авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 9 |

«ФГАОУ ВПО "Казанский (Приволжский) федеральный университет" Сервис виртуальных конференций Pax Grid Акутальные проблемы биохимии и бионанотехнологии III ...»

-- [ Страница 4 ] --

Для ФЛ исследованных органов впервые были рассчитаны показатели энтропии и избыточности. Определение энтропии и избыточности системы и анализ их изменения в динамике позволяют выяснить упорядоченность и направленность этих процессов. Выявлено, что при воздействии CCl 4 энтропия повышается, а избыточность понижается.

Установлено, что обладающий антиоксидантным и гепатопротекторным действием препарат карсил, взятый в качестве сравнения, а также исследуемый препарат артемизинин способствовали нормализации фосфолипидного обмена. Таким образом, превентивное введение артемизинина препятствует резкому повышению энтропии и понижению избыточности, что позволяет рассматривать данное соединение в качестве потенциального гепатопротектора.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Диаграмма 1. Изменение фосфолипидного состава (в %) в мозговой ткани белых крыс при действии препаратов карсил и артемизинин и интоксикации ССl4 на этом фоне. (1--ГФ, 2-ЛФХ, 3-ФС, 4-СФМ, 5-ФХ, 6-ФЭА, 7-ПГФ, 8-ФК) Диаграмма 2. Изменение фосфолипидного состава (в %) в печени белых крыс при действии препаратов карсил и артемизинин и интоксикации ССl4 на этом фоне.

Литература 1. M.N.Qureshi et all. In-vitro antioxidant and in-vivo hepatoprotective activity of Leucas ciliate leaves// Rec.Nat.Prod., 2010, 4(2), p. 124- 2. P.V.Habbu et all. Hepatoprotective and antioxidant effects of Argyreia speciosa in rats// African J.of traditional, complementary and alternative medicines, 2008, V.5, N.2, p. 158- 3. Abdin M.Z., Israr M., Rehman R.U., Jaim S.K. Artemisinin, a novel antimalarial drug: biochemical and molecular approaches for enhanced production// Planta Med, 2003, 69, p. 289- 4. Оковитый С.В., Смирнов А.В. Антигипоксанты// Экспериментальная и Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" клиническая фармакология. - 2001;

64(3), С. 76—80.

5. Туманова С.Ю. Липиды центральной нервной системы и структура клеточных мембран. В кн.: Нейрохимия. Под ред. И. П. Ашмарина, П.

В. Стукалова. М: Изд-во Ин-та биомедицинской химии РАМН;

1996;

с.

96—144.

6. Vance D.E. Glycerolipids biosynthesis in eukaryotes. In: Biochemistry of Lipids, Lipoprotein and Membra¬nes. Amsterdam;

1996;

р. 153—180.

7. А. С. Маргарян, К. Г. Карагезян, Л. М. Овсепян, А. А. Симонян// Специфические нарушения метаболизма фосфолипидов в тканях белых крыс при циррозе печени. – Биохимия. 2006.




Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ПЕЧАТНЫЕ ЭЛЕКТРОДЫ НА ОСНОВЕ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ ГЛЮКОЗОКСИДАЗЫ ДЛЯ АНАЛИЗА ГЛЮКОЗЫ Каманин С. С., Балахонова А. И., Арляпов В. А.

ФГБОУ ВПО Тульский государственный университет s.s.kamanin@gmail.com В последние годы все более пристальное внимание уделяется разработке экспрессных методов анализа, характеризующихся высокой доступностью, и вместе с тем обладающих достаточными уровнями чувствительности и избирательности. Особый интерес вызывает возможность миниатюризации подобных аналитических устройств.

Наиболее яркими представителями аналитических систем, сочетающих в себе перечисленные качества, являются биосенсоры.

Одним из перспективных направлений развития биосенсорных технологий является использование электродов, полученных методом трафаретной печати (screen-printed electrodes, печатные электроды).

Такие электроды миниатюрны, многофункциональны, выпускаются высоким тиражом, что позволяет создавать электроды с низкой себестоимостью. На их основе формируют биосенсоры, которые можно использовать в пищевой промышленности (в том числе и в спиртовом производстве для мониторинга ферментативных процессов), при выполнении клинических анализов, для решения задач судебно-медицинской экспертизы, служб обеспечения безопасности движения [1]. Преимущества этой технологии позволили печатным электродам занять достойное место на рынке. Печатные электроды уже используются в коммерческих глюкометрах – биосенсорах для определения содержания глюкозы в крови [2], которые в настоящее время являются приборами индивидуального пользования и доминируют на рынке биосенсоров.

Целью данной работы была разработка печатных электродов, модифицированных берлинской лазурью, с иммобилизованным ферментом глюкозооксидазой (ГО) для определения глюкозы.

В работе использовали графитовые печатные электроды, модифицированные берлинской лазурью, на поверхности которых закрепляли биологический материал. В качестве регистратора использовали гальваностат-потенциостат IPC2000 (ООО НТФ «Вольта», Россия). Применяемая аппаратура позволяет производить Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" высокоточные измерения в наноамперном диапазоне токов и использовать малые количества биоматериала. Обработка сигнала производилась с помощью специализированного программного обеспечения.

При выполнении работы были разработаны модифицированные печатные электроды для анализа низких содержаний глюкозы в пробах.

