авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |

«ФГАОУ ВПО "Казанский (Приволжский) федеральный университет" Сервис виртуальных конференций Pax Grid Акутальные проблемы биохимии и бионанотехнологии III ...»

-- [ Страница 3 ] --

Литература 1. Шаева, А.Ю. Идентификация нового генотипа ВЛКРС / А.Ю. Шаева, З.Р. Гараева, Р.Р. Вафин, Н.З. Хазипов, А.М. Алимов // Ученые записки КГАВМ. – Казань, 2012. – Т. 211. – С. 192-197.

2. Balic, D. Identification of a new genotype of bovine leukemia virus / D.

Balic, I. Lojkic, M. Periskic, T. Bedekovic, A. Jungic, N. Lemo, B. Roic, Z.

Cac, L. Barbic, J. Madic // Arch. Virol. – 2012 – Apr 10 [Epub ahead of print] Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" МЕХАНИЗМ РЕГУЛЯЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА EZH2 В КЛЕТКАХ РАКА ЯИЧНИКОВ Гарипов А.Р., Ильинская О.Н.

The Wistar Institute, Филадельфия Казанский (Приволжский) федеральный университет garipov.azat@gmail.com Enhancer of zeste homolog 2 (EZH2) является каталитической субъединицей polycomb repressive complex 2 (PRC2). PRC2 играет важную роль в эпигенетическом сайленсинге триметилируя лизиновый остаток 27 гистона H3 (H3K27Me3). EZH2 гиперэкспрессирован во многих типах рака, таких как рак простаты, молочной железы и яичников. В последнее время появляется все больше данных о том, что белок EZH2 обладает онкогенными свойствами, и что его гиперэкспрессия увеличивает пролиферацию и инвазивность, в том числе в клетках эпителиального рака яичников. Тем не менее, механизм регулирующий экспрессию гена EZH2 остается неизвестен.

В ходе работы были проанализированы материалы из базы данных TCGA (the cancer genome atlas http://tcga-data.nci.nih.gov/ ), и выявлено, что амплификация гена EZH2 практически не встречается при эпителиальном раке яичников (~2%). Основываясь на полученных данных, был сделан вывод, что экспрессию гена EZH2 регулируют иные механизмы. Для определения уровня регуляции, была выделена мРНК из трех линий клеток эпителиального рака яичника (SKOV3, PEO1, OVCAR5), и нормальных эпителиальных клеток яичника (HOSE).

Используя количественный ОТ-ПЦР, было обнаружено, что количество мРНК копий гена EZH2 в клетках эпителиального рака в ~30 раз выше в сравнение с нормальными эпителиальными клетками яичника. Так, было предположено, что регуляция гена EZH2 в клетках эпителиального рака яичников происходит на транскрипционном уровне.

Для идентификации транскрипционного активатора гена EZH2 был использован репортерный вектор pGL3 на основе гена люциферазы (Promega) в клеточной линии эпителиального рака яичника SKOV3. С помощью серий делеций промотера гена EZH2 был найден участок критичный для его активности. Этот участок содержал два CCAAT сайта связывания транскрипционного активатора NF-Y. Замена одной пары нуклеотидов в каждом из ССААТ сайтов (изменены на ССААС) приводит Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" к инактивации промотера гена EZH2.




Таким образом, был сделан вывод, что два ССААТ сайта в проксимальной части промотера гена EZH2 являются необходимыми для его активности в клетках рака яичников.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" КАЛЛУСНАЯ КУЛЬТУРА КЛЕТОК SAUSSUREA ORGAADAYI – МОДЕЛЬ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ РЕГУЛЯЦИИ РОСТА И ВТОРИЧНОГО МЕТАБОЛИЗМА 24-ГОМОБРАССИНОЛИДОМ И СЕЛЕНОМ Головацкая И.Ф., Володина Н.А.

Биологический институт Национального исследовательского Томского государственного университета (г. Томск) golovatskaya.irina@mail.ru К уникальным свойствам растений относится способность синтезировать и аккумулировать различные продукты вторичного метаболизма. Продукты специализированного обмена веществ выполняют ряд важных функций, связанных с защитой растений от различных неблагоприятных факторов среды, вовлекаются во взаимоотношения растений между собой и другими организмами, участвуют в размножении растений. Соединения вторичного обмена растений находят широкое применение в фармакологической, пищевой, косметической и сельскохозяйственной промышленности. Для получения соединений вторичного метаболизма используют лекарственные растения. Эндемичность или сокращение естественных популяций последних в связи с ухудшением экологических условий определяет перспективность использования культивируемых клеток растений. Тотипотентность растительных клеток позволяет прогнозировать синтез ими вторичных метаболитов, характерных для интактных растений данного вида. А так как содержание этих веществ увеличивается на более поздних этапах онтогенеза, то вероятно, процессы вторичного метаболизма в растении зависят от интенсивности роста и развития организма.

Известно, что рост и развитие растений находится под контролем эндогенных систем регуляции, среди которых можно выделить гормональную и трофическую системы. Важными компонентами этих систем, участвующих в регуляции роста, служат брассиностероиды и селен [1–3]. Отмечено влияние уровня селена на физиологическую активность этой группы фитогормонов [4]. Селен может регулировать вторичный метаболизм интактных растений [5].

Изучение влияния экзогенных и эндогенных факторов на накопление веществ вторичного обмена остается одной из актуальных проблем физиологии растений. Важность таких исследований обусловлена Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" необходимостью выяснения механизма регуляции специализированных биосинтезов и роль вторичных метаболитов в растении.

Целью данной работы было выявление зависимости содержания сапонинов в каллусной культуре клеток Saussurea orgaadayi от уровня фитогормонов и селена в питательной среде.

Объектом исследования служила клеточная культура редкого лекарственного вида S.orgaadayi (V.Khan. and Krasnob.) (Горькуша оргаадай), полученная из изолированных тканей на среде Мурасиге-Скуга c добавлением гормонов 2,4Д и 6-БАП в условиях in vitro.





В питательную среду (контроль) добавляли 24-гомобрассинолид (24-ГБЛ) и/или селенат натрия («Sigma» США) (опыт). Семена растений любезно предоставила профессор Н.А. Некратова (НИИ ББ ТГУ).

В результате исследований отметили активное накопление сырой и сухой массы культурой клеток в контрольном варианте, которое зависело от времени культивирования. Добавление 24-ГБЛ в питательную среду замедляло рост культуры клеток (рис. 1а). С увеличением уровня 24-ГБЛ увеличивался негативный его эффект на прирост биомассы клеточной культуры. Если при действии 10-15М раствора гормона ингибирование составило 20%, то при действии 10-7М – 33%.

Изучение биохимического состава каллуса S.orgaadayi показало, что на 20-е сутки культивирования в нем накапливаются сапонины, содержание которых составило 0,34% от сухой массы. Добавление экзогенного фитогормона 24-ГБЛ в питательную среду одновременно с торможением роста каллуса увеличивало содержание исследуемой группы веществ относительно контроля (рис. 1б). Повышение уровня сапонинов происходило на 30% и 2-х кратно, соответственно для 10-15 и 10-7М растворов гормона. Эффект селенат-ионов низкой концентрации оказывал негативное действие как на рост, так и на накопление сапонинов. При совместном действии гормона и микроэлемента низкой концентрации снижался ингибирующий эффект 24-ГБЛ на рост с сохранением темпов синтеза сапонинов. Сопоставление ростовых характеристик и биохимических параметров каллусной культуры клеток показало, что более раннее завершение клеточного роста в присутствии 24-ГБЛ приводило к активации вторичного метаболизма.

Таким образом, полученные данные позволяют рекомендовать данный способ выращивания клеточной культуры in vitro для увеличения выхода биологически активных веществ.

Исследование выполнено при поддержке государственного задания ВУЗам на 2012 год (№ 01201256295 от 06.04.2012).

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Рис. 1.Зависимость ростовых процессов и содержания сапонинов в каллусе S.orgaadayi на 20-е сутки культивирования in vitro от уровня 24 ГБЛ (ГБЛ) и селенат-иона (Se) Литература 1. Головацкая И.Ф., Карначук Р.А., Кулагина Ю.М., Павлова Д.Г., Лаптев Н.И. Патент на изобретение №2451442 «Способ обогащения селеном овощей и злаков» Заявка №2010149934 от 07 декабря 2010 г.

2. Карначук Р.А., Головацкая И.Ф., Ефимова М.В., Хрипач В.А. Действие эпибрассинолида на морфогенез и гормональный баланс проростков арабидопсиса на зеленом свету // Физиология растений. 2002. Т. 49. № 4.

С. 591– 3. Головацкая И.Ф., Кулагина Ю.М., Крахалева А.В. Влияние селенита и селената натрия на рост и продуктивность пшеницы сорта Иргины в зависимости от способов обработки // Вестник Томского государственного педагогического университета. 2012. вып. 7(122). С.

111–115.

4. Golovatskaya I.F., Pavlova D.G., Kulagina Ju.M., Karnachuk R.A., Khripach V.A. The physiological action of brassinosteroids depends on concentration of selenium in the medium // 20th International Conference on Plant Growth Substances IPGSA (28 June – 2 July 2010, Tarragona, Spain).

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" PS05-38. P. 88–89.

5. Golovatskaya I.F., Krachaleva A.V. The role of different forms of selenium in regulating morphogenesis and content of biologically active substances of plants Lactuca sativa L. // Vestnik TGPU. 2011, 8(110). P. 85–88.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" РОЛЬ БИОСИНТЕЗА СТЕРОЛОВ В ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК К БЛОКАТОРАМ РЕЦЕПТОРА ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА Горин А.О., Габитова Л.Р., Абрамова З.И.

