изучали изменения фосфолипидов. Время инкубации связано с активностью фермента фосфолипазы-Д, что приводит к количественному увеличению основных фосфолипидов. В первые дни прорастания содержание основных фосфолипидов в семенах выращенных в средах содержащих оксигумат значительно увеличивается. Так, содержание фосфатидилинозита возросло в 2- раза, содержание фосфатидилхолина в 1,5-2 раза. Содержание продукта гидролиза фосфолипидов – фосфатидной кислоты также возросло в несколько раз.

Установлено, что более высокий показатель фосфолипидного обмена под влиянием оксигумата свидетельствует о том, что оксигумат выполняет, роль стимулятора активности фермента фосфолипазы Д.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-МНОЖЕСТВЕННЫХ ФОРМ БЕЛКОВ В ИЗУЧЕНИИ ПОЛИМОРФИЗМА СОРТОВ ПШЕНИЦЫ Ахмадиева А.А., Шаяхметов И.Ф., *Никонов В.И., Коновалова Т.Н.

Башкирский государственный университет, *Башкирский НИИ сельского хозяйства РАСХН, Уфа, IzgamSh@mail.ru Задачей настоящих исследований было выявление гетерогенности запасных белков – глиадинов и эстеразного комплекса в зерновках пшеницы с использованием электрофоретического анализа с целью структуризации генетического разнообразия районированных в республике Башкортостан сортов за последние годы. Такой подход уже более 30 лет успешно применяется для решения различных фундаментальных и прикладных проблем генетических ресурсов растений. Позерновой электрофоретический анализ глиадина установил наличие значительного внутривидового полиморфизма по данному признаку. Анализ электрофореграмм белков (глиадинов) показал, что каждый изученный сорт имеет свой характерный спектр. При этом наибольшее число компонентов содержит -зона электрофореграмм – до 8 полос;

- до 3;

– до 6 и – до 3. Эти компоненты отражают генетические особенности данного вида пшеницы. Сорт озимой пшеницы Башкирская-26, в отличие от других изученных сортов мягкой пшеницы, содержит наименьшее число компонентов – 11. У сортов Эскада-70 и Омская-35 наблюдается наибольшее число компонентов – 16 и 17 соответственно. Сортоспецифические компоненты присутствуют во всех исследуемых образцах пшеницы. Среди сортов твердых пшениц наименьшим количеством компонентов выделяется сорт Башкирская-27;

сорта Безенчукская-200 и НИК содержат 15 и 17 компонентов соответственно. У сорта НИК выявлен внутрисортовой полиморфизм, который заключается в содержании двух типов спектра. Основной спектр составляет 93%, 7% зерна имеет отклонение от основного спектра, которое отражается в структуре – фракции глиадина. На основании изучения изоэнзимного состава эстеразы из зерна различных сортов показано, что изоформы эстеразы зерна пшеницы могут служить дополнительными биохимическими маркерами при изучении генетического разнообразия и использованы, наряду с запасными белками проламинами, в качестве маркера в определении полиморфности селекционного материала.

ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНЫХ ГРУПП ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ b-ГЛЮКОЗИДАЗЫ ЛИСТЬЕВ ГОРОХА Баркалова О.Н., Ершова А.Н.

Воронежский государственный педагогический университет, Воронеж (Россия).

E-mail: oks-bar@mail.ru -Глюкозидаза (b-D-глюкозидгидролаза, ЕС 3.2.1.21) избирательно катализирует гидролитическое расщепление b-глюкозидной связи между двумя остатками гликона или связи между глюкозой и арил- или алкилагликоном.

Объектом исследования служили 10- дневные проростки гороха (Рамонский 77), из которых был получен электрофоретически гомогенный ферментативный препарат цитоплазматической -глюкозидазы с удельной активностью 731,7 Е·мг-1. Провели изучение активных групп фермента, участвующих в механизме катализа, с использованием ингибиторов (р-СМВ, фторид натрия, арсенит натрия). р-СМВ (10-6 М) подавлял активность фермента на 70-80%, что свидетельствовало о наличии SH-групп в активном центре b глюкозидазы. Известно, что соединения, содержащие близкорасположенные SH группы, имеют высокое сродство к арсениту натрия. Арсенит (10-3 М) снижал ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ активность b-глюкозидазы на 30%. Фторид натрия (10-3 М) практически не влиял на активность b-глюкозидазы. При анализе зависимости активности фермента от величины рН среды, V=f(pH) определили значения рК ионогенных групп белка, участвующих в акте катализа. Они соответствуют рК1 4,3 (близко карбоксильной группе) и рК2 6,4 (имидазола гистидина (рК=5,6-7,0). Расчеты величины Н оказались равными 5,6 кДж·моль-1 и 33,9 кДж·моль-1, что соответствовало теплоте ионизации карбоксильной группы и имидазольной группы. Фотоинактивация фермента в присутствии метиленового синего и ДЭПК (10-6М) доказали наличие имидазольной группы гистидина в активном центре фермента.

Полученные результаты по изучению свойств цитоплазматической b глюкозидазы растений гороха показали, что в активном центре b-глюкозидазы гороха присутствуют SH-группы;

в разрыве гликозидной связи субстратов принимают участие карбоксильная группа глутаминовой либо аспарагиновой кислот и имидазольная группа гистидина.

МЕМБРАНОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ 3,3',4',5,7 ПЕНТАГИДРОКСИФЛАВОНА Башилов А.В.

Национальная академия наук Беларуси, Минск (Беларусь).

E-mail: anton.bashilov@gmail.com Цель работы - изучить протекторное действие кверцетина (3,3',4',5,7 пентагидроксифлавон) на перекисное окисление фосфолипидов мембран митохондриальной фракции гепатоцитов крыс in vitro.

Материалы и методы. Определение продуктов перекисного окисления фосфолипидов митохондриальной фракции гепатоцитов крыс проводили путем детектирования содержания тиобарбитуровая кислота-активных продуктов (ТБК активные продукты).

Результаты и их обсуждение. В концентрационном диапазоне 1·10-3-1·10- моль/л накопление ТБК-активных продуктов приближалось к спонтанному уровню пероксидации липидов, что позволило сделать вывод о высокой антиокислительной активности (АОА) флавоноида в данном промежутке разбавления. На фоне снижения концентрации кверцетина до 1·10-7 моль/л происходило уменьшение АОА флавоноида, что, по-видимому, вызвало увеличение концентрации малонового диальдегида in vitrо с 6,36±0,16 до 17,35±0,65 нмоль/мг (в пересчете на ТБК-активные продукты). При дальнейшем снижении содержания кверцетина в модельной системе до 1·10-10 моль/л регистрировали повышение содержания продуктов перекисного окисления митохондриальной фракции до 21,06±0,63 нмоль/мг. По мере достижения данного уровня, АОА кверцетина постепенно снижалась. В точке 1·10-10 моль/л антиокислитель проявлял прооксидантное действие.

Выводы. Изучено протекторное действие 3,3',4',5,7 пентагидроксифлавона на перекисное окисление митохондриальной фракции гепатоцитов крыс. Определен концентрационный оптимум АОА кверцетина в модельной системе, соответствующий 1·10-3-1·10-4 моль/л.

HPLC АНАЛИЗ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ POTENTILLA ALBA L.

Башилов А.В.

Национальная академия наук Беларуси, Минск (Беларусь).

E-mail: anton.bashilov@gmail.com Введение. В зонах с особым социально-экологическим статусом ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ (“чернобыльская” и т.п.) с целью выведения из организма радионуклидов, а также в регионах с йододефицитом особое значение приобретает использование лекарственных средств растительного происхождения для лечения заболеваний щитовидной железы. Клинически установлено, что фенольные соединения полученные из Potentilla alba L. дают хорошие результаты при коррекции гиперфункции щитовидной железы.

Цель работы - изучить компонентный состав фенольных соединений листьев Potentilla alba L. произрастающей в центральной агроклиматической зоне Республики Беларусь.

Материалы и методы. HPLC анализ проводили на хроматографе “Agilent Technologies 1100” (США) с масс-спектрометрическим детектором “LCMS QP8000” (Япония). Идентификация индивидуальных компонентов велась путем сравнивания их времени удерживания и данных UV - спектра со стандартами.