Стабильные биорецепторные элементы получены при иммобилизации фермента в гель поперечно-сшитого бычьего сывороточного альбумина.

Определены основные аналитические и метрологические характеристики данного типа модифицированных печатных электродов.

Диапазон определяемых концентраций составил от 0,03 мМ до 1,0 мМ.

Долговременная стабильность сенсора на основе ГО, иммобилизованной в гель БСА, составила 3 суток, при этом сигнал сохранялся практически на одном уровне;

Проведен анализ реальных образцов с использованием разработанных электродов. Полученные значения совпадают со значениями, полученными референтным методом анализа (высокоэффективная жидкостная хроматография) с учетом доверительных интервалов.





Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы, госконтракт № 14.В37.21. Литература 1. Newman J., Setford S. Enzymatic biosensors // Molecular Biotechnology. – 2006 –V. 32 – P. 249-268.

2. Newman J. D., Turner A. P. F. Home blood glucose biosensors: a commercial perspective // Biosensors and Bioelectronics. – 2005 – V. 20 – p. 2435-2453.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ИММОБИЛИЗАЦИЯ БИОМАТЕРИАЛА В БИМОДАЛЬНЫЕ КРЕМНИЙОРГАНИЧЕСКИЕ ЗОЛЬ-ГЕЛЬ МАТРИЦЫ ДЛЯ СОЗДАНИЯ РЕЦЕПТОРНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ БИОСЕНСОРОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭТАНОЛА Каманина О.А., Соколова О.А., Федосеева Д.Г., Рогова Т.В.

ФГБОУ ВПО Тульский государственный университет o.a.kamanina@gmail.com Иммобилизованные ферменты и клетки находят широкое применение в биотехнологических процессах, в качестве стационарной фазы в жидкостной хроматографии, при формировании рецепторных элементов в биосенсорах, для экологического контроля. При разработке этих систем иммобилизация биомолекул является важным этапом исследований, поскольку определяет область применения жидкостной хроматографии, возможность использования той или иной системы в контроле качества биотехнологических процессов, аналитические и метрологические характеристики биосенсоров. Среди различных методов иммобилизации биоматериала в последние десятилетия включение в бимодальные кремнийорганические золь-гель матрицы привлекает особый интерес в связи с простотой исполнения, экспрессностью, нетоксичностью, постоянством занимаемого носителем объема вне зависимости от состава среды, сохранением биологической активности ферментов или клеток, низкой стоимостью и доступность прекурсоров. Благодаря своим свойствам эти гибридные органо-неорганические матрицы являются перспективными для иммобилизации целых клеток микроорганизмов для создания биосенсоров.

В настоящей работе проведена иммобилизация метилотрофных дрожжей Pichia angusta и уксуснокислых бактерий Gluconobacter oxydans в бимодальные кремнийорганические золь-гель матрицы с целью получения стабильных биораспознающих рецепторных элементов для амперометрических биосенсоров. В качестве прекурсоров при формировании матриц использовали тетраалкоксисилан, полиэтиленгликоль (молярная масса 3000-6000) и расчетное количество гидрофобной добавки алкилтриалкоксисилан, субстратом являлся этанол.

Более высокой чувствительностью характеризовался биорецепторный элемент на основе дрожжей Pichia angusta (коэффициент Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" чувствительности составил 187±9 нА·дм 3 /мин·ммоль, предел обнаружения 5 мкмоль/дм 3 ) по сравнению с чувствительность биосенсора на основе бактерий Gluconobacter oxydans (коэффициент чувствительности составил 52±9 нА·дм3/мин·ммоль, предел обнаружения 9 мкмоль/дм 3 ). Полученные биорецепторные элементы на основе бактерий Gluconobacter oxydans и дрожжей Pichia angusta, инкапсулированных в бимодальные кремнийорганические золь-гель матрицы обладают высокой операционной стабильностью (относительное стандартное отклонение для выборок из 10 параллельных измерений варьировалось от 0,2 до 0,9). Долговременная стабильность полученных рецепторных элементов составила 23 дня при использовании дрожжей Pichia angusta и 6 дней при использовании в качестве биокатализатора бактерии Gluconobacter oxydans.

Анализ субстратной специфичности полученных рецепторных элементов показал, что уксуснокислые бактерии и метилотрофные дрожжи, иммобилизованные в бимодальную золь-гель матрицу, дают высокие отклики на первичные спирты (60 и 90% относительно этанола), сигналы на вторичные и третичные спирты значительно ниже (20-30%).

Это позволило использовать полученные рецепторные элементы для определения спиртов. При статистической обработке экспериментальных выборок из семи параллельных определений этанола с помощью биосенсора с рецепторными элементами на основе дрожжей Pichia angusta и бактерий Gluconobacter oxydans показано, что результаты, полученные с помощью биосенсора во всех случаях не имеют значимых отличий от значений 40,0 об.%, заявленных в нормативных документах.

Таким образом, возможно применение метилотрофных дрожжей Pichia angusta и уксуснокислых бактерий Gluconobacter oxydans при создании рецепторных элементов биосенсоров определения этанола.

Однако использование в качестве биоматериала метилотрофных дрожжей является предпочтительнее в виду более высокой чувствительности и долговременной стабильности.