Казанский (Приволжский) федеральный университет andrey_gorin@bk.ru Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) является одним из ключевых механизмов проведения митогенных сигналов в опухолевых клетках, что сделало данный рецептор широко используемой мишенью для блокады при лечении онкологических заболеваний (1). Однако эффективность такой терапии оказалась намного ниже изначально предполагаемой (2) в следствие первичной или приобретенной резистентности клеток опухоли к блокаде EGFR (3). Таким образом, поиск средств усиления эффективности блокаторов EGFR является очень актуальным и перспективным направлением современной онкологии.

Исследуя взаимосвязь между путем биосинтеза холестерола и сигнальными путями клетки, было обнаружено, что блокада фермента С4-метилоксидазы (SC4MOL) приводит к существенному увеличению чувствительности опухолевых клеток к ингибитору EGFR эрлотинибу.

Фермент SC4MOL вместе с дегидрогеназой NSDHL работают на дистальном участке биосинтеза стеролов, катализируя комплексную реакцию С4-деметилирования предшественника холестерола T-MAS, который накапливается в клетках при блокаде пути на данном этапе.

После блокады SC4MOL или NSDHL при помощи миРНК трансфекции в разных опухолевых линиях наблюдалось значительное увеличение чувствительности к ингибиторам EGFR. При этом сенситизация была строго специфичной как к месту блокады стерольного пути, так и к блокаторам EGFR (эрлотинибу и цетуксимабу), но не к блокаторам других сигнальных путей клетки.

Проведенный биоинформатический анализ взаимодействия генов данных ферментов у дрожей показал тесную связь с генами, связанными с везулярно-транспортным аппаратом клетки. Это позволило предположить вероятный механизм влияния блокады фермента на чувствительность к блокаде EGFR посредством изменения везикулярного транспорта рецептора.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Исследование внутриклеточного движения EGFR показало, что выключение ферментов SC4MOL и NSDHL изменяют движение рецептора, направляя его преимущественно в сторону поздних эндосом и лизосомной деградации, что приводит к ускорению разрушения и истощению активного пула рецептора.

Эксперименты с ксенографтными мышами показали многократное уменьшение размеров опухолей с выключенным SC4MOL по сравнению с обычными опухолями после лечения антителом против EGFR цетуксимабом.

Описанные данные свидетельствуют о том, что блокада стерольного пути на этапе С4-деметилирования ускоряет деградацию EGFR, что приводит к увеличению чувствительности опухолевых клеток к ингибиторам EGFR. Это позволяет рассматривать данные ферменты в качестве мишеней для улучшения эффективности терапии, направленной на блокирование EGFR.

Литература 1. Woodburn JR. The epidermal growth factor receptor and its inhibition in cancer therapy. Pharmacol Ther. 1999 May-Jun;

82(2-3):241-50.

2. Meriggi F, Di Biasi B, Abeni C, Zaniboni A. Anti-EGFR therapy in colorectal cancer: how to choose the right patient. Curr Drug Targets.

2009 Oct;

10(10):1033-40.

3. Hopper-Borge EA, Nasto RE, Ratushny V, Weiner LM, Golemis EA, Astsaturov I. Mechanisms of tumor resistance to EGFR-targeted therapies.

Expert Opin Ther Targets. 2009 Mar;

13(3):339-62.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ БИОМИНЕРАЛИЗАЦИИ МАГНЕТИТА В ПРОКАРИОТАХ И ЭУКАРИОТАХ Горобец С.В., Горобец О.Ю., Чиж Ю.Н., Демьяненко И.В.

Национальный технический университет Украины "КПИ" iryna.demjanenko@gmail.com Изучение биогенного магнетита началось еще с 1975 года, когда его обнаружили начало в прокариотах, а потом и в эукариотах. со временем магнитные наночастички были обнаружены в моллюсках, членистоногих, рыбах, животных, в тканях головного мозга и других органах человека [1,2,3].

В магнитотаксисных бактериях (МТБ) процесс биоминералитзации кристаллов магнетита (Fe 3 O 4 ) или грейгита (Fe 3 S 4 ) происходит в магнитосомной органелле, которая представляет собою липидную везикулу, и локализуется в пристеночной области цитоплазматической мембраны. ряд генов, которые отвечают за регуляцию синтеза магнитосом, были расшифрованы достаточно недавно и объединены в так званый "магнитосомный островок" (МО) [1].

Исследования [4] указывают на возможность существования фундаментального механизма синтеза Fe3O4 для человека и МТБ, но для того, чтобы утверждать, что данный механизм универсальный для всех организмов, необходимо сравнить белки МО МТБ без которых невозможен процесс биоминерализации с белками других организмов.

Например, с белками анаэробов с разным типом дыхания, так как существует гипотеза, что синтез оксида железа напрямую связан с метаболическими путями анаэробного дыхания [5]. поэтому целью этой работы был сравнительный анализ аминокислотных последовательностей белков МО без которых невозможен процесс биоминерализации с белками немагнитотаксисных анаэробов, растений, животных, грибов.

Не давно была обнаружена культура анаэробов Desulfovibrio magneticus [5], которые способны синтезировать магнитные нанокристалы. Но в фенотипическом проявлении биоминерализации магнетита нет четко организованных цепочек, так же как и у человека не регулируется его форма, размер и другие свойства. т.е. магнитные нанокристаллы расположены хаотически в клетке. существуют также Fe(III)-редуцирующие бактерии, которые используют для получения Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" магнетита в следствии катаболизма железа при анаэробном дыхании, такие как: Geobacter metallireducens, Geobacter sulfurreducens, Pelobacter carbinolicus, Desulfuromonas acetoxidans, Desulfuromonas palmitatis и др.

[5].

В работе был проведен сравнительный анализ аминокислотных последовательностей белков МО бактерии M. Gryphiswaldense и анаэробов с разным типом дыхания, методом оценки статистической значимости выравнивания белковых последовательностей, используя программу «BLAST on-line» при стандартных параметрах, которая представлена на официальном сайте ресурса Национального центра Биотехнологической информации National Center for Biotechnology Information.

В результате проведенных исследований оказалось, что в некоторых организмах отсутствует строгая гомология белков MamА та MamN МО МТБ с белками немагнитотаксисных анаэробных микроорганизмов. Так же было установлено. что у Geobacter metallireducens отсутствует MamN, но магнитные кристаллы было обнаружены. что подтверждает гипотизу о возможности процесса биоминерализации при отсутствии данного белка. Степень гомологии между белками указывает на возможность формирования магнитных кристаллов в анаэробных микроорганизмах, что подтверждается значением Е-чисел (меньше 1e-05).

Для подтверждения гомологии между белками MamВ, MamЕ, MamА, MamN, MamО, MamМ с соответствующими белками анаэробов был проведен сравнительный анализ функций соответствующих белков.

Анализ показал, что гомологи белков MamВ, MamЕ, MamА, MamО та MamМ у анаэробов имеют одинаковые функции с соответствующими белкам МО. А белки гомологи MamN относятся к одному суперсемейству, но имеют немного отличимые функции.

Проведённые исследования дают возможность утверждать, что механизм биосинтеза магнитных нанокристалов является фундаментальным для большинства анаэробов. Но в результате эволюции часть из них потеряла часть или полностью механизм их синтеза.

При проведении биоинформационного анализа белков МО без которых невозможна биоминерализация и белков растений, гомологию удалось определить только у модельных организмах Arabidpsis thalina, Zea mays, Physcomitrella patens subsp. Patens, Medicago truncatula, Vitis vinifera.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Литература 1. Schuler D., Baeuerlein E. Iron Transport and Magnetite Crystal Formation of the Magnetic Bacterium Magnetospirillum gryphiswaldense // J. Phys IV.

– 1997. – P. 647–650.

2. Schultheiss-Grassi P.P., Heller F., Dobson J. Analysis of magnetic material in the human heart, spleen and liver. BioMetals, – 1997. –10. – P. 351–355.

3. Nishio H., Takahashi T. Magnetic Characterization of Bacterial Magnetic Particles // Journal de Physique IV. – 1997. – P. 663–666.

4. С.В. Горобець, О.Ю. Горобець, Д.В. Сівенок, Ю.М. Чиж, Генетична регуляція та фенотипів прояв властивостей біогенних магнітних наночастинок у магнітотаксисних бактерій і людини // Наукові вісті НТУУ«КПІ». - 2012/3. – С. 18- Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ИССЛЕДОВАНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА С В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ Гришина О.В.

ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия»

Минздрава России olgrishina@yandex.ru Рациональное питание – важнейшее условие сохранения здоровья, нормального роста и развития организма человека. Полноценность питания определяется не только энергетической ценностью пищи, сбалансированностью по белкам, жирам и углеводам, но и обеспеченностью витаминами, микроэлементами и минералами.

Целью нашей работы явилось изучение количественного содержания витамина С в различных продуктах и выявление возможности обеспечения витамином при современном рационе питания. Задачи исследования: определить содержание аскорбиновой кислоты в твердых продуктах питания, в яблочном и апельсиновом соках различных торговых марок, оценить распределение витамина в овощах и фруктах, определить содержание витамина в картофеле при различных условиях варки, рассчитать количества продуктов, необходимых для удовлетворения суточной потребности в витамине С. Количественное определение аскорбиновой кислоты производилось титрометрическим методом Тильманса. Исследование проводилось в октябре и марте с целью выявления сезонных различий в обеспеченности витамином.