Результаты и их обсуждение. HPLC анализ компонентного состава полифенольного комплекса листьев лапчатки белой показал следующее: из кислот цинамовой природы идентифицированы такие соединения как: п кумаровая кислота, хлорогеновая и неохлорогеновая кислоты. Наибольшее содержание установлено для неохлорогеновой кислоты - 284,95 мг/100 г.

Индивидуально выделены: quercetin-3-Rut, quercetin-3-Glc, quercetin-3-Ara, (-) эпикатехин, а так же процианидины: B1, B2 и C1, наибольшее содержание среди которых установлено для процианидина C1 и составляет 265,45 мг/100 г.

Выводы. Изучен компонентный состав фенольных соединений листьев Potentilla alba L. культивируемой в центральной агроклиматической зоне Республики Беларусь. Идентифицировано 10 индивидуальных компонентов, среди которых максимальное содержание установлено для quercetin-3-Rut.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ УГЛЕВОДНЫХ ФРАГМЕНТОВ ЖГУТИКА И ЛИПОПОЛИСАХАРИДА AZOSPIRILLUM BRASILENSE Беляков А.Е., Бурыгин Г.Л., Селиванов Н.Ю., Матора Л.Ю., Щёголев С.Ю.

Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов (Россия).

E-mail: gena@ibppm.sgu.ru Бактериальный жгутик - ключевой компонент клеточной подвижности прокариот, определяющий возможность многих бактерий к перемещению в пространстве и адаптации к условиям среды, в которой они находятся. Для подвижных патогенных микробов жгутик является фактором патогенности и одним из основных поверхностных антигенов. Для некоторых бактерий было показано, что их флагеллин (основной структурный белок жгутика) содержит углеводные фрагменты, значительно влияющие на антигенные свойства жгутика.

При этом процесс гликозилирования может быть связанным с биосинтезом липополисахаридов (ЛПС).

В данной работе было проведено изучение углеводных фрагментов флагеллина полярного жгутика и ЛПС непатогенных ризобактерий Azospirillum brasilense Sp7.

В ходе работы был выделен электрофоретически и хроматографически чистый препарат флагеллина полярного жгутика A. brasilense Sp7, характеризовавшийся кажущейся молекулярной массой 95±1 кДа, низким содержанием ароматических аминокислот, и имеющий в своем составе углеводные фрагменты. Используя окраску по Бредфорд и фенол сернокислотную реакцию, была оценена массовая доля углеводной части в молекуле флагеллина, которая оказалась равна около 30%, что значительно выше имеющихся данных по флагеллинам других бактерий. Было определено, ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ что углеводная часть флагеллина полярного жгутика A. brasilense Sp7является нейтраленым О-связанным полисахаридом, в составе которого были идентифицированы рамноза, глюкозамин, фукоза, галактоза и ксилоза (3:1:3:2:1).

По составу ЛПС имеются сходные литературные данные. Проведенный Вестерн блот с антителами к ЛПС A. brasilense Sp7 выявил наличие общих антигенных детерминант в составе флагеллина и липополисахарида данного штамма.

Таким образом, впервые показано (i) присутствие во флагеллине бактерий значительной углеводной части ( 30%);

(ii) сходство моносахаридного состава и (iii) антигенных свойств углеводных фрагментов флагеллина и ЛПС бактерий.

ВЛИЯНИЕ ОРИГИНАЛЬНЫХ СТРУКТУРНЫХ АНАЛОГОВ АВП(6-9) НА ДЕПРЕССИВНЫЕ СОСТАВЛЯЮЩИЕ ПОВЕДЕНИЯ БЕЛЫХ КРЫС Белякова А.С., Воскресенская О.Г.

Биологический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова, г. Москва E-male: alixletter@yandex.ru mailto:kamensky@.human.bio.msu.ru Аргинин-вазопрессин (АВП) – гипофизарный нейрогормон (CYFQNCPRG) – играет важную роль в регуляции деятельности ЦНС. Известно, что функционально важным участком для проявления поведенческих эффектов является С-концевая последовательность АВП. По данным, полученным ранее в нашей лаборатории, наибольшим нейротропным эффектом обладает фрагмент АВП(6-9) - Cys6-Pro7-Arg8-Gly9-NH2. На основании конформационного анализа были синтезированы тетрапептиды с заменой Cys6 на L-Met и D-Ser - Ac-L-MPRG и Ac-D-SPRG. Работа проводилась на половозрелых самцах нелинейных белых крыс массой 220-250 г. Препарат вводили интраназально в объеме 1 мкл/10 г массы тела дозах: Ac-L-MPRG – 10,0 мкг/кг за 5 минут до начала тестирования, Ac-D-SPRG 10,0 мкг/кг, 1,0 мкг/кг, 0,1 мкг/кг и 0,01 мкг/кг за 5 и за 30 минут до начала тестирования. Контрольным животным вводили эквивалентный объем растворителя (дистиллированной воды). Влияние препаратов на депрессивные составляющие поведения животных изучали в тесте «принудительное плавание»

на основе классической методики Порсолта.

Аc-L-MPRG обладал выраженным антидепрессантным действием.

Введение Аc-L-MPRG оказало влияние практически на все показатели, исследуемые в данном тесте. Аc-D-SPRG также оказывал существенное антидепрессантное действие. При введении препарата за 5 минут до начала тестирования наблюдалось увеличение суммарного времени активного и пассивного плавания, уменьшение суммарного времени иммобилизации.

Следует отметить, что действие тетрапептида выражено значительно сильнее при использовании дозы 1,0 мкг/кг. Введение препарата за 30 минут до начала тестирования оказало влияние практически на все регистрируемые показатели.

При этом антидепрессантная активность препарата в данном случае возрастала с увеличением дозы. Таким образом, аналоги АВП(6-9) – Ac-L-MPRG и Ac-D SPRG – обладают ярко выраженной антидепрессантной активностью при их интраназальном введении.

АКТИВНОСТЬ ЛИПОКСИГЕНАЗЫ В РАЗЛИЧНЫХ КОМПОНЕНТАХ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК В УСЛОВИЯХ ГИПОКСИИ И СО2 СРЕДЫ Бердникова О.С., Ершова А.Н.

Воронежский государственный педагогический университет, Воронеж (Россия).

E-mail: aershova@vspu.ac.ru При определении активности липоксигеназы (LOX) в тканевых гомогенатах ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ проростков гороха при действии различных газовых сред было показано, что только в первые часы гипоксии активность фермента возрастала. Исследовали активность LOX в различных клеточных компартментах (митохондриях, хлоропластах и цитоплазме) 10-дневных проростков гороха, подвергнутых воздействию кратковременной (1-6 часовой) гипоксии и среды диоксида углерода. Активность LOX определяли спектрофотометрически. Выделение митохондрий и хлоропластов проводили методом дифференциального центрифугирования, контролируя чистоту по маркерным ферментам и хлорофиллу. Показано, что в первый час действия гипоксии и СО2 - среды активность LOX возрастала как в хлоропластах, так и в цитоплазме клеток проростков по сравнению с аэрируемыми растениями. В тоже время в митохондриях активность фермента оставалась близкой к контролю. При двухчасовом действии газовых сред активность фермента в митохондриях возрастала в 2-2,5 раза, а в хлоропластах и цитоплазме она превышала уровень контроля только на 20-70%. Трехчасовое же действие гипоксии приводило к повышению активности фермента в цитоплазме на 30%, а в СО2 среде - почти в 1,5 раза по сравнению с контролем. В хлоропластах и митохондриях в последующие 3-6 час. опыта активность фермента снижалась до уровня аэрируемых растений, падая на 10-20% во всех клеточных фракциях. Впервые исследована активность LOX в различных клеточных компартментах и показано, что основная активность LOX присутствовала в хлоропластах, а в митохондриях и хлоропластах она составляла по 25%. Установлено, что в условиях кратковременной гипоксии повышение активности LOX в первые часы может вносить вкдад в продукцию АФК во всех клеточных компартментах, включая и митохондрии. Отмечено, что высокие концентрации СО2 усиливали эффекты гипоксии на активность LOX во всех клеточных фракциях.