Работа выполнена при поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009-2013 годы», соглашение № 14.В37.21. Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" АНТИАГРЕГАЦИОННЫЙ ЭФФЕКТ ПРОИЗВОДНЫХ 3-МЕТИЛ-1-ЭТИЛКСАНТИНА.

Камилов Ф. Х., Тимирханова Г. А., Самородова А. И., Халиуллин Ф. А., Муратаев Д. З.

ГБОУ ВПО Башкирский Государственный Медицинский Университет, Минздравсоцразвития России samalil@rambler.ru Производные метилксантина достаточно долго и успешно применяются в практической медицине [1]. У данной группы препаратов четко определены показания и противопоказания к применению, а также доказанный многочисленными фундаментальными и клиническими исследования спектр биологической активности [5, 6].

Одним из преимуществ метилксантинов является способность корректировать систему гемостаза за счет выраженной антиагрегационной и гемореологической активности. Однако имеются ограничения применения этих препаратов в качестве селективных антиагрегантов [3]. Поэтому перспективным является синтез аналогов соединений данной группы лекарственных препаратов, для поиска на их основе потенциальных антиагрегантов.

Цель исследования: Изучить влияние 6 впервые синтезированных производных 3-метил-1-этилксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов и сравнить с применяемыми в медицине лекарственными препаратами, используемыми для коррекции системы гемостаза.

Материалы и методы исследования. Объекты исследования лекарственные препараты: пентоксифиллин, кофеин-бензоат натрия, эуфиллин, а также производные 3-метил-1-этил-ксантина, впервые синтезированные на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета [2].

Исследование влияния на функциональную активность тромбоцитов проводили in vitro по методу Born на агрегометре “Thromlite-1006A” на донорской крови человека [4]. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов. В качестве индуктора агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации мкг/мл и коллаген в концентрации 5 мг/мл, производства Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" “Технология-Стандарт”, г. Барнаул. Определение активности исследуемых производных проводили в концентрации 210-3 М/л. При анализе агрегатограмм обращали внимание на спонтанную агрегацию тромбоцитов, вызванную введением исследуемого вещества в плазму, рассчитывали степень подавления или усиления агрегации под действием производных ксантина, оценивали дезагрегационный эффект соединений.

Препараты сравнения: в качестве антиагрегантов использовали пентоксифиллин, кофеин-бензоат натрия, эуфиллин (ОАО «Дальхимфарм», Россия). Определение влияния на функциональную активность тромбоцитов проводили на 6 пробах крови разных доноров для каждого соединения. Данные показателей статистически обрабатывали с применением t-критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждение. Результаты исследования влияния производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов представлены в таблице.

Из данных таблицы 1 видно, что все производные ксантина в данной концентрации проявляют антиагрегационную активность. Среди препаратов сравнения наибольшую активность оказал кофеин-бензоат натрия. При предварительной инкубации кофеин-бензоата натрия в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 минут, происходило снижение агрегации в среднем на 5,3% относительно контроля.

Пентоксифиллин, подавляющий в данной концентрации АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов на 50,0%, на коллаген-индуцированную агрегацию влияния не оказывал.

Среди впервые синтезированных производных ксантина наибольшую антиагрегационную активность проявило соединение М-59. Введение 210 -3 М/л вещества в кювету агрегометра за 3 мин до индуктора приводит к подавлению агрегации тромбоцитов в среднем на 9,1% и 7,2% относительно контроля. Это превышает показатели антиагрегационной активности препаратов сравнения.

Таким образом, среди впервые синтезированных производных ксантина найдено соединение, превосходящее по антиагрегационной активности ряд применяемых в настоящее время препаратов.

Полученные результаты свидетельствуют о перспективности дальнейших исследований по поиску потенциальных антиагрегантов среди производного данного ряда.

Таблица 1. Агрегация тромбоцитов в присутствии изучаемых соединений.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" АДФ-индуцированная Коллаген-индуцированная агрегация № Шифр агрегация тромбоцитов (% тромбоцитов (% к к контролю) контролю) 1.

М-12 98,7±1,2 97,7±1, 1.

М-13 98,1±1,9 97,8±2, 1.

М-14 98,3±1,2 98,3±1, 1.

М-15 98,5±1,2 96,8±1, 1.

М-16 98,3±1,1 98,3±1, 1. 92,8±2,3 P10,001 P20, М-59 90,9±2,1 P1=0, P30, 1.

Пентоксифиллин 51,9±2,7 100,0±0, 1. Кофеин-бензоат 84,8±1,9 94,7±1, натрия 1.

Эуфиллин 92,8±1,7 97,5±1, Примечание: Уровень статистической значимости различий в сравнении с эуфиллином (P1), кофеин-бензоат натрием (P2), пентоксифиллином (P3) Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" БЕСПРОВОДНАЯ ПЕРЕДАЧА ЭКГ ВЫСОКОГО РАЗРЕШЕНИЯ Киселев А. О.

Владимирский Государственный Университет develop.prime@gmail.com Современная функциональная диагностика располагает самыми различными инструментальными методами исследования. Самым распространенным и доступным методом исследования является кардиография, используемая в основном в кардиологии. Однако она с успехом применяется и при исследовании больных с заболеваниями легких, почек, печени, эндокринных желез, системы кровообращения, а также в педиатрии, онкологии и т.д. Ежегодно в стране производят десятки миллионов электрокардиографических исследований.