Максимальное содержание витамина С было выявлено в красном и желтом перце (107,8 – 118,8 мг%), а также в листьях свежей капусты и лимонах (52,8 - 60 мг%), минимальное - в яблоках зелёного и жёлтого цвета (2,2 – 6,6 мг%), причём в яблоках витамина больше в поверхностных слоях, а в картофеле - в сердцевине. Варка снижает содержание витамина С в картофеле (в среднем на 25-30 %), причем варка в мундире способствует сохранению витамина в верхних слоях клубня. Содержание витамина С в середине клубня от способа варки не зависело. Квашение капусты приводит к значительному снижению содержания витамина (на 66,2%). Потери же витамина С при хранении свежей капусты в листья весной составили только 33,4% (при этом весной содержание витамина в кочерыжке увеличилось вероятно вследствие его перераспределения). Содержание витамина С в линейке Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" цитрусовых осенью отражается следующей зависимостью: лимоны мандарины (Марокко) апельсины мандарины (Абхазия). В мандаринах (Марокко), приобретённых в торговой сети весной, отмечалось уменьшение содержания аскорбиновой кислоты (с 46,2 до 26,4 мг%), а в апельсинах и лимонах весеннего привоза - увеличение с 39,6 до 52,8 мг% и с 52,8 до 57,2 мг% соответственно. Содержание витамина С в луке напрямую зависит от степени зрелости овоща (до 8,8мг% в зрелом луке). Максимальное содержание витамина С выявлено в апельсиновых соках «Тонус», «Моя семья», «Я» (49,3 мг%, 31,7 мг%, 28,2мг% соответственно), минимальное – «Добрый» и «Фруктовый сад»

(21,1 мг% и 22,9 мг%). Яблочный сок не может являться источником витамина (содержание аскорбиновой кислоты в соках 7 торговых марок составило от 1,76 до 3,52 мг/100 мл сока). Для покрытия суточной потребности в витамине С (50 - 100 мг) наименьшие количества (менее 200 г) требуются перца, свежей капусты, лимонов, мандаринов, апельсинов, наибольшие (более 1 кг) – картофеля и яблок, для соков с максимальным содержанием витамина суточная потребность покрывается приёмом 150-250 мл сока.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ТРИПСИНО- И ЭЛАСТАЗОПОДОБНЫЕ ПРОТЕИНАЗЫ В НАЗАЛЬНОМ СМЫВЕ ЗДОРОВЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ Гулая В.С., Степанова Е.А., Павлов В.С.

Сибирский государственный медицинский университет bella-donn@mail.ru Протеолитические ферменты или протеиназы занимают особое место в жизнедеятельности организма. Они играют важную биологическую роль в организме, регулируя такие процессы как тонус сосудов, свертываемость крови, активность медиаторов и рецепторов и т.д.[1]. В плазме крови широко представлены трипсиноподобные протеиназы:

тромбин, плазмин, калликреин, ренин [2]. К сериновым протеиназам также относится нейтрофильная эластаза, которая концентрируется в азурофильных цитоплазматических гранулах полиморфноядерных лейкоцитов. Она выступает как активный компонент иммунитета, участвуя в расщеплении белковых компонентов бактериальной стенки [3].

В данной работе исследовались трипсино- и эластазоподобные протеиназы с целью изучить их значение при неинвазивной диагностике состояния новорожденных детей. В качестве исходного материала на исследование был взят назальный смыв у 26 новорожденных детей. У детей не выявлено никакой патологии, поэтому условно можно считать их практически здоровыми.

Активность ТрП в назальном смыве новорожденных изменялась в широком диапазоне: от 0 до 327 нмоль БАЭЭ/мин*мл, среднее значение:

67-277 нмольБАЭЭ/мин•мл (71,52-155,58 нмольБАЭЭ/мин на 0,1 мг белка). В пределы средних значений попали 13 результатов. У 6 детей активность ТрП была выше среднего значения по выборке, а у 7 человек, напротив, ниже. При исследовании зависимости активности ТрП от содержания белка в пробе было установлено, что при высоком содержании белка активность ТрП минимальна. В тоже время при одинаковой концентрации белка в пробе активность ТрП может меняться от 0 до 270 нмоль/мин на 0,1 мг белка.

Активность ЭлП, также как активность ТрП, варьировала в широком диапазоне: от 17 до 342 нмольБАНЭ/мин на 0,1 мл белка, среднее занчение: 131,04-191,10 нмоль БАНЭ/мин•мл или 89,95-208, нмоль БАНЭ/мин на 0,1 мг белка. Среди обследованных детей у Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" человек активность ЭлП в назальном смыве находилась в пределах средних, у 9 была ниже, а у 6 – выше средних значений. Была обнаружено, что чем выше содержание белка в пробе, тем ниже активность фермента.

Таким образом, большинство новорожденных детей имели активность протеиназ в пределазх средних значений. Вместе с тем возрастание активности ТрП до 327 нмоль БАЭЭ/мин•мл и ЭлП до нмольБАНЭ/мин•мл не сопровождается клиническими признаками патологии. Также стоит отметить, что только у одного ребенка была выявлена высокая актинвость как ЭлП, так и ТрП в назальном смыве.

Таким образом, определение активности протеиназ в назальном смыве может быть дополнительным критерием оценки состояния новорожденных детей.

Литература 1. Horl, W. H., Heidland, А. A. Proteinases: potential role in health and disease / W. H. Horl, А. A. Heidland. - New York: London Plenum Press., 1988. – 242 p.

2. Nozawa F., Hirota M., Okabe A. et al. Elastase activity enhances the adhesion of neutrophil and cancer cells to vascular endothelial cells // J.

Surg. Res. – 2000. – Vol. 94, № 2. – P. 153–158. Kao R. T., Stem R.

Collagenases in human breast carcinoma cells lines Cancer Res. – 1986. – Vol. 46, № 5. – P. 1355–1364.

3. Аверьянов А.В. Роль нейтрофильной эластазы в патогенезе хронической обструктивной болезни легких//Цитокины и воспаление №4 – 2007.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" НОВЫЙ ПРИБОР ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ КОЛЛОИДНОЙ СТАБИЛЬНОСТИ ПИВА Давыденко С.Г.

ОАО "Пивоваренная компания "Балтика" Davydenko@spb.baltika.ru Основной целью любой пивоваренной компании является увеличение объема продажи продукции. В связи с этим на первый план выступает проблема обеспечения и контроля качества продукции с учетом требований потребителей. Основная цель контроля качества — гарантировать, что продукция соответствует конкретным требованиям потребителя. Стабильность продукции качества – залог долгосрочного успеха любой компании. Качество пива с точки зрения потребителя определяется, прежде всего, его вкусом, ароматом, прозрачностью и т.д.

Применение современных технологий фильтрации позволяет существенно увеличить сроки хранения пива, которые определяются стабильным поддержанием основных потребительских свойств напитка.

В этой связи сохранение высокого качества определяется микробиологической, коллоидной и органолептической стабильностью пива. В связи с этим необходимо предложить объективные методы оценки изменения качества в процессе хранения. Большая часть экстрактивных веществ (белки, полифенолы, декстрины и др.) присутствует в пиве в виде коллоидных растворов. Следовательно, необходимо, чтобы коллоидные системы находились в стабильном состоянии. При длительном хранении пива или его охлаждении до 0° С в нем в результате нарушения физико-химического равновесия коллоидов образуется помутнение. При изменении рН пива коллоидные компоненты адсорбируют вещества с противоположными зарядами.

Таким образом, частицы образуют большие по размеру комплексы, в результате чего возникает видимое помутнение. Пиво сначала опалесцирует, затем в нем появляется помутнение и, наконец, более тяжелые частицы образуют осадок. Повышенная температура хранения способствует процессам окисления и полимеризации в пиве, усиливающим помутнение, и дальнейшее образование нерастворимых высокомолекулярных полифенолов и денатурацию белков. Таким образом, при кипячении сусла происходит коагуляция белков солода с образованием взвешенных коллоидных частиц, в состав которых кроме Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" белков также входят полифенолы и полисахариды. Далее в процессе брожения дрожжи адсорбируют на свою поверхность коллоидные частицы сусла. В конце брожения дрожжевые клетки образуют группы-флоккулы и оседают на дно ферментера, унося на своей поверхности большое количество коллоидных частиц и способствуя осветлению пива. Поэтому повышение эффективности флоккуляции является очень актуальной проблемой для пивоварения. Повышенное содержание взвешенных частиц приводит к увеличению мутности пива.

В процессе старения напитка происходит их агрегация, большие коллоидные комплексы могут образовать осадок [1]. Непосредственное наблюдение за коллоидными частицами возможно с помощью микроскопирования образцов пива или сусла. Использование различных красителей позволяет установить белковую или полисахаридную природу образовавшихся коллоидов. Однако изучение коллоидных частиц с помощью микроскопирования является достаточно сложным и дорогостоящим методом, требующим больших затрат времени и работы высококвалифицированного персонала. Для изучения распределения мелких коллоидных частиц, определяющих возможность помутнения пива, в нашей лаборатории с успехом использовался анализатор частиц Nanotrac. Однако этот прибор не дает информацию о присутствии и количестве более крупных коллоидных комплексов в пиве и в сусле.

Поэтому мы использовали счетчик частиц Cauntess производства фирмы Invitrogen TM. Обработку данных осуществляли с помощью предлагаемого этой фирмой программного обеспечения. Преимуществом использования этого оборудования является возможность получать не только количественные данные, но изображение анализируемых частиц. Эта информация важна для анализа нарушений технологического процесса и формирования прогноза коллоидной стабильности пива. Таким образом, использование этого метода может частично заменить микроскопирование и дает возможность получения количественных характеристик распределения частиц по размерам в большем, чем в случае использования Nanotrac диапазоне. Нами был разработан метод нанесения частиц на слайд, так как в некоторых случаях фирменные камеры для нанесения не давали возможности получения четкого изображения, т.к. основной функцией прибора является подсчет клеток, а не частиц. При использовании анализатора частиц можно получить не только информацию о количестве и распределении более крупных частиц в пиве, но и их изображения, а так же данные о концентрации частиц и их среднем размере и распределении. Анализатор Cauntess прост в эксплуатации и информативен, что позволяет использовать его Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" как новый прибор для изучения коллоидной стабильности пива.