АГЛОМЕРАТЫ ФУЛЕРЕНОВ - РЕАЛЬНАЯ ОПАСНОСТЬ ДЛЯ БИОМОЛЕКУЛ Бордей Н.С., Соболева Е.Н, Чухно А.С., Гришин В.В.

Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: A430@yandex.ru Нанотехнологии все больше входят в нашу жизнь и несут с собой как положительные, так и отрицательные последствия. Немало вопросов, связанных с нанотехнологиями до сих пор остаются невыясненными. Так, например, встречается достаточно много диаметрально противоположной информации, касающейся безопасности различных наночастиц для человека.

Данная работа является продолжением ранее проделанной по влиянию агломератов наночастиц на полимеры РАП, в которой было показано, что два эти вещества вступают в химическое взаимодействие, образуя довольно прочные комплексы. В результате этого уменьшается седиментационная и агрегативная устойчивость системы. Результаты предыдущей работы позволили предположить что, во-первых, молекулы белка, как полимеры, будут вести себя с наночастицами аналогично, а во-вторых, позволили предположить возможность специфической адсорбции наночастиц на полимерах.

В работе использовались фуллерены С60 и белковые молекулы: продукт желатина - желатиноль (М=10000-20000), применяемый для инфузий при кровопотерях, а также бычий и яичный альбумины.

Целью этой работы являлось установление влияния агломератов фуллеренов на свойства белковых молекул, что немаловажно для безопасности современного человека, а также оценка типичности действия агломератов углеродных наночастиц на полимеры.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Был проведен ряд работ, необходимых для достижения поставленных целей и получены следующие результаты: вискозиметрия показала, что даже незначительное добавление фуллеренов к раствору белка ведет к изменению реологических свойств последнего. Причем изменения тем сильнее, чем большее количество фуллеренов добавляется к белку. Это означает, что при попадании в кровь фуллеренов в массе 0,1-0,5 г произойдет резкое увеличение вязкости крови, что может привести к очень печальным последствиям, при попадании меньших количеств изменения будут менее ощутимыми, но опасными, например, повышением риска отрыва тромба и закупорки какого-либо сосуда.

Фотометрически был установлен факт химического взаимодействия Раствора белка и агломератов фуллеренов, причем, как и в случае вискозиметрии, изменения увеличиваются пропорционально увеличению концентрации фуллеренов в растворе. Также было установлено, что добавление фуллеренов сдвигает значение рН, необходимое для создания точки нулевого заряда и изоэлектрической точки белка примерно на единицу. Это еще один способ, которым фуллерены могут навредить организму. Эти факты также указывает на вероятность специфической адсорбции.

Как видно из результатов работы, фуллерены нежелательно применять для введения в организм человека, несмотря на все их уникальные свойства.

Работа в данный момент продолжается, постоянно появляются новые, не менее интересные и полезные данные.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ А1 И А2 С СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ ЧЕЛОВЕКА Бормотова Е.А., Гупалова Т.В.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: tvgupalova@rambler.ru Хорошо известно, что белок G, находящийся на поверхности стрептококков групп C и G, имеет отдельные области связывания, как для иммуноглобулина G, так и для сывороточного альбумина человека (ЧСА).

Некоторые штаммы стрептококков группы G, выделенные из коровьего молока, могут связывать только ЧСА. Ранее нами была проклонирована часть гена G белка из штамма стрептококка человеческого происхождения, кодирующая полипептид, связывающий только альбумин и получен рекомбинантный белок А1.

Недавно нами получен второй рекомбинантный белок из штамма стрептококка, выделенного из коровьего молока, белок А2. Для сравнения связывания адсорбированными на планшет рекомбинантными белками А1 и А2 меченого альбумина был поставлен прямой ИФА. Полученные данные продемонстрировали способность иммобилизованных на твердой фазе белков А1 и А2 связывать ЧСА. Однако, было показано, что количество ЧСА, которое может связать рекомбинантный белок А2 больше, чем белок А1. Эти результаты были подтверждены после постановки непрямого твердофазного ИФА. Для проверки способности связывания меченого альбумина белками А1 и А2, находящимися в растворе, был поставлен ингибиторный ИФА. Рекомбинантные белки А1 и А2, находясь в растворе, существенно препятствовали взаимодействию меченого альбумина с адсорбированными белками (ингибиторный эффект в пределах 70-90%). Таким образом, рекомбинантные молекулы А1 и А2 обладают альбумин-связывающей способностью, как в адсорбированном состоянии, так и в растворе. Это свойство открывает широкие возможности применения обоих белков в качестве иммунохимических реагентов, причем, как в качестве выявляющих молекул (при наличии у рекомбинантных ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ белков А1 и А2 ферментной метки), так и в иммобилизованном состоянии.

ДИНАМИКА ОКИСЛИТЕЛЬНОЙ МОДИФИКАЦИИ БЕЛКОВ В РАЗЛИЧНЫХ ТКАНЯХ КРЫС В ОНТОГЕНЕЗЕ Булгакова А.А, Вечканов Е.М., Дурканаева О.А., Темяков А.В., Сорокина И.А.

Южный федеральный университет, Ростов-на-Дону (Россия).

E-mail: evechka@rambler.ru Старение организма сопровождается повреждающим действием свободных радикалов на основные макромолекулы клетки - ДНК, липиды и белки и накоплением с возрастом высокотоксичных продуктов их окисления на фоне снижения интенсивности функционирования основных систем антиоксидантной защиты.

Разнообразные проявления продуктов свободнорадикального окисления объединяет ограничение общих компенсаторных и адаптивных способностей организма за счет постепенного нарастания дисгармонии и разбалансировки его функций.

Целью настоящей работы явилось исследование интенсивности карбонильной модификации белков и динамики содержания тиоловых групп при окислительной модификации (ОМБ) суммарных белков печени, селезенки, тестикул, сердца и скелетных мышц крыс в ходе их постнатального развития.

В качестве объектов исследования были использованы белые беспородные крысы-самцы в возрасте 2, 4, 16, 18, 24 месяцев.

Установлено наличие сходной возрастной динамики ОМБ в суммарных белках селезенки, сердца, печени и скелетных мышц крыс. В ходе онтогенеза содержание продуктов свободно-радикального окисления белков исследуемых тканей возросло в 2,3;

4,5;

1,5 и 1,1 раза, соответственно. Другая картина возрастных изменений продуктов ОМБ наблюдалась в суммарных белках тестикул крыс. Так, с наступлением половозрелости (16-18 месяцев) степень карбонильной модификации снизилась в 2 раза и в дальнейшем статистически достоверно не изменялась.

Общую динамику адаптивного процесса оценивали по уровню тиоловых групп при ОМБ, служащих важным маркером более позднего истощения резервных возможностей клетки и организма в целом. За исключением белков скелетных мышц замечено возрастное снижение содержания SH-групп в суммарных белках сердца, селезенки, печени и тестикул на 62, 67, 13 и 38%, соответственно.

Таким образом, с увеличением возраста в различных органах и тканях наблюдаются нелинейные разнонаправленные изменения содержания продуктов свободно-радикального окисления белков, обладающие органоспецифическими особенностями, и, в то же время, имеющие общие черты.

МЕТАБОЛИЗМ НЕЙТРАЛЬНЫХ ЛИПИДОВ В ТИМОЦИТАХ ПРИ ИСКУССТВЕННОМ ГИПОБИОЗЕ КРЫС Быкова О.В., Маркевич Л.Н., Игнатьев Д.А., Коломийцева И.К.

Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия).