Электрокардиография позволяет изучать следующие функции сердца:

автоматизм, проводимость, возбудимость, рефрактерность и аберрантность.

Основные исследования при установлении диагноза больному по ЭКГ сводятся к измерению характерных временных интервалов, определению изолинии и измерению амплитуды зубцов ЭКГ.

ЭКГ применяется для: определения частоты и регулярности сердечных сокращений;

диагностирует острое или хроническое повреждение миокарда;

выявляет нарушения обмена калия, кальция, магния и других электролитов;

выявляет нарушения внутрисердечной проводимости;

Однако использование традиционного метода регистрации ЭКГ при определении степени риска возникновения аритмий и их раннего прогнозирования приводит к затруднениям. Поэтому актуальными являются разработка и внедрение новых высокочувствительных и специфичных методов, позволяющих оценить электрическую стабильность миокарда.

В последние годы все более широкое развитие получает метод электрокардиографии высокого разрешения (ЭКГ-ВР). Основой этого метода является компьютерное усиление, усреднение и фильтрация различных участков электрокардиограммы с их последующей математической обработкой. Все это позволяет выделить и анализировать низкоамплитудные сигналы, недоступные для анализа при использовании традиционных методов регистрации ЭКГ и Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" содержащие важную диагностическую информацию.

;

Для регистрации ЭКГ-ВР необходимо усиление сигнала ЭКГ в 103-105 раз, выделение (фильтрация) высокочастотного сигнала от низкочастотных составляющих и внесердечной электрической активности (шума).

Высокий уровень усиления ЭКГ приводит к регистрации шумов с амплитудой до 50 мкВ. Основные источники шума: физиологический шум вследствие активности скелетных мышц, электронный шум работы усилителей и фоновый (сетевой) шум.

Использование беспроводного модуля регистрации ЭКГ-ВР обеспечивает минимизацию фонового шума, дает возможность мобильного мониторинга сердечного ритма, а реализация кроссплатформенного клиента снижает стоимость устройства и делает его доступным широкому кругу потребителей.

В настоящий момент на рынке представлены следующие комплексы для регистрации ЭКГ:

Поли-Спектр-8/EX. ЭКГ передается по радио с использованием q технологии Bluetooth на расстояние до 7 метров.

Частота квантования — 1000 Гц, разрядность АЦП — 24 бит;

q В базовой комплектации Поли-Спектр-8/EX позволяет регистрировать q от одного до 12 отведений кардиограммы и один канал дыхания, автоматически проводить контурный анализ ЭКГ с построением синдромального заключения, хранить и печатать ЭКГ. Основная область применения этого прибора — нагрузочные тесты (велоэргометрия, тест на беговой дорожке, ортопроба, проба на кресле Барани и т.п.);

КардиоВизор-06с. Представляет собой вариант поставки системы для q установки на компьютер потребителя, предназначенной для скрининговой оценки состояний сердца. Максимальная частота дискретизации 2000 Гц. Количество отведений – 12;

BIONOMADIX 2CH ECG AMPLIFIER - BN-ECG2. Разработка компании q "Biopac Systems". Максимальная частота дискретизации - 2000 Гц.

Количество каналов - 16. Время автономной работы 72 часа. Вес грамма;

Nexus-10. Wireless Nexus-10 - десятиканальная беспроводная система q мониторинга ЭКГ и др. сигналов. Частота дискретизации 2048 Гц;

Mortara. Беспроводной регистратор ЭКГ Mortara Т12 с функцией q пульсоксиметрии. Обеспечивает мониторинг и передачу 12 каналов для системы стресс-ЭКГ X-Scribe II.

CardioMem CM 3000. Обеспечивает неискаженное сохранение ЭКГ, q Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" прост и удобен в применении. Снабжен большим ЖК- дисплеем для оценки качества наложения электродов, уровня заряда батареек и настроек регистрации;

МН-02-8. Комплекс предназначен для 24/48/72 часового непрерывного q мониторирования ЭКГ с целью выявления нарушений ритма и ишемических проявлений, анализа данных, ведения базы данных пациентов.

Отметим, что все продукты представленные на рынке в качестве анализатора данных используют персональный компьютер, поэтому регистрация нарушений возможна только после выгрузки данных.

Использование в качестве приемника данных мобильный телефон дает возможность оперативно реагировать на нарушения ритма.

Литература 1. Бойцов С.А., Гришаев С.Л. и др. Новый метод описания результатов спектрально-временного картирования ЭКГ-ВР и оценка его диагностической эффективности. Вест. аритмологии 1999;

14(14):25-9.

2. Иванов Г.Г., Сметнев А.С., Простакова Т.С. и др. Поздние потенциалы и спектрально-временное картирование предсердного зубца Р у больных с пароксизмальной формой мерцательной аритмии.

Кардиология 1996;

11:43-8.

3. Николин К.М., Новые критерии для оценки зубца Р при ЭКГ-ВР. Вестн.

Аритмологии 1995;

4( 4):16.

4. Подлесов А.М., Бойцов С.А., Егоров Д.Ф. и др. Мерцательная аритмия.