Литература 1. Афонин Д.В., Дедегкаев А.Т., Давыденко С.Г., Меледина Т.В. Влияние процессов, протекающих при сбраживании сусла, на инициальную мутность пива//Пиво и напитки. Т. 1. c. 26-29.- 2012.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" БИОПОДХОДЫ В АРХИТЕКТУРНОМ ФОРМООБРАЗОВАНИИ НА ОСНОВЕ НОВЕЙШИХ НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКИХ РАЗРАБОТОК Денисенко Е.В.

Казанский Государственный Архитектурно-Строительный Университет e.v.denisenko@bk.ru Взаимная адаптация архитектурной и природной сред является естественным процессом. В настоящее время формируется тенденция гармоничного перенесения принципов живой природы в архитектурное формообразование [1].

Биоподход – это внедрение одной, нескольких или совокупности функциональных, эстетических, концептуальных, конструктивных и символических аналогий, характерных особенностей и принципов организации живого мира в архитектуру [1].

На основе анализа проектного материала, представленного в профильной литературе по специальности и Web-сети, составлена авторская классификация биоподходов в архитектурном проектировании.

В нее входят: применение биопозитивных (экологичных, природных) материалов;

прямое копирование форм животного и растительного миров;

метаболистическая архитектура [2];

здания с нулевым энергетическим балансом;

использование автоматизированного управления системами жизнеобеспечения;

использование одного или нескольких принципов бионики;

внедрение новейших технологий;

применение растительного мира в формировании объекта (зеленые (живые) стены, вертикальные сады);

органическая архитектура [2];

заимствование природных форм;

интерпретация форм живой природы;

архитектура, встроенная в ландшафт (дома в скалах, в холмах);

использование природного объекта в качестве архитектурного;

блоб-архитектура (слизистая инопланетная субстанция монстр).

XXI век подводит современную архитектуру к новым горизонтам.

Благодаря современным научно-техническим разработкам возникают совершенно иные художественные и эстетические компоненты биоархитектуры.

Наиболее перспективными на сегодняшний день можно назвать нанотехнологии, биотехнологии, фотонные, информационные и когнитивные технологии, а также конвергенцию вышеперечисленных технологий.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" 1. наномолекулярные технологии: бактерицидные стены, самоочищающиеся покрытия, суперматериал, наномозг, клейтроника [3], [4], [5], [6], [7];

2. биотехнологии: биометрические материалы, искусственная мышечная ткань, искусственная клетка, клетки-биомодули [8], [9], [10], [11];

3. фотонные технологии: солнечные фотоэлектрические установки [12], [13];

4. информационные и когнитивные технологии: мыслеуправление посредством датчиков в мозгу, управление движениями рук [14], [15];

5. NBIC конвергенции (N – нано, B – био, I – инфо, C – когно) – уровни организации материи: от молекулярной природы вещества (нано) до природы жизни (био), природы разума (когно) и процессов информационного обмена (инфо): «кожа» Philips, нано-кожа Nano Vent-Scin [16], [17], [18].

Архитектура, основанная на новейших научно-технических достижениях со свойствами и возможностями живой природы, позволит достигнуть нового уровня развития бионаправления в современной архитектуре.

Литература 1. Лебедев Ю.С. Архитектура и бионика. - М.: Стройиздат, 1990. - 269 с.

2. Орельская О.В. Современная зарубежная архитектура. - М.: Изд-во Академия, 2006. - 274 с.

3. http://www.nanonewsnet.ru/blog/nikst/bakteritsidnye-steny 4. http://kbogdanov5.narod.ru/20.htm 5. http://www.membrana.ru/particle/ 6. http://www.membrana.ru/particle/ 7. http://www.dailytechinfo.org/nanotech/1253-proekt-living-kitchen-fantast icheskaya-kuxnya-v-dome-budushhego.html 8. http://futurin.ru/blog/health/265.html 9. http://www.dailytechinfo.org/medic/2785-muskuly-iz-iskusstvenno-vyrasc hennoy-tkani-obreli-silu-i-plastichnost.html 10. http://www.dailytechinfo.org/medic/359-iskusstvennaya-nervnaya-kletka-i spolzuyushhaya.html 11. http://www.dailytechinfo.org/medic/1327-texnologiya-micromasonry-prev ratit-zhivye-kletki-v-kirpichiki-lego-iz-kotoryx-budut-postroeny-iskusstven nye-organy.html 12. http://facepla.net/index.php/the-news/energy-news-mnu/1087-pv-ski n Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" 13. http://3dnews.ru/news/solnechnie_paneli_s_kpd_80_rabotaushie_da zhe_nochu/ 14. http://www.dailytechinfo.org/news/776-intel-implantirovannye-v-mozg-da tchiki-pozvolyat.html 15. http://designboom.com/technology/gesture-cube/ 16. http://transhumanism-russia.ru/content/view/498/116/ 17. http://www.design.philips.com/philips/sites/philipsdesign/about/design/im agebank/sustainable_habitat.page 18. http://archinews.ru/2011/01/nano-kozha-dlya-zdaniy-nestandartnoe-reshe nie-problem-ekologii/ Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ИННОВАЦИОННЫЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ НА КАФЕДРЕ БИОЛОГИЧЕКОЙ ХИМИИ Долгарева С.А., Хорлякова О.В.

ГБОУ ВПО "Курский государственный медицинский университет" Минздрав России dolgareva-svetlana@rambler.ru Современное качество высшего образования определяется использованием активных методов обучения, которые предполагают обязательную деятельность студентов в направлении получения, обработки и использования приобретаемых знаний. Решение данной проблемы возможно за счет широкого применения новых информационных технологий, которые создают предпосылки для реформирования системы обучения в вузах и которые направлены на оптимизацию методов преподавания, повышения производительности труда преподавателей. В связи с этим на кафедре биологической химии в организацию учебного процесса внедрены следующие современные технологии: обучающие и контролирующие компьютерные программы по всем разделам биологической химии, включая зачетные занятия;

рейтинговая система оценки знаний студентов;

освоение некоторых лабораторных методик на базе кафедры;

УИРС с использованием различных форм и методов обучения;

проведение олимпиады включающим два этапа и обязательным учетом общей успеваемости на протяжении всего учебного года;

курсовые работы;

ежегодно 20 и более студентов проводят под руководством преподавателей достаточно большой объем экспериментальных исследований, работают с научной литературой, последующим обобщением полученных данных, докладом на научной студенческой конференции и защитой курсовой работы в конце учебного года;

разрабатывается электронный учебно-методический комплекс для самостоятельной работы студентов по биологической химии.

Наиболее распространением методом педагогической диагностики на основе информационных технологий является компьютерное тестирование, как один из наиболее эффективных методов оценки знаний студентов. К достоинствам метода относится объективность и быстрота оценки тестирования, простота и доступность.

Использование УМК позволяет на практике повысить качество Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" усвоения учебного материала студентами, обеспечивает всесторонность и объективность контроля их учебной деятельности. При этом методические материалы могут быть использованы преподавательским составом кафедры для дальнейшего совершенствования методического обеспечения процесса обучения, а также студентами для повышения качества самообразования, осуществления самоконтроля и самопроверки знаний, навыков и умений.

На базе нашей кафедры функционируют биохимическая лаборатория, что позволяет студентам уже на этапе младших курсов овладевать навыками практической работы. лабораториях. Студенты, выполняя лабораторные работы, формируют практические навыки путем многократных манипуляций при проведении химических экспериментов под контролем преподавателей.

Самостоятельная деятельность студентов – это основное условие успешной организации учебного процесса, достижение высокого уровня развития студентов, когда они умеют самостоятельно ставить цель деятельности, могут планировать свои действия, корректировать их выполнения.

Таким образом, при изучении курса биологической химии имеет место не только усвоение объема фундаментальных знаний, развитие эрудиции у студентов, но и умение эффективного их использования, что необходимо для формирования практических навыков у студентов второго курса с дальнейшим применением их в профессиональной деятельности.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" БИОТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКЛОНОВ ОЗДОРОВЛЕННОГО КАРТОФЕЛЯ СОРТА КРЕПЫШ НА СВЕТУ РАЗНОГО СПЕКТРАЛЬНОГО СОСТАВА IN VITRO Дорофеев В.Ю.,Головацкая И.Ф.,Медведева Ю.В.,Карначук Р.А.

Биологический институт Национального исследовательского Томского государственного университета (г. Томск) karnach@mail.tsu.ru В настоящее время внутренний рынок производства качественного семенного материала картофеля ненасыщен. На территории Сибири не ведется разработка технологии получения оздоровленного семенного картофеля, что даёт основание предположить о нашем приоритете в данной области на внутреннем рынке.

Под технологией получения оздоровленного семенного материала картофеля подразумеваются мероприятия, обеспечивающие производство миниклубней растений Solanum tuberosum L. гидропонным способом с использованием метода апикальных меристем. Результатом этой технологии являются оздоровленные миниклубни картофеля, которые высаживаются в грунт в течение двух лет. На третий год получают посадочный материал суперэлиту.

Оптимизированное культивирование растений in vitro и на гидропонике обеспечивает значительное увеличение эффективности производства миниклубней, что позволяет получать в требуемом объёме продукцию круглогодично, независимо от сезонных условий [1–3]. Для улучшения продукционного процесса на этапе микроразмножения необходимы фундаментальные исследования по фотоморфогенезу и продуктивности клонированных растений в условиях in vitro. В связи с этим целью наших исследований было изучение влияния света разного спектрального состава на рост и развитие микроклонов Solanum tuberosum L. in vitro.

В нашей работе использовали раннеспелый сорт картофеля Крепыш.

Оздоровленные микроклоны картофеля получали in vitro в возрасте суток в условиях освещения люминесцентными лампами (36 Вт) белого света и при досветке красным и синим светом. Среда для культивирования МС содержала все необходимые макро- и микроэлементы.