E-mail: lelechek@list.ru В механизмах адаптации и устойчивости определенная роль отводится липидам, принимающих участие как в структурно-функциональной организации клеточных мембран, так и в индукции метаболического ответа - в качестве мессенджеров трансмембранных сигналов. Целью нашей работы было исследование изменений метаболизма нейтральных липидов в клетках тимуса ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ крыс, находящихся в состоянии искусственного гипобиоза. Искусственная гипотермия у крыс вызывалась понижением температуры тела в условиях гипоксии/гиперкапнии методом закрытого сосуда (tсреды=1-2°С). При снижении температуры тела до 15-17°С животные впадали в состояние холодового наркоза с угнетением подвижности, частоты дыхания, сердцебиения и электрической активности головного мозга. В качестве объекта исследования использовали тимус крыс. Животных декапитировали в состоянии гипотермии (tтела=15-17°С), через 24 часа после окончания воздействия гипоксии/гиперкапнии/гипотермии (tтела=37°С) и в состоянии нормотермии (контроль). Выделяли тимоциты, инкубировали их в растворе Кребс-Рингера (pH=7,4) в присутствии 2-[14C]-ацетата при 37°С в течение 15 и 30 минут. После отмывки от радиоактивной метки определяли динамику ее включения в холестерин, свободные жирные кислоты, моно- и диглицериды, а также количество липидов. Было показано достоверное увеличение количества свободных жирных кислот, снижение количества моно- и диглицеридов у крыс, находящихся в состоянии холодового наркоза. Более того, снижение количества диглицеридов сохранялось у крыс и через 24 часа после выхода из этого состояния. Показано, что в состоянии искусственной гипотермии происходит увеличение скорости синтеза моноглицеридов, а через 24 часа после возвращения животного в состояние нормотермии отмечается увеличение скорости синтеза холестерина по сравнению с контрольными значениями.

Работа поддержана грантом РФФИ № 09-04-00993-а.

ИЗУЧЕНИЕ АДСОРБЦИИ Н+ И ОН- ИОНОВ НА ХЛОРОФИЛЛЕ МЕТОДОМ ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКОГО ТИТРОВАНИЯ В ПРИСУТСТВИИ ВНЕШНЕГО ИОННОГО ФОНА Васильева Д.В., Петрова С.А., Буланенкова В.И., Уварова Ю.М., Чухно А.С.

Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: alex-chuhno@yandex.ru Исследования в области порфиринов и аналогичных молекул за последнее десятилетие развиваются стремительно. Соединения порфиринового типа обнаружены в различных объектах как земного, так и внеземного происхождения: это биосистемы, осадочные геологические образования. Прежде всего, это хлорофилл - зеленый пигмент растений, с помощью которого растения улавливают световую энергию и осуществляют фотосинтез. Порфирины обнаружены в сланцах, в асфальтенах, в глубинных водах, в углистых хондритах (метеоритах), в образцах лунных почв. Если к этому добавить многочисленные ферменты на основе порфиринов железа, то станет вполне очевидным, что порфирины выдвинулись на передний край науки.

Целью данной работы является исследование влияния однозарядных электролитов (КС1, НС1) на адсорбции ионов Н+ и ОН- на хлорофилле в зависимости от их концентрации и рН дисперсной системы.

Адсорбцию Н+ и ОН- ионов на хлорофилле исследовали методом непрерывного потенциометрического титрования. Вначале титровали исследуемый раствор без адсорбента, а затем с сорбентом. Титрование проводили через 30 минут после добавления адсорбента к исследуемому раствору. Титрант добавляли порциями по 0,1 мл с интервалом в 1 мин. Далее строили кривые потенциометрического титрования в координатах рН-V, V- объем титранта (КОН или НСl).

В работе были получены кривые потенциометрического титрования водных дисперсий хлорофилла в присутствии различных концентраций КС1 - 10-3, 10-2, 10-1 моль/л. Найдены значения рН изоэлектрических точек хлорофилла в ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ растворах КС1 различной концентрации. Подтверждено влияние концентрации солевого фона на величину адсорбции Н+ и ОН- ионов на хлорофилле.

Установлено преобладание адсорбции ОН-.

УЧАСТИЕ ГЛЮКОЗОРЕГУЛИРУЕМЫХ БЕЛКОВ В РЕГУЛЯИИ РЕСПИРАТОРНОГО ВЗРЫВА НЕЙТРОФИЛОВ Вильчинская Н.А.1, Авхачева Н.В. Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород (Россия), Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия).

E-mail: vilchinskaya2008@rambler.ru Способность генерировать и высвобождать значительное количество активных форм кислорода (АФК) является уникальной способностью активированных нейтрофилов. Гиперпродукция АФК играет важную роль в прогрессии диабетических осложнений, включая нефропатию. В условиях постоянного изменения уровня глюкозы в крови, происходит усиление или снижение количества глюкозорегулируемого белка с массой 78 кДа (GRP78).

Уровень глюкозы в тканях организма широко варьирует при нормальном физиологическом состоянии организма и при заболеваниях. Зависимость функций нейтрофилов от уровня глюкозы мало изучена. Задачей данной работы было исследование роли глюкозы и GRP78 в поддержании спонтанной и индуцированной продукции АФК нейтрофилами, а также сравнение роли GRP78 в генерации АФК покоящимися и активированными нейтрофилами при варьировании условий по нагрузке клеток глюкозой. Произведено сравнение роли GRP78 в генерации АФК покоящимися и активированными нейтрофилами при варьировании условий по нагрузке клеток глюкозой. Базовый уровень продукции АФК нейтрофилами в инкубационной среде без глюкозы, и в среде с 2-дезокси-D глюкозой (2-ДОГ) был ниже, чем в среде с D-глюкозой. При активации респираторного взрыва ФМЛФ в концентрациях 0,1-50 мкМ наблюдали пониженные ответы нейтрофилов в среде с 2-ДОГ, по сравнению с ответами клеток в других средах. Максимальная амплитуда ответа наблюдалась у клеток в среде без добавления глюкозы. При активации респираторного взрыва ФМЛФ в концентрации 50 мкМ наблюдали усиление экспрессии GRP78 и р38 МАРК (митоген активируемой протеинкиназы). Полученные результаты дают основание предполагать, что глюкоза и GRP78 вовлечены в генерацию АФК нейтрофилами.

НОВЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЭНДОНУКЛЕАЗЫ SERRATIA MARCESCENS Галиева Г.М., Филимонова М.Н.

Казанский государственный университет им. В.И. Ульянова-Ленина, Казань (Россия).

E-mail: Motulek_88@mail.ru Внеклеточная эндонуклеаза Грам отрицательных бактерий Serratia marcescens - одна из наиболее изученных бактериальных нуклеаз. Установлены основные биохимические свойства, структура, каталитически значимые аминокислотные остатки. По ряду данных, нуклеаза бактерии Serratia marcescens обладает противоопухолевым и противовирусным действием, в связи с чем продолжается исследование ее свойств.

Ранее было установлено, что оптимальным является отношение фермента и субстрата 5,5-8,5 пмоль/мг. В дополнение мы показали, что и при соотношении фермент/субстрат 0,25 пмоль/мг эндонуклеаза проявляет такую же ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ активность, как при соотношении 5,5-8,5 пмоль/мг. Однако при дальнейшем уменьшении соотношения, в частности до 0,05 пмоль/мг и ниже, активность эндонуклеазы возрастает в 2,5 раза. Поскольку известно, что эндонуклеаза способна образовывать димеры, мы предположили, что изменение активности могло быть связано с изменением уровня структурной организации молекул.

Гельхроматографией ферментных растворов, различающихся концентрацией эндонуклеазы, мы установили следующее. Раствор, включающий 23 пмоль/мл эндонуклеазы, содержал высокополимерные агрегаты и димеры данного белка. Уменьшение концентрации эндонуклеазы на порядок приводило к появлению мономеров в дополнение к олигомерам. Дальнейшее уменьшение концентрации эндонуклеазы на порядок вызывало рост доли мономеров по сравнению с содержанием олигомеров в исследуемом растворе. Таким образом, нами установлено, что, во-первых, уровень структурной организации эндонуклеазы зависит от ее содержания в растворе. Во-вторых, образование мононуклеотидов приводит к существенному увеличению активности, из чего следует, что эндонуклеаза в мономерном состоянии проявляет более высокую ферментативную активность, чем в виде олигомеров.

ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ РАЗЛИЧНЫХ ТРАНСПОРТНЫХ ФОРМ ИНСУЛИНА Гарипова М.И., Першина А.С., Буторина О.Л., Елисеева О.С.