СПб.: Изд-во "ЭЛБИ-СПб". - 2001. - С. 77-9.

5. Мур Клаудиус. Чудовский Игорь. Упрощение процессов медицинских измерений с использованием беспроводных датчиков. Беспроводные технологии №2. - 2006.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ИНГИБИТОРЫ ТРАНСПОРТА КАЛЬЦИЯ ТОРМОЗИЛИ ОТКРЫТИЕ TL+-ИНДУЦИРОВАННОГО CA2+-ЗАВИСИМОГО НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО КАНАЛА ВО ВНУТРЕННЕЙ МЕМБРАНЕ МИТОХОНДРИЙ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ Коротков С.М., Брайловская И.В., Коновалова С.А., Емельянова Л.В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова Российской академии наук sergey-korotkov-spb-2013@yandex.ru Показано, что нагрузка митохондрий ионами Ca 2+ стимулирует открытие кальций-зависимого неспецифического канала (КЗНК, the mitochondrial permeability transition pore) во внутренней митохондриальной мембране (ВММ) и в этом случае через неё могут проходить молекулы до 1500 кДа (Bernardi, Stockum, 2012). Если такая нагрузка не слишком высока, то эта мембрана становится проницаемой для ионов K +, Na +, H + или Ca 2 + (Ichas, Mazat, 1998). Опыты с изолированными митохондриями печени крысы в средах, содержащих смесь TlNO 3 с KNO 3, или с NaNO 3, или с NH 4 NO 3 показали, что Tl + стимулировал ионную проницаемость ВММ для K +, Na + или H +, соответственно (Korotkov, 2009). Последующая нагрузка этих энергизованных митохондрий кальцием стимулировала открытие Tl+ -индуцированного КЗНК. Это проявлялось в усилении их набухания и дыхания в состоянии 4 по Чансу, в ускорении Ca 2+-индуцированного рассеивания электрохимического потенциала ( мито ) на ВММ и в заметном снижении дыхания митохондрий в состоянии 3 по Чансу или в присутствии разобщителя окислительного фосфорилирования 2,4-динитрофенола (Korotkov, Saris, 2011). В данной работе были изучены эффекты рутениевого красного (РК, ингибитора митохондриального Ca2+-унипортера) и ЭГТА (кальциевого комплексона) на открытие Tl+-индуцированного КЗНК в среде, содержащей TlNO3 и KNO 3. Мы обнаружили, что РК и ЭГТА стимулировали сжатие энергизованных митохондрий, набухших после добавки Ca2+ в эту среду, и тормозили интенсивность Ca2+-индуцированного рассеивания мито.

Внесение этих реагентов до Ca 2+ полностью ингибировало открытие КЗНК. При этом набухание, дыхание и рассеивание мито были такими же как и в опытах без кальция. Дыхание разобщённых митохондрий Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" снижалось слабее если РК и ЭГТА добавляли в среду после Ca 2+ и до ДНФ. Ингибирование Tl+-индуцированного КЗНК рутениевым красным, вносимым в среду до Ca2+, указывает на вовлечение Ca2+-унипортера в процесс транспорта ионов Ca 2 + в матрикс митохондрий. Сжатие набухших митохондрий и более активное их дыхание в присутствии ДНФ в опытах где РК и ЭГТА добавляли после Ca 2+ может быть связано с энергозависимым удалением Ca 2 + из матрикса посредством митохондриального Ca 2+ /H + -обменника (Gunter, Sheu, 2009), что предполагалось нами ранее (Korotkov, Saris, 2011).

Литература 1. Bernardi P., von Stockum S. // The permeability transition pore as a Ca2+-release channel: new answers to an old question. Cell Calcium (2012) V. 52. № 1. P. 22-27.

2. Gunter T.E., Sheu S.S. // Characteristics and possible functions of mitochondrial Ca2+ transport mechanisms. Biochim. Biophys. Acta (2009) V. 1787. №11. P. 1291-1308.

3. Ichas F., Mazat J.P. // From calcium signaling to cell death: two conformations for the mitochondrial permeability transition pore.

Switching from low- to high-conductance state. Biochim. Biophys. Acta (1998) V. 1366. № 1-2. P. 33-50.

4. Korotkov S.M. // Effects of Tl+ on ion permeability, membrane potential and respiration of isolated rat liver mitochondria. J. Bioenerg. Biomembr.

2009 V. 41. № 3. P. 277-287.

5. Korotkov S.M., Saris N.E. // Influence of Tl+ on mitochondrial permeability transition pore in Ca2+-loaded rat liver mitochondria. J.

Bioenerg. Biomembr. (2011) V. 43. № 2. P. 149-162.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ФОСФАТ УСИЛИВАЛ ДЕЙСТВИЕ ТАЛЛИЯ НА МИТОХОНДРИИ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ Коротков С.М., Емельянова Л.В., Ягодина О.В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова Российской академии наук, Санкт-Петербург korotkov@SK1645.spb.edu Фосфат (Pi) является одним из основных цитоплазматических анионов и транспортируется в митохондрии с помощью Pi,H+ симпортера (Ligeti, Fonyo, 1984). В опытах с фосфатом ускорялись поглощение и экструзия K+ и Ca 2+ энергизованными митохондриями (Harris, Zaba, 1977;

Jung, Brierley, 1981). Он усиливал токсические эффекты Cd2+ на митохондрии (Koike et al., 1991). С другой стороны, действие Tl+ на митохондрии в присутствии фосфата не изучено. В связи с этим было исследовано действие неорганического фосфата (H 2PO4-) на набухание и дыхание изолированных митохондрий печени крысы в среде с 0-75 мМ TlNO 3.