Досветку светом разного спектрального состава применяли на Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" начальных этапах роста микроклонов in vitro. Формирование растения in vitro на синем свету происходило более интенсивно по сравнению с контролем и вариантом досветки красным светом. Так, сухая масса микроклонов растений картофеля сорта Крепыш в опытах in vitro, экспонированных в режиме досветки на синем свету, была больше, чем на красном свету (Рисунок 1а).

После микроклонального размножения и культивирования in vitro необходима адаптация растений картофеля в условиях in vivo для дальнейшей пересадки на гидропонную установку. Одним из условий успешной адаптации растений на установке КД-10 является длина побега, используемая для фиксации растений в лотках гидропонной установки и обеспечивающая погружение корневой системы в питательный раствор. Поэтому на заключительном этапе роста растений картофеля in vitro можно рекомендовать досветку красным светом.

Показано, что досветка этим участком спектра ФАР увеличивала длину междоузлий и, как следствие, длину побега растений картофеля сорта Крепыш in vitro, в то время как досветка синим светом достоверно снижала эти показатели (Рисунок 1б).

Для сокращения сроков культивирования растений картофеля нематодоустойчивого районированного для Сибири сорта Крепыш при микроклональном размножении можно рекомендовать выращивание в течение 28 суток в условиях освещения белым светом и при досветке синим и красным светом.

Таким образом, применение технологии культивирования с режимом досветки синим и красным светом дает возможность сократить время культивирования и провести успешную адаптацию растений в условиях in vivo.

Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований на 2012 г.

(№ 11-04-98090-р_сибирь_а) и Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере по программе СТАРТ-10 (№9933р/11524 от 11.01.2012) Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Рис. 1. Ростовые характеристики целого растения (а) и побега (б) картофеля сорта Крепыш в конце субкультивирования (28 сутки) in vitro, выращенного на белом свету (БС) и с досветкой синего (СС) и красного (КС) света Литература 1. Карначук Р.А., Дорофеев В.Ю., Медведева Ю.В. Фоторегуляция роста и продуктивности растений картофеля при размножении in vitro // VII Съезд общества физиологов растений России, Международная конференция «Физиология растений – фундаментальная основа экологии и инновационных биотехнологий» 4–10 июля 2011. – Нижний Новгород, 2011. С. 313–314.

2. Дорофеев В.Ю., Медведева Ю.В., Карначук Р.А. Оптимизация светового режима при культивировании оздоровленных растений картофеля in vitro с целью повышения продукционного процесса // Материалы VI Московского международного конгресса, часть (Москва, 21–25 марта, 2011 г.). – М.: ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2011а, С. 238–239.

3. Дорофеев В.Ю., Гвоздева Е.С., Медведева Ю.В., Карначук Р.А.

Биотехнология получения безвирусного картофеля для семеноводства // Региональная научно-практическая конференция "Образование.

Наука. Инновации" (24 марта 2011 года), Томский сельскохозяйственный техникум. – Томск, 2011б. С. 311.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ВЛИЯНИЕ ИМПУЛЬСНОГО МАГНИТНОГО ПОЛЯ НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ БАЗИДИАЛЬНОГО ГРИБА PLEUROTUS OSTREATUS (JACQ.: FR.) KUMMER Дорошкевич Н.В.1, Шило А.В.2, Дорошкевич А.С.2, Константинова Т.Е.2, Фронтасьева М.В. Донецкий национальный университет Министерства образования и науки, молодежи и спорта Украины Донецкий физико-технический институт им. А. А. Галкина НАН Украины, Объединенный институт ядерных исследований Министерства образования и науки Российской Федерации nelya_dor@mail.ru Одной из основных задач современного грибоводства является повышение урожайности штаммов гриба без использования трансгенных технологий. Поиск и исследование в рамках научного подхода высокотехнологичных бесконтактных способов направленного воздействия на физиологические процессы в живых организмах является актуальной практической задачей не только для грибоводства, но и для сельского хозяйства в целом.

В последние годы с развитием нано- и радиокоммуникационных технологий значительно возрос интерес к исследованиям влияния электромагнитных полей различной природы на биологические объекты разной степени видовой организации, как в рамках экологического аспекта, так и для создания прикладных методик бесконтактного управления их физико-биологическими характеристиками [1, 2, 3].

Анализ литературных данных свидетельствует о существенном влиянии магнитных полей на жизнедеятельность живых организмов и об их индивидуальной чувствительности к данному фактору. Установлено [1, 2, 5], что у некоторых видов актиномицетов, бактерий и микроскопических (мицелиальных) грибов происходит магнитоиндуцированная стимуляция или игибирование той или иной фазы развития. Величина силы влияния магнитных полей зависит от фазы онтогенеза и концентрации углерода в питательной среде [2].

В связи с тем, что базидиальный гриб Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kummer, известный под названием вешенка обыкновенная, обладает комплексом уникальных биологических свойств, а именно: высокой Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" жизнеспособностью, относительно непродолжительным жизненным циклом, хорошей адаптацией к изменяющимся условиям окружающей среды и углеродного субстрата, простой технологией выращивания в искусственных условиях [4], он является удобным модельным объектом для изучения влияния антропогенных факторов электромагнитной природы таких, как импульсные магнитные поля (ИМП) на живые организмы.

Следовательно, вопросы, касающиеся установления влияния ИМП на высшие базидиальные грибы P. ostreatus являются актуальными и представляют интерес не только в плане решения фундаментальных научных задач, касающихся взаимодействия электромагнитных полей с биологическими объектами, но и для разработки новых практических высокотехнологичных методов повышения урожайности съедобных грибов.

Целью данной работы было установление влияния ИМП на физиологическую активность базидиального гриба P. ostreatus с оценкой перспективности применения полученных результатов для повышения продуктивности.

В качестве объекта исследования взяты культуры базидиального гриба P. ostreatus (МА, СА) из коллекции кафедры физиологии растений Донецкого национального университета. Культуры грибов получены из плодовых тел, собранных с древесных субстратов города Донецка, характеристика которых представлена в табл. 1. В качестве контроля использован штамм НК-35, который занесен в Государственный реестр сортов Украины и в последнее время широко используется в промышленном масштабе [6].

Таблица 1. Характеристика чистых культур гриба P. ostreatus Природный субстрат Год Штамм Место сбора (древесина) сбора НК-35 из коллекции контроль – СА г. Донецк орех грецкий Juglans regia L. МА г. Донецк тополь p. Populus L. На первой стадии эксперимента вегетативный мицелий исследуемых культур гриба P. ostreatus предварительно выращивали на стандартной сусло-агаровой среде (4° по Баллингу) в пробирках (20х2 см) в течении суток. Заросшие мицелием гриба пробирки с агаризованной питательной средой экспонировали ИМП по следующей методике. Для экспонирования образцов использовались однополярные экспоненциально нарастающие импульсы слабого (10 4 – 10 5 A/м) Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" магнитного поля с частотой следования 1 Гц при длительности 300 мкс.

Обработка проводилась при температуре 35оС в течении одного часа (опыт). Для сравнения использовались образцы без обработки ИМП (контроль). Время культивирования составляло 30 суток в термостате с температурой 26°С.

Пробирки с мицелием (опыт и контроль) использовали в качестве посадочного материала для дальнейшего культивирования гриба P.

ostreatus на двух стандартных питательных средах: сусловой (4° по Баллингу) обогащенной питательными веществами и Чапека с одним источником углерода – сахарозой (30 г/л). Все эксперименты на жидкой питательной среде проводили в условиях поверхностного культивирования в колбах Эрленмейера объемом 250 мл, в которые наливали по 50 мл среды. Стерилизацию питательных сред проводили в автоклаве с температурой 121°С под давлением 1 атм в течение 45 мин.

По окончании эксперимента определяли влияние ИМП на физиологические показатели гриба (накопление биомассы, способность продуцировать внеклеточные белки, рН среды после культивирования).

Биомассу определяли весовым методом. Для этого мицелий гриба отделяли от культуральной жидкости (КЖ), промывали в проточной воде, помещали в металлические бюксы и высушивали в сушильном шкафу до постоянного веса с температурой 105°С [7]. Общее количество внеклеточных белков измеряли спектрофотометрическим методом по Г.

А. Кочетову [8]. Концентрацию водородных ионов в КЖ по окончании эксперимента определяли потенциометрическим методом.

Эксперименты проводили в трехкратной повторности. Статистическую обработку полученных экспериментальных данных осуществляли с помощью двухфакторного дисперсионного анализа и множественного сравнения средних по Дункану [9].

Результаты исследования показали, что при культивировании исследуемых культур гриба P. ostreatus данного гриба на среде Чапека с сахарозой (30 г/л) в опытных образцах происходило увеличение накопления биомассы в 1,2 – 1,4 раза (7,3 – 10,5 г/л) по сравнению с контрольными (5,7 – 8,8 г/л) (рис. 1).

Установлено, что из всех исследуемых культур контрольный штамм НК-35 обладает наилучшей способностью накапливать биомассу как в условиях ИМП – воздействия, так и без него (контроль). Изоляты МА и СА в сравнении с контролем показали в 1,3 – 1,5 раза меньшее накопление биомассы при этих же условиях культивирования.

Из рис. 1 также следует, что при росте на сусловой среде показатели накопления биомассы грибом P. ostreatus в опыте были несколько ниже Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" контрольных. Для контрольного штамма НК-35 и изолята МА накопление биомассы на сусловой среде грибом P. ostreatus в опыте уменьшалось в 1,1 раза (8,9 – 10,5 г/л) по сравнению с контролем (9,6 – 10,9 г/л). У изолята СА данный показатель практически не изменялся (9,7 г/л).