Башкирский государственный университет, Уфа (Россия).

E-mail: albina81-08@mail.ru Транспорт гормонов в крови человека осуществляется с участием двух механизмов: за счет эритроцитарного транспорта и включения в надмолекулярный комплекс плазмы крови, основу которого формируют транспортные гликопротеиды. Особенность транспорта инсулина заключается в приблизительно равном использовании двух механизмов, в то время как другие белковые гормоны транспортируются в основном за счет эритроцитарного транспорта.

Цель данного исследования - изучить особенности биологического действия инсулина, доставляемого к тканям указанными системами транспорта.

Проведено экспериментальное сравнение действия инсулина в каждой из транспортных форм на уровень гликемии белых лабораторных мышей.

Исследование проводили на трех группах животных, в каждую из которых входило по 50 мышей весом 20-25 г. Определены значения концентрации глюкозы в венозной крови контрольной группы животных, не получавших инъекцию инсулина, и двух опытных групп.

В опытной группе № 1 животным вводили по 1 единице инсулина инсулина (человеческий генно-инженерный инсулин ХУМУЛИН Р производства фирмы Lilly France S.A.), в 0,5 мл 50% взвеси мышиных эритроцитов, в опытной группе № 2 - такую же дозу инсулина в комплексе с белками 0,5 мл гепаринизированной плазмы мышиной крови. Взятие крови и определение глюкозы проводили через 30 минут после инъекции. В контрольной группе мышей среднее значение гликемии составило 6,72±0, ммоль/л. Концентрация глюкозы в крови мышей, получавших инсулин в комплексе с эритроцитами, составила 2,85±0,057 ммоль/л, в группе мышей, получавших инсулин в комплексе с белками мышиной плазмы - 1, 93±0, ммоль/л. Таким образом, уровень гликемии в группе мышей, получавших ту же дозу инсулина в комплексе с эритроцитами, был достоверно выше (р=0,034), чем у мышей, получавших инсулин с белками плазмы мышиной крови. Возможно, это связано с более медленным освобождением инсулина из эритроцитарного депо.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Вероятно, более выраженная гликемия в группе № 2 может объясняться также меньшей емкостью сывороточного депо, приводящей к более высокой концентрации свободного гормона при инъекции.

В эксперименте по иммунизации белых лабораторных мышей дифтерийным анатоксином в присутствии инсулинсвязывающих гликопротеинов сыворотки крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом типа I изучены иммуномодулирующие свойства данных гликопротеинов. Проведена иммунизация трех групп белых лабораторных мышей: двух опытных и контрольной. Мышей всех групп трехкратно иммунизировали дифтерийным анатоксином. В опыте 1 мышей иммунизировали анатоксином с добавлением инсулинсвязывающих гликопротеидов, выделенных из сывороток крови здоровых доноров, в опыте 2 - при добавлении аналогичной фракции из крови больных сахарным диабетом. Полученные антисыворотки к дифтерийному анатоксину оттитрованы в реакции пассивной гемагглютинации с диагностикумом, выявляющим антитела к дифтерийному анатоксину. Установлено, что концентрация антител к дифтерийному токсину при иммунизации с добавлением инсулинсвязывающих гликопротеинов крови здоровых доноров достоверно ниже контрольных значений (среднее значение логарифма (log2) титра в опыте составило 3,76±0,31, в контроле - 6,44±0,39, различие достоверно с p=0,00035, t1=10,55). Достоверного влияния связывающих инсулин белков крови больных сахарным диабетом на концентрацию антител к дифтерийному анатоксину не выявлено. Следовательно, инсулинтранспортирующие белки крови здоровых доноров обладают иммуносупрессивным действием. Вероятно, это объясняется доказанным иммуноферментным методом присутствием в их составе фетопротеина (6,7±0,3 нг/мл) для которого характерны иммуномодулирующие свойства.

ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ АНТИОКСИДАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ КРОВИ ЖИВОТНЫХ ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ ГИПОДИНАМИИ И ПОД ВЛИЯНИЕМ УЛЬТРАФИОЛЕТОВОГО ОБЛУЧЕНИЯ Гераськин А.Е.1, Гераськина М.А.2, Барнашова Г.С. Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева, Саранск (Россия), Мордовский государственный педагогический институт им. М.Е. Евсевьева, Саранск (Россия).

E-mail: gerakl77@bk.ru В опытах на кроликах (порода шиншилла) было показано, что при длительной гиподинамии происходит накопление продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и угнетение антиоксидантной системы (АОС).

По нашим данным АОС на активацию ПОЛ в плазме крови отвечала понижением активности каталазы (КА) на фоне повышения активности глутатионпероксидазы (ГП). В эритроцитах активность супероксиддисмутазы (СОД) и ГП повышается.

В опытах по исследованию крови крупного рогатого скота получали суспензию тромбоцитов, из которых выделяли митохондриальную и микросомальную фракции. Наибольшей активностью Ка отличается микросомальная фракция. При ультрафиолетовом облучении (УФО) активность Ка возрастает в зависимости от времени воздействия. Чуствительной к воздействию УФО оказалась каталаза митохондрий, что проявляется повышением ее активности уже после пятиминутного облучения.

Микросомальная фракция, включающая в себя пероксисомы - депо Ка, еще более чувствительна к УФО. Так активация Ка микросомальной фракции наступает после одноминутного облучения, превышая исходную активность ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ почти вдвое.

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРНОГО СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ И МИТОХОНДРИЙ ТКАНЕЙ КРЫС ПРИ ГБО-ИНДУЦИРОВАННОМ ОКСИДАТИВНО-НИТРОЗИЛЬНОМ СТРЕССЕ Головатенко О.И., Вечканов Е.М., Милютина Н.П.

Южный федеральный университет, Ростов-на-Дону (Россия).

E-mail: evechka@rambler.ru Проблема взаимодействия оксидативно-нитрозильного стресса (ОНС) и апоптоза неразрывно связана с фундаментальными основами жизнедеятельности живых систем и играет ведущую роль в развитии многих патологических состояний. Интенсификация свободнорадикального окисления в биомембранах неизбежно приводит к нарушению их структурной организации и может явиться причиной апоптоза клетки. Исследования кафедры биохимии и микробиологии ЮФУ в области изучения молекулярных механизмов гипероксии и гипербарии послужили обоснованием того, что гипербарооксигенация (ГБО) является адекватной моделью ОНС.

Целью настоящей работы явилось исследование структурного состояния и поверхностного заряда мембран эритроцитов и митохондрий мозга и печени крыс с помощью флуоресцентных зондов пирена и 1-анилинонафталин-8-сульфоната (АНС). Эксперименты проводились на белых крысах массой 180-200 г, подвергнутых ГБО в режиме 0,5 МПа в течение 90 минут.

В результате проведенных исследований показано, что в условиях ГБО индуцированного стресса наблюдается нарушение структурной организации и поверхностного заряда мембран эритроцитов крыс, которое характеризуется:

повышением микровязкости липидного бислоя и уровня структурных перестроек мембранных белков;

увеличением полярности аннулярных липидов;

повышением отрицательного поверхностного заряда мембран эритроцитов. В мембранах митохондрий мозга и печени наблюдается: умеренное увеличение текучести липидного бислоя и зон белок-липидных контактов, повышение гидрофобности внутренних областей мембраны;

повышение уровня структурных перестроек в мембранных белках;

выраженное снижение отрицательного поверхностного заряда мембран митохондрий мозга и умеренные изменения в мембранах митохондрий печени.

ОСОБЕННОСТИ ПРОЦЕССА ОКИСЛЕНИЯ СУКЦИНАТА В ПОЛЕТНЫХ МЫШЦАХ ШМЕЛЕЙ Горбачева Т.М., Сыромятников М.Ю., Попов В.Н., Лопатин А.В.

Воронежский государственный университет, Воронеж (Россия).

E-mail: soki-tanya@yandex.ru Насекомые характеризуются высокой интенсивностью метаболизма.