Также оценивали влияние Tl+ и фосфата на K+-диффузионный потенциал, индуцированный валиномицином. Фосфат не влиял на набухание неэнергизованных митохондрий, но заметно тормозил их сжатие, индуцированное последующим внесением в среду сукцината. Набухание и дыхание в состоянии 4 по Чансу энергизованных митохондрий было больше при одних и тех же концентрациях TlNO3 в среде с фосфатом и сукцинатом по сравнению с аналогичными опытами без фосфата.

Снижение K+-диффузионного потенциала ускорялось в среде с фосфатом.

Открытие Tl + -индуцированного Ca 2+ -зависимого неспецифического канала (КЗНК, mitochondrial permeability transition pore) во внутренней митохондриальной мембране сильнее стимулировалось в присутствии фосфата. Однако, действие ингибиторов КЗНК (циклоспорина А (CsA) и АДФ) оставалось прежним в среде с фосфатом. При этом, как и в опытах без фосфата, максимальный ингибирующий эффект наблюдался при одновременном присутствии CsA и АДФ. Фосфат не влиял на дыхание митохондрий в присутствии 2,4-динитрофенола - разобщителя окислительного фосфорилирования. Стимулированная таллием активность моноаминоксидазы дополнительно не возрастала в присутствии неорганического фосфата. Таким образом, усиление фосфатом неблагоприятного действия Tl+ на митохондрии может быть Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" связано со стимуляцией набухания и дыхания митохондрий в состоянии 4, а также с увеличением вероятности открытия КЗНК (Korotkov et al., 2008).

Литература 1. Harris E.J., Zaba B. // The phosphate requirement for Ca2+-uptake by heart and liver mitochondria. FEBS Lett. (1977). V. 79. № 2. P. 284-290.

2. Jung D.W., Brierley G.P. // On the relationship between the uncoupler-induced efflux of K+ from heart mitochondria and the oxidation-reduction state of pyridine nucleotides. J. Biol. Chem. (1981) V.

256. № 20. P. 10490-10496.

3. Koike H., Shinohara Y., Terada H. // Why is inorganic phosphate necessary for uncoupling of oxidative phosphorylation by Cd2+ in rat liver mitochondria? Biochim. Biophys. Acta (1991) V. 1060. № 1. P. 75-81.

4. Korotkov S.M., Emel'yanova L.V., Yagodina O.V. // Inorganic phosphate stimulates the toxic effects of Tl+ in rat liver mitochondria. J. Biochem.

Mol. Toxicol. (2008) V. 22. № 3. P. 148-157.

5. Ligeti E., Fonyo A. // Reactivity of the sulphydryl groups of the mitochondrial phosphate carrier. Eur. J. Biochem. (1984) V. 139. № 2. P.

279-285.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ЭФЕКТЫ TL+ НА МИТОХОНДРИИ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ СТИМУЛИРОВАЛИСЬ В ПРИСУТСТВИИ НОНАКТИНА Коротков С.М.,Глазунов В.В.,Ягодина О.В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова Российской академии наук sergey-korotkov@mail.ru Известно, что происходящий при участии KАТФ-зависимых каналов транспорт ионов Tl+ в матрикс энергизованных митохондрий (Никитина, Глазунов, 2003;

Wojtovich et al., 2010) заметно ускорялся в присутствии циклического ионофора нонактина (Skulskii et al., 1981). Нами были исследованы эффекты Tl+ на набухание, дыхание и транспорт 86Rb+ в опытах с изолированными митохондриями печени крысы в присутствии 10 -8 М нонактина в средах, содержащих 0-75 мМ TlNO 3 или 0-50 мМ Tl-ацетат. В опытах без нонактина деэнергизованные митохондрии набухали в этих средах. Такое набухание митохондрий становится возможным в среде с TlNO 3 за счёт повышенной проницаемости внутренней митохондриальной мембраны для ионов Tl +, а в среде Tl-ацетатом по причине обмена внешнего Tl+ на протоны матрикса по Tl+ /H + обменному механизму (Saris et al., 1981). С другой стороны, в присутствии нонактина в этих средах вплоть до 25 мМ Tl+ наблюдалось сжатие деэнергизованных митохондрий. В этом случае набухание митохондрий происходило только в присутствии 50-75 мМ TlNO3 или мМ Tl-ацетата.

В опытах с энергизованными сукцинатом митохондриями и нонактином в среде с Tl-ацетатом ускорилось их набухание и дыхание в состоянии 4 по Чансу и возросла интенсивность сжатия этих митохондрий, предварительно набухших в среде с TlNO3. Кроме того, накопление энергизованными митохондриями 86Rb+ резко увеличивалось в присутствии нонактина. С другой стороны, в средах с таллием нонактин не оказывал заметного влияния на дыхание фосфорилирующих митохондрий в состоянии 3 по Чансу или в присутствии разобщителя окислительного фосфорилирования 2,4-динитрофенола. Стимулированая Tl-ацетатом активность моноаминоксидазы оставалась прежней в присутствии нонактина. Установлено, что нонактин, облегчая транспорт ионов Tl+ через внутреннюю мембрану митохондрий, способствует их более интенсивному набуханию и значительно ускоряет дыхание этих Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" митохондрий в состоянии 4 по Чансу (Korotkov et al., 2007).