Согласно рис. 2, концентрация внеклеточных белков в КЖ после культивирования на среде Чапека в опыте снижалась в 1,2 – 1,5 раза (6, – 8,2 мг/мл) по сравнению с контролем (9,6 – 10,8 мг/мл).

Можно предположить, что это связано с индивидуальными особенностями механизма адаптации каждого изученного штамма к питательной среде и воздействию ИМП, которые позволяют грибу продуцировать определенное количество внеклеточных белков для эффективной деструкции углеродного субстрата.

Из рис. 2 видно, что в отличие от среды Чапека концентрация внеклеточных белков в КЖ после культивирования на сусловой среде в опыте увеличивалась в 1,4 – 1,5 раза (3,9 – 4,4 мг/мл) по сравнению с контролем (2,7 – 3,2 мг/мл). Наибольшее (в сравнении с контролем) количество внеклеточных белков после экспонирования ИМП способен продуцировать изолят СА. Вероятно, предварительное ИМП воздействие и последующее культивирование на сусле обусловливает магнитоиндуцированную стимуляцию включения дополнительных механизмов деструкции богатого на питательные вещества углеродного субстрата и позволяет грибу использовать для этого весь разнообразный ферментативный аппарат.

Из рис. 3 видно, что рН среды после культивирования на среде Чапека в опыте снижалась в 1,1 раза по сравнению с контролем, за исключением контрольного штамма НК-35, у которого данный показатель почти не изменялся (5,8 у. е.) (рис. 3).

Из рис. 3 видно, что рН среды после культивирования гриба P. ostreatus на сусловой среде в опытных образцах не изменялась как у штамма НК-35, так и у изолятов МА и СА по сравнению с контролем (3, – 4,1 у.е.).

Заключение. Приведенные результаты исследований подтвердили влияние ИМП на грибной организм. Показано, что величина ИМП эффекта определяется как элементным составом питательной среды, так и индивидуальными физиологическими особенностями штамма.

Установлено влияние предварительного экспонирования ИМП посадочного мицелия на прирост биомассы гриба P. ostreatus на жидкой питательной среде. На среде Чапека ИМП повышало накопление биомассы в 1,2 – 1,4 раза по сравнению с контролем. На сусловой среде Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" предварительное экспонирование ИМП посадочного мицелия способствовало снижению накопления биомассы на 10%. Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности проведения дальнейших исследований с целью оптимизации режимов ИМП воздействия и условий последействия на базидиальные грибы.

Рис. 1. Накопление биомассы штаммами гриба P. ostreatus на жидких средах культивирования, посадочный мицелий которых подвергался (опыт) и не подвергался (контроль) предварительной обработке ИМП.

Рис. 2. Концентрация внеклеточных белков в КЖ, продуцируемых образцами гриба P. ostreatus, посадочный мицелий которых подвергался (опыт) и не подвергался (контроль) предварительной обработке ИМП при культивировании на жидких средах.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Рис. 3. рН среды после культивирования на жидких средах гриба P. ostreatus, посадочный мицелий которого подвергался (опыт) и не подвергался (контроль) предварительной обработке ИМП.

Литература 1. Лихачева А. А. Влияние СВЧ-излучения на физиологические характеристики культур актиномицетов и бактерий / А. А. Лихачева, А.

А. Лукьянов, Г. М. Зенова и др. // Биотехнология. – 2000. – № 5. – С. – 35.

2. Быстрова Е. Ю. Влияние постоянного магнитного и экранированного геомагнитного полей на развитие колоний микромицетов / Е. Ю.

Быстрова, Е. В. Богомолова, Ю. М. Гаврилов и др. // Микол. и фитопатол. – 2009. –Т. 43, вып. 5. – С. 438 – 446.

3. Казаков А. В. О биологической роли электромагнитных излучений оптического и радиочастотного диапазонов / А. В. Казаков, Б. Н.

Орлов, А. В. Чурмасов // Сельскохоз. биол. – 2009. – № 6. – С. 11 – 17.

4. Бисько Н. А. Биология и культивирование грибов рода вешенка / Н. А.

Бисько, И. А. Дудка. – К.: Наукова думка, 1987. – 148 с.

5. Лозова О. Г. Вплив постійного магнітного поля на виживання та фізіологічну активність клітин дріжджів Saccharomyces cerevissiae 1968 / О. Г. Лозова, Т. П. Касаткіна // Молодь і поступ біології: І міжнар. конф. студ та асп., 11 -1 4 квітня, 2005р.: тези доп. – Львів:

СПОЛОМ, 2005. – С. 165.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" 6. Державний реєстр сортів рослин придатних для поширення в Україні:

за станом на 15.04.2009 року. / Мін. агр. політики Укр., Держ. служба з охорони прав на сорти рослин. – Офіц. вид. – К.: ТОВ „Алефа”, 2009. – С. 192 – 193. – (Бібліотека офіційних видань).

7. Методы экспериментальной микологии / [И. А. Дудка, С. П. Вассер, И.

А. Элланская];

под ред. В. И. Билай. – К.: Наукова думка, 1982. – 550 с.

8. Кочетов Г. А. Практическое руководство по энзимологии / Г. А.

Кочетов. – М.: Высшая школа, 1980. – 272 с.

9. Приседський Ю. Г. Статистична обробка результатів біологічних експериментів / Ю. Г. Приседський. – Донецьк: Кассиопея, 1999. – с.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" РАЗРАБОТКА ПРЕПАРАТОВ – БИОПРОТЕКТОРОВ ДЛЯ АКВАРИУМНЫХ РЫБ Егоров М.А., Магзанова Д.К., Батаева Ю.В., Астафьева А.В.

Астраханский государственный университет dmagzanova@mail.ru В аквакультуре все больше внимания уделяется разведению аквариумных рыб.

В настоящее время появляются хозяйства специализирующиеся на селекции и разведении аквариумных видов рыб при больших плотностях посадок. В связи с этим несоблюдения необходимых параметров воды, требуемого режима выращивания приводит к стрессорным нагрузкам у рыб и как следствие к повышенному отходу [3,4]. Согласно литературным данным проведены работы по использованию биологически активных веществ в качестве добавок при разведении рыб для снижения негативного влияния как биологических, так и абиотических факторов при искусственном разведении и повседневном содержании аквариумных рыб [1,2].

Целью данной работы явилось изучение биологической эффективности эпина – экстра на физиолого-биологические показатели некоторых видов аквариумных рыб при действии различных стресс факторов.

В задачи исследований входило:

1. Охарактеризовать поведенческие показатели экспериментальных аквариумных рыб от обработки эпином-экстра.

2. Изучить влияние данного препарата на терморезистентность аквариумных рыб.

3. Определить устойчивость подопытных рыб в условиях снижения содержания кислорода.

Исследования проводили на молоди аквариумных рыб это гуппи семейство Пецилиевые (Poeciliidae) и скалярия обыкновенная Pterophyllum scalare. Рыб содержали в аквариумах в лаборатории биотехнологий Астраханского государственного университета (АГУ) (п.

Начало, Приволжского района, Астраханской области). Уникальный внешний вид, достаточно неприхотливое содержание, сделало этих рыб очень популярными у аквариумистов.

Экспериментальных рыб содержали в аквариумах объемом от Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" литров при средней плотности посадки 1 экз. на 10 л. Температура воды была в пределах 21-24 С, насыщение воды кислородом осуществляли компрессорами. Эксперименты проводили в трех повторностях.

Предварительно в течении пяти дней проводилась обработка с экспозицией два часа опытных партий рыб эпином – экстра 1х 10-7 мг/л.

Анализируя результаты оценки двигательной активности исследуемых рыб после пяти дней обработки эпином – экстра можно отметить, что в целом по ряду поведенческих показателей активность молоди близка к контролю. Для исследования термоустойчивости применялся модельный эксперимент, в котором использовались температуры, превышающие летальные и дающие отход за непродолжительный период времени. По результатам эксперимента на термоустойчивость выживаемость молоди гуппи после обработки препаратом увеличилась при 10С на 12%, а при повышении температуры до 35С на 8%. Показатели терморезистентности молоди скалярии после обработки при понижении температуры в пределах 3-4%, при 35С выживаемость этих рыб на 15 % выше контрольных показателей. Показатели выживаемости подопытных рыб в условиях снижения содержания кислорода в среднем на 5% выше по сравнению с контролем.

Таким образом, в результате проведенных исследований мы отмечаем положительное воздействие по всем параметрам при использовании эпина- экстра на подопытных рыб.

Литература 1. Егоров М.А. Физиологические особенности действия фитогормона эпибрассинолида на организм животных в раннем онтогенезе.

Монография Астрахань, 2002. 269с.

2. Егоров М.А., Витвицкая Л.В. Использование биологически активных веществ в искусственном воспроизводстве осетровых Волго-Каспийского региона. Монография. Астрахань, 2001. 100с.

3. Игнатьева Г.М. Ранний эмбриогенез рыб и амфибий. М., 1979. 205с.

4. Лукьяненко В.И. Общая ихтиопатология. М., 1987.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ОБНАРУЖЕНЫ АБЗИМЫ С ОКИДОРЕДУКТАЗНОЙ АКТИВОСТЬЮ У БОЛЬНЫХ С РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ Ермаков Е.А., Смирнова Л.П., Кротенко Н.М., Алифирова В.М., Иванова С.А.

Сибирский государственный медицинский университет, НИИ психического здоровья СО РАМН evgeny_ermakov@mail.ru В настоящее время известно, что окислительный стресс является одним из патофизиологических факторов развития многих заболеваний, в том числе и рассеянного склероза (РС). РС является хроническим демиелинизирующим заболеванием нервной системы аутоиммунной природы. Пятнадцать лет тому назад была обнаружена способность иммуноглобулинов катализировать большое число различных химических реакций, т.е. выполнять функции ферментов. Такие каталитически активные антитела (АТ) были названы абзимами [1]. При РС выявлена высокая ДНК-азная и протеолитическая активность Ig G [2,3]. Каталитические свойства антител связанные с оксидоредуктазными функциями ранее не изучались в том числе и у больных РС.