Уровень потребления кислорода является индикатором окислительных процессов, протекающих в сокращающихся мышцах. В процессе полета скорость дыхания часто увеличивается в 20-100 раз по сравнению с состоянием покоя.

Объектом наших исследований служили самцы Bombus terrestris L. Было обнаружено, что интенсивность дыхания митохондрий шмелей летавших в течение 1 часа в 2,15 раза выше, чем дыхание контрольных шмелей. При измерении дыхания митохондрий летательных мышц шмелей в контроле составило 19,56 нг-Атом О2/мин мг белка, в присутствии 10 мМ сукцината - 316, нг-Атом О2/мин мг белка. К примеру, скорость дыхания митохондрий печени крыс в присутствии сукцината такой же концентрации составляет ~50 нг-Атом О2/мин ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ мг белка. Это говорит о том, что при полете в летательных мышцах Bombus terrestris происходит интенсификация дыхания и одну из ведущих ролей играет фермент сукцинатдегирогеназа.

В ходе проведенных экспериментов был разработан способ очистки СДГ, позволивший получить электрофоретически гомогенный препарат из мышц самцов шмелей Bombus terrestris с удельной активностью 7,14 ед. на 1 мг белка.

Нами было изучено действие различных солей на активность сукцинатдегидрогеназы, что может играть важную роль в регуляции СДГ.

Поскольку мембрана митохондрий имеет большое количество ионных каналов, это позволяет быстро изменять концентрацию отдельных ионов внутри митохондрии. Активаторами работы сукцинатдегидрогеназы являются соли KCI, NaCI - активность возрастает в 2,8 и 2,6 раз соответственно относительно контрольного уровня, NaNO3, KNO3 - в 2,3 и 2 раза, Na2SO4, K2SO4 - в 1,7 и 1,6 раз, Mg(CH3COO)2 - в 1,5 раз, Ca(CH3COO)2 - в 3,3 раза. Na2CO3, К2CO3, NaCH3COO не вызывали значительного изменения в работе СДГ. В случае Zn(CH3COO) наблюдалось снижение активность фермента.

Таким образом, СДГ занимает одно из ключевых мест в энергоснабжении клетки в полетных мышцах шмелей и может быть механизмом регуляции дыхания в митохондриях.

ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМОВ ПАТОГЕННОГО ЭФФЕКТА МУТАЦИИ РОДОПСИНА R135L, АССОЦИИРОВАННОЙ С ПИГМЕНТНЫМ РЕТИНИТОМ Григорьев И.И.1, Ковалева Н.А.1, Сенин И.И.1, Зерний Е.Ю.1, Рамон Е.2, Толедо Д.2, Филиппов П.П.1, Гаррига П. НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, Москва (Россия), Политехнический университет Каталонии, Терраса, Каталония (Испания).

E-mail: grigoriev.ii@gmail.com Пигментный ретинит (ПР) - наследственное заболевание сетчатки глаза, вызывающее прогрессирующую потерю зрения, причиной которого является возникновение точечных мутаций в гене родопсина, зрительного пигмента фоторецепторных клеток. Такие мутации приводят к изменению уровней активации G-белка трансдуцина фотовозбужденным родопсином и (или) фосфорилирования последнего под действием родопсинкиназы, что, в конечном счете, негативно сказывается на функционировании фоторецепторных клеток, приводя к их дегенерации. Одним из ключевых аминокислотных остатков родопсина, замены которого часто встречаются у пациентов с ПР, является R135, который входит в состав “ионного замка” между цитоплазматическими окончаниями 3-ей и 6-ой -спиралей белка, образуя ряд электростатических контактов. С использованием ряда мутантных форм родопсина в настоящей работе показано, что разрушение этих контактов, по-видимому, является главным требованием для перехода рецептора в активную конформацию, поскольку изменяет уровни как активации трансдуцина мутантными формами рецептора, так и их фосфорилирования под действием родопсинкиназы. Исследование Са2+ зависимого ингибирования фосфорилирования мутанта родопсина R135L Са2+ связывающим белком рековерином показало, что для достижения ингибирования на уровне родопсина дикого типа, необходима повышенная концентрация рековерина. Полученные результаты указывают на то, что конститутивная активация трансдуцина мутантным рецептором, а также действие Са2+/рековерина являются составными частями молекулярного механизма патогенного эффекта мутации R135L, приводящей к развитию ПР.


ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ 11-ДЕЗОКСИ-ПРОСТАНОИДЫ ГРУППЫ Е КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЗАЩИТЫ ПЕЧЕНИ ОТ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ХЛОРОФОРМА Гриневич С.В., Губич О.И.

Белорусский государственный университет, Минск (Беларусь).

E-mail: Hubich_Oksana@tut.by Простагландины молекулярные регуляторы различных (ПГ) физиологических функций, реализация которых наблюдается как на уровне цельной печени, так и в условиях повреждения гепатоцитов in vitro, что позволяет рассматривать ПГ в качестве потенциальных хемотерапевтических средств.

Целью данной работы явилось изучение цитопротекторных свойств синтетических аналогов 11-дезокси-ПГЕ1 на клеточной модели повреждения печени 0,14% хлороформом. Исследование выполнено с использованием природного ПГЕ1 и двенадцати 11-дезокси-простаноидов, синтезированных Лабораторией химии простагландинов Института биоорганической химии НАН Беларуси.

Установлено, что действие 0,14% хлороформа на суспензию гепатоцитов вызывает повреждение плазматических мембран, мембран митохондрий и лизосом. Обработка клеток ПГЕ1 и его аналогами вызывает развитие дозозависимого защитного эффекта. Максимально эффективными оказались концентрации, равные 1·10-7-1·10-8 моль/л. По силе протекторного действия исследованные соединения образуют следующий ряд активности:

ТЯ-280 (-96,67% к эффекту хлороформа) ЯК-83 (-93,33%) ТЯ-246 (-87%) ТЯ-227 (-83,33%) ТЯ-287 (-66,67%) = ТЯ-263 (-66,67%) ТЯ-30 (-60,9%) ТЯ 240 (-54,54%) ПГЕ1 (-51,54%) ЯК-109 (-18,7%) ЯК-122 (-12,19%) ТЯ-239 ( 8,7%) ЯК-32 = 0. Максимальный защитный эффект наблюдался в присутствии простаноидов, обладающих С14-циклогександионовым (ТЯ-280) или 13,15 диокси-4-пиридилым (ЯК-83) фрагментом в -цепи.

Все аналоги, кроме ТЯ-263, ТЯ-240, эффективно защищали мембраны митохондрий, снижая утечку глутаматдегидрогеназы на 21-75%. Защитное действие простаноидов на мембраны лизосом выражалось в снижении утечки кислой фосфатазы на 19-99%. Мы предполагаем, что это может быть связано с разным составом и строением мембран внутриклеточных органоидов.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ ПРИ ОКИСЛИТЕЛЬНОМ СТРЕССЕ.

Гуськов Г.Е., Шкурат Т.П., Прокофьев В.Н., Бибов М.Ю.

Южный Федеральный Университет, Ростов-на-Дону, Россия.

gus@rambler.ru Изучение воздействия окислительного стресса на биохимический статус организма млекопитающих является одной из важных задач фундаментальной биомедицины. Особый интерес представляет вопрос о корреляции биохимических изменений, вызванных окислительным стрессом с экспрессией генов. Нами была предпринята попытка провести анализ экспрессии генов на фоне воздействия окислительного стресса с использованием метода биочипов.

Ранее было показано, что предварительное воздействие малых доз может повышать устойчивость организма к более сильным воздействиям в результате предадаптации метаболических систем организма. В то же время, онтогенетический аспект этого явления остается предметом дискуссий.

Презумпивные клетки адаптивнее воспринимают новый режим функционирования, чем клетки взрослого организма. Было показано, что в головном мозге существует сеть нейронов, чувствительных к кислороду.