Литература 1. Никитина Е.Р., Глазунов В.В. // Вовлечение K+-АТФ-зависимых каналов в транспорт моновалентного таллия (Tl+) через внутреннюю мембрану митохондрий печени крысы. ДАН. 2003. Т. 392. № 1. С.

123-125.

2. Korotkov S.M., Glazunov V.V., Yagodina O.V. // Increase in the toxic effects of Tl+ on isolated rat liver mitochondria in the presence of nonactin. J. Biochem. Mol. Toxicol. (2007) V. 21. № 2. P. 81-91.

3. Skulskii I.A., Saris N.E., Savina M.V., Glasunov V.V. // Uptake of thallous ions by mitochondria is stimulated by nonactin but not by respiration alone. Eur. J. Biochem. (1981) V. 120. № 2. P. 263-266.

4. Wojtovich A.P., Williams D.M., Karcz M.K., Lopes C.M., Gray D.A., Nehrke K.W., Brookes P.S. // A novel mitochondrial K(ATP) channel assay. Circ.

Res. (2010) V. 106. № 7 P. 1190-1196.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ ЛЕЙКОТРИЕНОВ У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ Костина Е.М.

ГБОУ ДПО ПИУВ Минздрава России giuv1@sura.ru Введение Современной патогенетической концепцией бронхиальной астмы (БА) является теория двойного воспаления, при котором ведущая роль отводится лейкотриенам (ЛТ), что отражено в результатах научных исследований и международных согласительных документах [5].

Выделение ЛТ происходит под действием множества факторов: аспирина и нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП), стресса, аллергенов, физической нагрузке и инфекции. Причем доказано, что именно цистениловые лейкотриены С4D4Е4 и В4, образующиеся путем активации липооксигеназного пути, играют ведущую роль в бронхоконстрикции и развитии воспаления у больных БА [3,4]. Для достижения полного контроля БА необходима терапия, направленная на все звенья патогенеза, в том числе на блокаду ЛТ [5]. Роль лейкотриенового механизма наиболее изучена на примере аспириновой формы БА, которая встречается примерно у 20% пациентов [2]. Значение ЛТ в воспаление у больных инфекционно-зависимой бронхиальной астмой (ИЗБА) до настоящего времени не определено.

Вместе с тем, по литературным данным инфекционный фактор в виде ОРВИ, очагов хронической инфекции может быть пусковым моментом в синтезе ЛТ и формировании хронического риносинусита, полипов и БА.

Предполагают, что первичными триггерами непереносимости аспирина и одновременно причиной хронического воспаления в стенке дыхательных путей у таких пациентов являются вирусы и бактерии, в первую очередь суперантиген стафилококка, хотя эта гипотеза признана не всеми [1]. Связь клинических проявлений бронхоспазма с аспирином наблюдается далеко не у всех больных, лишь 14% пациентов называют аспирин и другие НПВП факторами, провоцирующими приступ БА, а повышение ЛТ может определяется у больных и без клиники непереносимости. Клинически это приводит к формированию особого фенотипа БА, в основе которого лежит повышение значимых лейкотриенов [5]. С точки зрения клинициста крайне важно иметь в Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" практике диагностические маркеры, позволяющие определить ведущий патогенетический механизм, исходя из которых, можно выбрать наиболее эффективный способ лечения.

Цель работы: изучить диагностическую значимость определения уровня лейкотриенов C4D4E4 и В4 у больных ИЗБА, и возможность его использования в выборе метода терапии.

Материалы и методы: Проведено обследование 53 пациентов ИЗБА с хроническим полипозным риносинуситом (ХПРС). Возраст пациентов от 18 до 60 лет. В качестве групп контроля для сравнительной оценки уровня лейкотриенов обследованы здоровые доноры (25 человек).

Диагноз бронхиальная астма установлен в соответствии с Международным консенсусом по диагностике и терапии БА (Джина, 2008г.) [5]. При поступлении пациентов в аллергологическое отделение проводилось комплексное клинико-лабораторное и аллерго-иммунологическое обследование. Суммарные лейкотриены C4D4E4 и лейкотриен B4 в плазме крови определяли иммуноферментным методом, наборами фирмы Neogen corporation на базе ЦНИЛ ГБОУ ДПО ПИУВ Минздрава России (зав. ЦНИЛ – профессор Б.А. Молотилов) согласно инструкции.

Статистическая обработка материала проводилась с помощью пакета прикладных программ «Статистика 6» на персональном компьютере.

При сравнении двух выборочных средних при сравнении групп между собой использовали критерий Манн-Уитни (U).

Результаты и обсуждение Средняя длительность течения БА составила 9,88±0,60 лет. У пациентов наблюдалось в среднем 4,21±0,34 обострения в год, средней длительностью до 11,92±1,06 дней. В среднем пациенты имели 1,89±0,08 госпитализаций в год. Тяжесть клинических показателей соответствовала среднетяжелому течению БА в среднем - 2,36±0, баллов.