Цель работы: изучить оксидоредуктазную активность IgG выделенных из крови больных РС и здоровых лиц. Доказать, что выявленная активность является собственным свойством антител.

Материалы и методы. Обследовано 14 больных с верифицированным диагнозом РС по диагностическим критериям McDonald. IgG выделяли с помощью аффинной хроматографии на колонках ProteinG-Sepharose соглаcно Tijssen P. (1985). Гомогенность препаратов доказывалась с помощью электрофореза по Лемли.

Определение каталазной (КТ), супероксиддисмутазной (СОД), глутатионтрансферазной (ГТ) и глутатионпероксидазной (ГП) активности антител проводили спектрофотометрически на спектрофотометре Specord М 40. Каталазную активность IgG определяли по скорости утилизации перекиси водорода. Определение трансферазной активности IgG осуществляли по образованию хромогенных конъюгатов глутатиона с хлоро-2,4-динитробензолом.

Пероксидазную активность IgG определяли по окислению NADPH в сопряженной глютатионредуктазной реакции восстановления Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" гидропероксида третичного бутила. СОД активность IgG определяли по степени торможения восстановления нитросинего тетразолия в диформазан супероксидными радикалами, генерируемыми системой ферментативного окисления ксантина в мочевую кислоту в присутствии ксантиноксидазы. Статистическую обработку производили в пакете прикладных программ Statistica7.0 с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.

Результаты. Впервые показано, что IgG пациентов с РС обладают КТ, СОД, ГТ и ГП активностью. На основе анализа гомогенности полученных препаратов доказано, что выявленная активность является собственным свойством IgG. КТ активность антител у пациентов с РС в среднем составила 76,6 мM H2O2/мин/мг белка, у здоровых лиц КТ активность не выявлена. СОД активность IgG у больных с РС составила 7,91мкM диформазана/мин/мг белка мг, и не отличалась от таковой в контроле. ГТ активность IgG у пациентов с РС изменялась в пределах 0–1,35мкМ глутатиона/мин/мг белка и была достоверно ниже в 4 раза чем у здоровых лиц. ГП активность IgG была выявлена у здоровых лиц и в среднем составила 16,2 мкМ NADPH/мин/мг белка, у больных РС была в 3 раза ниже - 5,78 мкМ NADPH/мин/мг белка.

Заключение. Обнаружение антител с оксидоредуктазными активностями у больных РС может говорить о появлении соответствующих субстратов в кровотоке. Так же можно предположить, что IgG с оксидоредуктазной активностью могут играть роль в защите организма от окислительного стресса. Но данный вопрос требует дальнейшего изучения.

Литература 1. Невинский Г.А., Канышкова Т.Г., Бунева В.Н. Природные каталитически активные антитела (абзимы) в норме и при патологии.

Биохимия 2000. 65, 1473–1487.

2. Nevinsky G.A., Buneva V.N. Human catalytic RNA- and DNA-hydrolyzing antibodies J Immunol Methods 2002, 269, 235–249.

3. Одинцова Е.С., Харитонова М.А., Барановский А.Г., Сизякина Л.П., Бунева В.Н., Невинский Г.А. Протеолитическая активность IgG антител из крови больных синдромом приобретенного иммунодефицита человека. Биохимия 2006. 71, 320- Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧНОСТИ НАНОЧАСТИЦ НА РАННИХ СТАДИЯХ РАЗВИТИЯ DANIO RERIO Золотарёв К. В., Беляева Н. Ф., Михайлова М. В., Ипатова О. М.

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В. Н.

Ореховича» Российской академии медицинских наук fireaxe@mail.ru В последнее время все большее внимание уделяется исследованию биобезопасности новых наноматериалов и создаваемых на их основе наночастиц (НЧ). Имеющиеся в настоящее время в литературе сведения о токсичности наноматериалов противоречивы, что говорит о необходимости дальнейших исследований с использованием различных экспериментальных моделей.

В настоящей работе на модели зебрафиш (Danio rerio) были испытаны коммерческие образцы НЧ золота (Au), оксида алюминия (Al 2 O 3 ), диоксида титана (TiO 2 ), диоксида кремния (SiО 2 ), кремния (Si), гидроксиапатита (HAр) и наноалмазов (C). Для всех испытываемых типов НЧ (кроме Аu) при инкубации с эмбрионами использовали концентрации от 25 мг/л до 5 г/л (более высокие концентрации НЧ делали невозможной процедуру тестирования). Максимальная концентрация НЧ Au была равна 58 мг/л (т.е. концентрация исходной суспензии коллоидного золота). Показано, что летальное действие на мальки зебрафиш проявили только НЧ С, Si, НАр при выдерживании в течение 7 суток.

Значения LC50 составили 100 мг/л, 200 мг/л, 1 г/л и для НЧ C, Si и НАр, соответственно (рис. 1А). При линеаризации путём логарифмирования значимой части кривых выживаемости (lnX – натуральный логарифм выживаемости), уточнённые значения LC50 составили 163 мг/л, 183 мг/л и 1,54 г/л для НЧ Si, C и НАр, соответственно (рис. 1Б). Таким образом, наибольшей токсичностью (по параметру LC 50 в течение 7 суток) обладали НЧ Si и наноалмазы. Отклонения в развитии Danio rerio проявлялись только при действии НЧ Si, C и HAp. При этом НЧ Si вызывали дефекты развития в меньших концентрациях, чем наноалмазы.

Среди отклонений в развитии наблюдали незаполненность плавательного пузыря и отек перикарда. Из всех испытанных НЧ отек перикарда был отмечен только для НЧ алмаза при концентрациях, превышающих 250 мг/л. Отек перикарда всегда сопровождался Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" незаполненностью плавательного пузыря, возможно потому, что такой малёк из-за своего веса не может всплыть на поверхность для заполнения пузыря воздухом. НЧ SiO 2, TiO 2, Al 2 O 3, Au не проявили токсического действия.

Таким образом, использование модели Danio rerio выявило токсическое действие суспензий наночастиц кремния, наноалмазов и гидроксиапатита на ранних стадиях развития рыбы. Это действие было связано с агрегатным состоянием частиц, структурой и свойствами их поверхности в воде.

Рис. 1. Летальное действие суспензий НЧ на 7-суточные мальки Danio rerio Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ЭМУЛЬСИЙ НА ОСНОВЕ МИКРОКРИСТАЛЛОВ ГАЛОГЕНИДОВ СЕРЕБРА Илаева А. А., Захаров Ю. А.

НОЦ Фармацевтики, КФУ ilaeva.1.alina@gmail.com Профилактика и терапия инфицирования раневых повреждений мягких тканей является актуальной медицинской проблемой [8].

Инфекционные осложнения удлиняют сроки лечения повреждений, часто приводят к многолетней и пожизненной инвалидности и повышают материальные затраты на лечение [9]. Основным подходом в решении этой проблемы является применение перевязочных материалов, содержащих антибактериальный компонент [1, 4, 10]. В качестве активного компонента подобных материалов перспективно использовать соединения серебра [2, 3, 5, 7, 11]. В настоящей работе исследована возможность применения в качестве антибактериального средства микрокристаллов галогенидов серебра – компонентов фоторегистрирующих эмульсий.

Фотоэмульсии получали путем восстановления нитрата серебра с образованием кристаллов галогенидов серебра, имеющих плоскую форму с диаметром 0.1-1 мкм и различным аспектным соотношением.

Стандартные наночастицы металлического серебра получали путем восстановления нитрата серебра цитратом натрия.

Установлено, что микрокристаллы галогенидов серебра проявляют сходную бактериостатическую активность в отношении грамотрицательных (E.coli) и грамположительных (B.subtillis) бактерий, которая не зависела от геометрии кристаллов. Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) эмульсий составила 12,5 мкг/мл по массе серебра. В тех же условиях, МИК наночастиц серебра составила и 25 мкг/мл, соответственно для E.coli и B.subtillis. По данным МТТ-теста показано, что микрокристаллы галогенидов серебра обладают умеренной цитотоксической активностью в отношении фибробластов кожи человека при концентрации 35 мкг/мл. Результаты свидетельствуют о том, что фотоэмульсии на основе кристаллов галогенидов серебра могут быть использованы в качестве антимикробного материала наружного применения.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Литература 1. Salas Campos L, Fernandes Mansilla M, Martinez de la Chica AM.

Topical chemotherapy for the treatment of burns. Rev Enferm 2005;

28(5):67–70.

2. Russell AD, Hugo WB. Antimicrobial activity and action of silver. Prog Med Chem 1994;

31:351–70.

3. Mirsattari SM, Hammond RR, Sharpe MD, Leung F, Young GB.

Myoclonic status epilepticus following repeated oral ingestion of colloidal silver. Neurology 2004;

62(8):1408–10.

4. Hussain SM, Hess KL, Gearhart JM, Geiss KT, Schlager JJ. In vitro toxicity of nanoparticles in BRL 3A rat liver cells. Toxicol In Vitro 2005;

19(7):975–83.

5. Mooney EK. Silver dressings [safety and efficacy reports]. Plast Reconstr Surg 2006;

117(2):666–9.

6. Dunn K, Edwards-Jones V. The role of Acticoat TM with nanocrystalline silver in the management of burns. Burns 2004;

30(Suppl 1):S1–9.

7. Ricketts CR, Lowbury EJ, Lawrence JC, Hall M, Wilkins MD. Mechanism of prophylaxis by silver compounds against infection of burns. BMJ 1970;

1:444–1446.

8. Robson MC. Wound infection. A failure of wound healing caused by an imbalance of bacteria. Surg Clin North Am 1997;

77:637–50.