Селекция нейронов зависит от их индивидуальных свойств, от особенностей их метаболических потребностей. Нами были проведены несколько серий экспериментов. В качестве объекта исследования использованы 3-х дневные самцы белых крыс линии Rattus norvegicus. В каждой серии эксперимента были сформированы контрольные и опытные группы. Подопытные животные в течение часа подвергались терапевтическому воздействию кислорода, давление которого составляло 0,2 МПа. Декапитация проводилась через 2 ч после окончания действия агента. В общей сложности было исследовано 35 генов, результаты многопараметрического анализа экспрессии генов показали, что после действия окислительного стресса на новорожденных крыс три гена превысили уровень экспрессии более чем в 9 раз.

Таким образом, экспрессирующиеся гены можно отнести к группе генов отвечающих в раннем развитии млекопитающих за адаптивные модификации функциональных систем, обеспечивающих устойчивость организма к окислительному стрессу.

ПРО- И АНТИОКСИДАНТНЫЙ СТАТУС КРОВИ ПРИ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА Даниленко А.О., Головатенко О.И., Чернецова С.Ю., Андриенко А.С.

Южный федеральный университет, Ростов-на-Дону (Россия).

E-mail: adan007@inbox.ru Болезнь Паркинсона характеризуется дегенерацией значительной части пула дофаминпродуцирущих нейронов. Считается, что в силу ряда биохимических особенностей ткани мозга одним из ведущих процессов повреждения нейронов при данной патологии является оксидативный стресс.

Целью данной работы стало исследование интенсивности свободнорадикальных процессов в крови пациентов с диагнозом болезнь Паркинсона, поскольку кровь обладает способностью реагировать на изменения, происходящие в различных тканях.

Исследуемая группа больных была сформирована из 23 мужчин и женщин в возрасте от 39 до 72 лет, контрольная - из 20 практически здоровых доноров в возрасте от 35 до 52 лет. Материалом для исследований служила плазма крови и 1% гемолизат.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ В крови больных было обнаружено увеличение содержания диеновых конъюгатов в гемолизате и плазме на 52% и 46%, МДА на 60% и 35%, оснований Шиффа - на 30% и 21%, соответственно. Активность СОД остается на уровне контрольных значений, в то время как активность каталазы снижена на 64%.

Функционирование глутатион-зависимой антиоксидантной системы сопровождается дефицитом GSH эритроцитов (-15%) при пониженной на 15% активности ГПО и повышении конъюгирующей активности ГSТ на 41%. По всей видимости, активация на 59% ГР представляет собой компенсаторную реакцию на потребность в GSH. Выявленные в ходе данного исследования нарушения свободнорадикального гомеостаза плазмы крови и эритроцитов имеют ту же динамику, что и нарушения, отмеченные в ряде работ в substantia nigra мозга пациентов с диагнозом болезнь Паркинсона, что подтверждает концепцию системности патологического процесса и возможность оценки тяжести нарушения свободнорадикального гомеостаза в мозговой таких пациентов путем исследования про- и антиоксидантного статуса крови.

ВЛИЯНИЕ МУЛЬТИПРОБИОТИКА “АПИБАКТ®” НА АКТИВНОСТЬ NO СИНТАЗЫ В ГЕПАТОЦИТАХ ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ ЖЕЛУДОЧНОЙ ГИПОХЛОРГИДРИИ Дворщенко Е.А., Максимович Я.С., Короткий А.Г., Береговая Т.В., Остапченко Л.И.

Киевский национальный университет им. Тараса Шевченко, Киев (Украина).

E-mail: k21@univ.kiev.ua Мультипробиотик благодаря своим высоким “Апибакт®” антибактериальным, иммуномодулирующим и антиоксидантным свойствам зарекомендовал себя как профилактическое и лечебное средство при патологиях желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Длительное использование блокаторов желудочной секреции HCl вызывает развитие дисбиозов и воспалительных процессов в ЖКТ. Гипохлоргидрия приводит к патологическим изменениям в клетках печени, одной из причин которых может быть повышение уровня NO.

Целью нашей работы было определить действие мультипробиотика “Апибакт®” на активность NO-синтазы в гепатоцитах крыс при длительном угнетении желудочной секреции соляной кислоты.

Эксперименты проведены на белых нелинейных половозрелых крысах самцах. Гипоацидное состояние моделировали внутрибрюшинным введением мг/кг “Омеза®” (1 раз в сутки) на протяжении 28 дней. Крысам второй группы одновременно с введением “Омеза®” перорально вводили мультипробиотик “Апибакт®” в дозе 0,14 мл/кг. Через сутки после последнего введения “Омеза®” в гепатоцитах определяли активность NO-синтазы по накоплению продуктов аэробного окисления NO.

Показано, что в печени крыс, подвергшихся длительному действию “Омеза®”, активность NO-синтазы увеличивалась в 1,5 раза относительно контроля. При одновременном введении “Апибакт®” и “Омеза®” наблюдалось снижение активности NO-синтазы в гепатоцитах до уровня контроля.

Повышенное генерирование оксида азота NO-синтазой в гепатоцитах при длительной гипохлоргидрии может быть дополнительным фактором в развитии воспалительного процесса в печени. Мультипробиотик “Апибакт®” нормализовал уровень NO-синтазы в клетках печени.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ РОЛЬ ДИВАЛЕНТНЫХ АНИОНОВ В СТАБИЛИЗАЦИИ ЧЕТВЕРТИЧНОЙ СТРУКТУРЫ БЕЛКОВ К РАЗРУШЕНИЮ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТАМИ Дурденко Е.В., Молочков Н.В., Сабурова Е.А.

Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино (Россия).

E-mail: ekaterina-durdenko@rambler.ru Данные рентгеноструктурного анализа показывают, что большинство ферментов имеют специфические анион-связывающие центры, однако функциональная роль их не всегда ясна. Сродство анионов в этих центрах сравнимо с концентрацией их в клетке и регуляторная роль их может быть значительной, особенно при взаимодействии ферментов с эндогенными полиэлектролитами (ПЭ).

Настоящая работа посвящена изучению влияния ионов фосфата и сульфата на стабильность лактатдегидрогеназы (ЛДГ) к разрушению анионным полиэлектролитом полистиролсульфонатом (ПСС). При низкой ионной силе ПСС полностью ингибирует ЛДГ. В присутствии 50 мМ концентрации ионов сульфата и фосфата ингибирование ЛДГ исчезает, чего не происходит при добавлении ионов NaCl при той же ионной силе.

Изучение динамики изменения флуоресценции белка сразу после добавления ПЭ показало, что тушения флуоресценции ЛДГ ПЭ-ом в отсутствие дивалентных анионов происходит со временем полупревращения 1/2~2,8 мин и значительнее медленнее в присутствии фосфата и сульфата - 1/2~21 час.

Исследование спектров кругового дихроизма ЛДГ в области ближнего и дальнего УФ показало, что ПЭ частично разрушает вторичную структуру белка. Однако при добавлении фосфата или сульфата, ни третичная, ни тем более вторичная структура ЛДГ в комплексе с ПСС не изменяются.

Полученные данные интерпретируются с позиции особой роли анион связывающих центров в межсубъединичных контактах ЛДГ - два на димер, образующих с участием фосфата ионный кластер, стабилизирующий четвертичную структуру белка и соответственно стабилизирующий белок, как к тепловой денатурации, так и к разрушению полиэлектролитом.

ВЛИЯНИЕ ИОНОВ МАГНИЯ НА СЕКРЕЦИЮ БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА HSC70, HSP70 И HSP96 КЛЕТКАМИ ВНК- Евдокимовская Ю.В., Скарга Ю.Ю., Врублевская В.В., Моренков О.С.

Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия).

E-mail: obedyvpoldnik@gmail.com Белки теплового шока (БТШ) в течение многих лет считали исключительно внутриклеточными белками, которые синтезируются и выполняют множество важных функций в клетке. В последнее время показано, что БТШ могут секретироваться многими типами клеток как в условиях стресса, так и в нормальных физиологических условиях. Секретируемые БТШ участвуют в процессах активации врожденного и приобретенного иммунитета, а также повышают резистентность клеток к различным стрессовым воздействиям.

Механизмы секреции БТШ клетками остаются мало изученными.