9. Griffith-Jones A. Methicillin resistant Staphylococcus aureus in wound care. J Wound Care 1995;

4:481–3.

10. Liedberg H, Lundeberg T. Assessment of silver-coated urinary catheter toxicity by cell culture. Urol Res 1989;

17:359–60.

11. Ip M, Lui SL, Poon VK, Lung I, Burd A. Antimicrobial activities of silver dressings: an in vitro comparison. J Med Microbiol 2006;

55(Pt 1):59–63.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТОНКОСЛОЙНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА HELICOBACTER Исаева Г.Ш., Алешкин В.А., Селькова Е.П., Герасимова М.С., Мороз П.И.

ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» МЗ РФ, ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени им.Г.Н.Габричевского» Роспотребнадзора, ГКУЗ «Республиканский клинический онкологический диспансер» МЗ РТ guisaeva@rambler.ru Бактерии Helicobacter pylori, как один из этиологических факторов развития хронических гастритов и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки, относятся к возбудителям одной из самых распространенных инфекций в мире. Этот микроорганизм очень требовательный к условиям культивирования. Трудоемкость и сложность выделения культуры H.pylori ограничивает применение бактериологического метода в практическом здравоохранении, но он остается единственным методом для фенотипического определения чувствительности штаммов к антибактериальным препаратам.

Для культивирования H.pylori предложены различные питательные среды, обязательными компонентами которых являются базовый агар, ростовые добавки, а для селективных - ингибиторы роста сопутствующей микрофлоры. Недостатком способов культивирования на плотных питательных средах является низкая частота высеваемости хеликобактеров при первичной изоляции, при дальнейших пересевах для получения чистых культур штаммы теряются, всхожесть ослабевает и утрачивается, а скудность роста чистых культур приводит к невозможности определения чувствительности выделенного штамма к антибиотикам. Проблему накопления культуры можно решить с помощью использования жидких сред. Сходный с плотными средами состав (основы, ростовые и селективные добавки) используется и в жидких средах, хотя процесс культивирования более трудоемок и в практических лабораториях не нашел широкого применения. При росте на жидких питательных средах бактерии имеют типичную извитую форму, подвижны и биохимически активны, полноценны в антигенном отношении [1]. H.pylori растет в микроаэрофильной атмосфере, Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" состоящей из 5% О2, 5-10% СО2, 85-90% N2. Но при культивировании в жидкой среде сложность может представлять создание и поддержание микроаэрофильных условий. Эта задача может быть решена постоянным контролированием микроаэробной атмосферы в пробирках путем перемешивания на специальных платформах под углом 20 со скоростью вращения 120 оборотов в минуту [3] или культивирования во флаконах с отверстиями для доступа газов, для чего разработаны мини-биореакторы для принудительного введения в атмосферу культивирования углекислого газа через трубки, погруженные во флаконы с жидкой питательной средой [2]. Недостатки методов культивирования на жидких питательных средах: сложность создания и поддержания микроаэрофильных условий в жидких питательных средах и необходимость использования дополнительного оборудования (шейкеров, вращательных платформ, биореакторов и т.д.) для принудительного введения углекислого газа.

Для накопления культуры H.pylori авторами предлагается методика тонкослойного культивирования на двухфазной питательной среде, доступная для бактериологических лабораторий, не оснащённых специальным оборудованием. Этот метод предполагает использование преимущества жидкой фазы по сравнению с твердой фазой для накопления культуры, а ее тонкослойное распределение поддерживает микроаэрофильные условия в толще жидкости.

Нами предложен следующий состав питательной среды, состоящей из двух фаз: твердой и жидкой. Твердая фаза представляет собой шоколадный агар, приготовленный на основе Колумбия агара с 5% крови барана. Методика тонкослойного культивирования на двухфазной питательной среде включает рассеивание петлей по поверхности плотной среды материала (или колоний) и заливку жидкой питательной средой, приготовленной на основе бульона Шедлера, обогащенным 10% сывороткой крупного рогатого скота. Экспериментальным путем было установлено оптимальное количество жидкой среды, наливаемой в чашку, и соотношение плотной и жидкой фаз. Засеянные чашки Петри на двухфазной среде помещают в CО2 – инкубатор и инкубируют при 37° С в течение 3 - 7 дней. После инкубирования из культуральной жидкости готовят мазки и окрашивают по Граму, а также готовят препараты «раздавленная» капля для изучения подвижности. При наличии типичных изогнутых в виде «рогов вола» палочек, совершающих стремительные движения, культуральную жидкость используют для биохимической идентификации (тесты на каталазу, оксидазу, уреазу) и определения антибиотикограммы.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Не нужно забывать, что другие виды хеликобактеров отличаются от H.pylori более медленным ростом, большинство из них относится к труднокультивируемым и долгорастущим (время появления видимого роста варьирует от одной до двух недель). В связи с этим, методика тонкослойного культивирования на чашках Петри может использоваться и для выращивания других бактерий рода Helicobacter, т.к.

использование жидкой фазы предотвращает посевы от высыхания при длительном инкубировании.

Таким образом, предложенный способ тонкослойного культивирования H.pylori имеет ряд преимуществ: отсутствие необходимости использования дополнительного оборудования для поддержания микроаэрофильных условий в жидкой фазе среды, использование стандартных питательных сред. В результате достигается основной биотехнологический эффект: накопление биомассы микроорганизмов в количестве, достаточном для идентификации, проведения дополнительных исследований (постановки антибиотикограмм, молекулярно-генетических исследований) и сохранения культуры.

Литература 1. Lin Y.L., Lee N., Chan E.C. Determination of optimal liquid medium for enzyme expression by Helicobacter pylori. // J. Clin. Pathol. – 1996. – Vol.49. – P.818-820.

2. Secker D.A., Tompkins D.S., Alderson G. Gas-permeable life cell tissue culture flasks give improved growth of Helicobacter pylori in a liquid medium. // J. Clin. Microbiol. – 1991. – Vol.29. – P.1060-1061.

3. Xia H.X, English L., Keane C.T. et al. Enhanced cultivation of Helicobacter pylori in liquid media. // J. Clin. Pathol. –1993. – Vol.46(8). – P.750– Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ВЛИЯНИЕ АРТЕМИЗИНИНА НА ДИНАМИКУ ФОСФОЛИПИДОВ ОРГАНОВ КРЫС ПРИ CCL4-ИНДУЦИРУЕМОМ СТРЕССЕ Казбекова А.Т.,Юшина Л.В.,Ниязова Р.Е.,Оразай П.,Адекенов С.М.,Сейтембетов Т.С.

АО «Медицинский университет «Астана», Астана, АО «МНПХ «Фитохимия», Караганда raiguln@mail.ru Фосфолипиды (ФЛ) рассматриваются как динамические компоненты мембран, поддерживающие постоянство и стабильность мембранной организации путем сбалансированных реакций распада и ресинтеза.

Известно, что при многих заболеваниях повреждаются мембранные структуры, поэтому обоснованным является поиск средств, оказывающих восстанавливающее и регенерирующее действие на структуру и функции клеточных мембран /1,2/.

В данной работе исследовалось влияние соединения артемизинин, выделенного из растительного сырья Казахстана в МНПХ «Фитохимия»

(г.Караганда). Имеются многочисленные исследования по выявлению и изучению особенностей физико-химических свойств препарата артемизинин и его производного артесуната. Артесунат применяется для лечения малярии, также в онкологической практике для лечения рака молочной железы, легкого, лейкемии. Описаны противовирусные свойства этого препарата в отношении цитомегаловирусов /3/. Механизм действия артемизинина во многом не ясен и в течение последних 15 лет является предметом интенсивного исследования и обсуждения.

Целью данной работы явилось изучение особенностей воздействия природного вещества артемизинин в сравнении с карсилом на изменения фосфолипидного состава в мозге и печени белых крыс при токсическом повреждении печени CCl4 в опытах in vivo.

Материалы и методы исследования Исследования проводились на беспородных белых крысах-самцах массой 130-180 г, которых содержали в условиях вивария, разделенных на 4 группы: I) интактная группа;

II) контрольная группа с CCl -воздействием;

III) опытная группа с CCl4-воздействием, получавшие артемизинин в концентрации 100 мг/кг в течение 7 дней;

IV) опытная группа с CCl4-воздействием, получившие карсил в концентрации 2, мг/кг в течение 7 дней. Гепатотропное действие препаратов оценивали Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" на модели острого токсического поражения печени, вызванного подкожным введением 50% раствора тетрахлорметана. CCl4 вводили внутрибрюшинно один раз за 24 часа до декапитации животных.

Определение ФЛ проводилось после их выделения в гомогенатах по Фолчу и последующем фракционированием силикагелем на микропластинах. Фракции ФЛ, проявленные йодом, количественно переносили в пробирки с последующей минерализацией. Фосфор определяли малахитовым зеленым. Экспериментальные данные обрабатывали с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение Анализ полученных результатов свидетельствует о качественных и количественных изменениях в фосфолипидном составе изученных образцов.

Установлено, что CCl4-индуцируемое острая интоксикация печени сопровождается увеличением содержания глицерофосфатов (-ГФ), лизофосфатидилхолинов (ЛФХ), фосфатидилсеринов (ФС), полиглицерофосфатидов (ПГФ), фосфатидных кислот (ФК) на фоне уменьшения содержания сфингомиелинов (СФМ), фосфатидилхолинов (ФХ), фосфатидилэтаноламинов (ФЭ).

При воздействии ССl4 на мембраны мозга КНФЛ/КФЛ уменьшается в 5, раза и мембраны печени в 1,8 раза. Превентивное введение артемизинина растительного происхождения, разработанного на АО «МНПХ «Фитохимия», препятствует значительному понижению КНФЛ/КФЛ.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |
 





<

 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.