Ранее мы показали, что выход некоторых БТШ (HSP70, HSC70 и HSP96) из клеток BHK-21 в культуральную среду осуществляется по неклассическому (ЭПР/Гольджи-независимому) механизму с участием специализированных структур клеточной мембраны (липидных рафтов). В настоящей работе изучали влияние ионов магния на секрецию HSP70, HSC70 и HSP96 клетками BHK-21.

Содержание внеклеточных БТШ в образцах оценивали с помощью Вестерн-блот анализа. Показано, что инкубация клеток в течение 30-120 мин в среде ДМЕМ, ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ содержащей 0,8 мМ Mg2+, приводила к активной секреции HSP70, HSC70 и HSP клетками. Добавление 20 мМ MgCl2 в культуральную среду сопровождалось практически полным ингибированием секреции HSP96, в то время, как секреция HSP70 и HSC70 изменялась незначительно. Связывание ионов магния в среде с помощью хелатора (5 мМ ЭДТА) приводило к индукции секреции HSР70 и HSP в 1,5-2 раза;

при этом секреция HSC70 снижалась в 2 раза. Таким образом, впервые обнаружено, что секреция HSP96, в отличие от HSP70 и HSC70, клетками ВНК-21 сильно зависит от содержания ионов магния в культуральной среде. Это свидетельствует о том, что, по-видимому, разные механизмы вовлечены в секрецию БТШ клетками.

ВЛИЯНИЕ ПИЩЕВЫХ ДОБАВОК ИЗ РАПСА НА НЕКОТОРЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРЫС Жихарева А.А., Кушнир А.И., Гайдут В.М., Гозян А.В., Додиченко М.А.

Одесский национальный университет им. И.И. Мечникова, Одесса (Украина).

E-maіl: alya1989@list.ru Загрязнение окружающей среды, ухудшение экологического состояния привели к повышению количества острых и хронических заболеваний печени.

Изучение биохимических механизмов защиты организма от следствий действия токсичных веществ есть актуальной задачей биохимии и медицины. В последнее время осуществляется поиск препаратов естественного происхождения, которые обладают антиокислительными и гепатопротекторными свойствами.

Известно, что рапс является одним из важнейших источников растительного масла в мировом сельском хозяйстве. Главными отходами маслоэкстракционных предприятий рапса являются жмыхи и шроты, которые содержат достаточное количество протеинов, жирных кислот, в том числе и эссенциальных, и антиокислительных соединений. Жмыхи и шроты могут быть использованы в качестве сырья для производства хлебобулочных, кондитерских и других изделий пищевой промышленности. В связи с вышеизложенным целью нашей работы было изучение действия пищевых продуктов переработки семян рапса (масло, жмых, обезжиренный шрот) на некоторые биохимические показатели крыс.

Белых нелинейных крыс-самцов массой 160-200 г. разделили на группы.

Первая группа - крысы, которые содержались на стандартном рационе вивария.

Крысам 2-4 групп в корм прибавляли соответственно рапсовый жмых или рапсовый обезжиренный шрот из расчета 1,6 г. на 100 г. массы крыс, или рапсовое масло из расчета 1 мл на 100 г. массы крыс ежесуточно на протяжении одного месяца. В органах крыс определяли активность аспартат- и аланинаминотрансферазы, содержание пирувата, оксоглутарата, малонового диальдегида, восстановленного глутатиона, аскорбиновой кислоты. Полученные данные свидетельствуют о разнонаправленном действии препаратов из семян рапса, которое может быть объяснено различным содержанием в них эссенциальных жирных кислот, витаминов, антиоксидантов и других соединений.

СИГНАЛЬНЫЕ МОЛЕКУЛЫ В РЕГУЛЯЦИИ АКТИВНОСТИ ЗАЩИТНЫХ БЕЛКОВ ПШЕНИЦЫ ПРИ СЕПТОРИОЗЕ Заикина Е.А., Бурханова Г.Ф., Яруллина Л.Г.

Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН, Уфа, Россия, e-mail:yarullina@bk.ru Процесс распознавания патогенов в растениях осуществляется с ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ помощью сигнальных систем, которые определяют реакцию клеток на различные химические и физические воздействия. Число веществ, выполняющих функции медиаторов сигнальных систем, постоянно возрастает. Такую роль могут выполнять жасмоновая (ЖК) и салициловая (СК) кислоты, окись азота, перекись водорода и некоторые другие соединения. Эффективными элиситорами защитных реакций растений являются многие природные олигосахариды, в первую очередь структурные компоненты клеточных стенок грибов (гликан, хитин, хитозан) и растений (олигогалактоурониды). С использованием ДНК-чипов у Arabidopsis thaliana выявлено до 60 генов, реагирующих на добавление хитоолигосахаридов (ХОС). Среди них быстрой (10-30 мин) и высокой экспрессией характеризовались гены, ответственные за синтез регуляторных белков, участвующих в транскрипции и передаче информации.

В данной работе анализировали воздействие предпосевной обработки семян СК, ЖК и ХОС на продукцию перекиси водорода, активность оксидоредуктаз оксалатоксидазы) и (пероксидазы, формирование устойчивости пшеницы T. aestivum L. к инфицированию возбудителем септориоза S. nodorum. Результаты исследований показали, что предобработка растений пшеницы ХОС, СК и ЖК снижала степень развития S. nodorum в растительных тканях. Сигнальные молекулы на различных этапах инфекционного процесса усиливали продукцию Н2О2, оказывали модулирующее действие на активность пероксидазы и оксалатоксидазы, индуцировали экспрессию гена анионной пероксидазы.

Полученные данные позволяют говорить о том, что в сигнальной регуляции защитного ответа растений пшеницы к S. nodorum задействована про-/антиоксидантная система растения.

Работа выполнена при частичной финансовой поддержке АВЦП «Развитие научного потенциала высшей школы» №2.1.1./5676.

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И РЕГУЛЯТОРНЫЕ СВОЙСТВА АКОНИТАЗЫ В ОРГАНИЗМАХ РАЗНОГО УРОВНЯ ОРГАНИЗАЦИИ Зайчикова М.В., Альнассер А., Стольникова Ю.А., Королькова А.О.

Воронежский государственный университет, Воронеж (Россия).

E-mail: marinazajchikova@yandex.ru В последние годы значительное количество работ посвящено молекулярным аспектам функционирования аконитатгидратазы (КФ 4.2.1.3.). В частности, выявлено наличие двух генов, кодирующих цитоплазматический (aco1) и митохондриальный (aco2) изоферменты.Остаются слабо изученными физико химические характеристики изоферментов аконитазы, особенный интерес вызывает ферментативная регуляция метаболизма трикарбоновых кислот (цитрат, цис-аконитат, изоцитрат) у организмов разного уровня организации.В связи с этим целью нашей работы стало изучение физико-химических и регуляторных характеристик изоформ аконитатгидратазы в организмах разного уровня организации в период трансформации клеточного метаболизма. В качестве объектов исследования использовали щитки кукурузы (Zea mays L.) и гепатоциты крыс (Ratus ratus) с индуцированным аллоксановым диабетом. В данных объектах наблюдали максимальный уровень активности аконитазы в период проведения эксперимента. Применение 4-х стадийной схемы очистки ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ позволило получить две формы аконитатгидратазы в гомогенном состоянии из каждого исследуемого объекта. С помощью электофореза в присутствии Ds-Na было установлено, что изоформы фермента состоят из двух одинаковых субъединиц, т.е. представляют собой изологические димеры. Максимальное сродство к цис-аконитату характерно для всех изоформ. Наибольшее значение константы Михаэлиса было выявлено для лимонной кислоты. Исследование влияния концентрации ионов водорода на активность изоформ аконитазы показало, что цитоплазматическая форма имеет рН оптимум 8,0, сдвинутый в щелочную область по сравнению с митохондриальной.

Т.о., полученные результаты свидетельствуют об отличиях изоформ аконитазы, которые связаны с выполнением различных функций в клетке.

Цитоплазматическая форма, по-видимому, обеспечивает метаболизацию трикарбоновых кислот, а митохондриальная принимает участие в цикле Кребса.

Неясным остается вопрос о генетической детерминации форм аконитазы.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 13 |
 

Похожие работы:





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.