Все пациенты имели связь обострений БА с ОРЗ/ОРВИ и/или обострением имеющихся очагов хронической инфекции (хронический бронхит, тонзиллит, гайморит, полипоз и т.д.) и применением антибактериальных препаратов, в среднем до 3,19±0,22 курсов в год.

У всех пациентов БА преобладающей сопутствующей патологией был хронический полипозный риносинусит. ННПВП без полипов выявлена у 21 (39,6%) пациента и полная аспириновая триада (БА, полипоз и НПВП) у 15 (28,3%) больных. Интересным фактом является сочетание БА с острой (у 5 -9,4% пациентов) и хронической крапивницей, и отеком Квинке (у 10-18,9% пациентов). В целом комбинация с заболеваниями, Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" имеющими общую патогенетическую основу, составила 56,5%.

Выявленная нами клиническая комбинация свидетельствует о системности развития данного патогенетического механизма.

Исходно показатели функции внешнего дыхания незначительно отличались от нормы. Но у 2/3 пациентов с нормальными значениями ОФВ1 наблюдалась гиперреактивность бронхов на неспецифические раздражители, суточный разброс ПСВ более 20%, что на фоне противовоспалительной терапии свидетельствует о персистенции воспаления в дыхательных путях. По объему противовоспалительной терапии преобладали пациенты с высокими дозами противовоспалительных препаратов (стероидов) (41,5%).

В соответствии с целью нашей работы мы провели изучение уровня суммарных лейкотриенов С4D4Е4 и лейкотриена В4 в плазме крови у пациентов ИЗБА с ХПРС. При сравнительном анализе полученных данных выявлено достоверное увеличение высвобождения лейкотриенов у больных данной формой БА по сравнению со здоровыми лицами, причем увеличение уровня лейкотриенов было достоверным (тест Mann-Whitney, p=0,000).

Повышение ЛТ выявлено у 40 пациентов (75,5%). Показатель уровня лейкотриена В4 у больных БА колебался от 4,40 нг/мл до 21,40 нг/мл.

Средний уровень лейкотриена В4 составил - 15,66±0,70 нг/мл (медиана 15,85), у здоровых людей - 1,42±0,20 нг/мл (медиана 1,40). Показатель уровня суммарных лейкотриенов C4D4E4 колебался от 0,08 нг/мл до 4, нг/мл. Средний уровень лейкотриенов C4D4E4 составил- 2,12±0,24 нг/мл (медиана 1,70), у здоровых людей – 0,58±0,07 (медиана 0,60) нг/мл (рис.1, где * - p 0,05 достоверность различий между группой БА и здоровыми).

Как видим, значения лейкотриенов у изучаемых больных значительно отличались от таковых у здоровых лиц (р 0,05).

Повышение уровня ЛТ свидетельствует об участии лейкотриенового механизма в патогенезе ИЗБА, осложненной ХПРС. Кроме того значимое повышение лейкотриена В4 может свидетельствовать о напряженном функционировании нейтрофилов и других фагоцитов, подтверждая роль хронической инфекции у данных больных.

Следует отметить, что значимое повышение уровня ЛТ у больных БА (в 2-3 раза) наблюдалось у пациентов с нормальными значениями ФВД, что может служить дополнительным критерием наличия ГРБ и персистенции воспаления в респираторном тракте у наблюдаемых пациентов. ЛТ C4D4E4 и В4 могут служить биомаркерами хронического воспаления респираторного тракта и тяжести течения у больных ИЗБА с ХПРС.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Выводы:

Исходя из этого, критериями диагностики лейкотриенового механизма у больных ХК с ННПВП являются: анамнестическая связь с приемом НПВП;

тяжелое клиническое течение;

сочетание с полипозным риносинуситом и бронхиальной астмой;

сочетание с крапивницей и отеком Квинке;

повышение уровня лейкотриенов В4 и C4D4E4.

Назначение антилейкотриеновых препаратов, в частности монтелукаста, имеющего фармакологическую активность в отношении цистениловых лейкотриенов является наиболее рациональным при данной патологии.

Таким образом, определение значений лейкотриенов у больных БА имеет важное диагностическое значение в определении лейкотриенового механизма и выбора адекватного метода терапии.

Сочетание биохимического диагностического обследования и клинических данных анализа течения БА повышает результативность лечения больных.

Рис. 1. Сравнительная оценка значений лейкотриенов у больных БА Литература 1. Хирнеткина А.Ф., Носуля Е.В., Курбачева О.М., Павлова К.С., Евсеева В.В. Влияние суперантигенов стафилококка на мукоцилиарную активность слизистой оболочки ночса у больных рефрактерным синуситом // Российский аллергологический журнал. - 2010. - №5, вып.1. - с 273- 2. Drug allergy / Vervloet D., Pradal M., Castelain M.I.– Sweden, Uppsala:

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Pharmacia & Upjohn' Diagnostics AB, 1999. – 323 p.

3. Fal A.M., Kope A. Status of leukotrienes in the pathophysiology of asthma.

Necessity for antileukotrienes treatment // Pneumonologia i alergologia polska. – 2010. - № 78(1). – р. 68- 4. Riccioni G., Della Vecchia R., Menna V., et al. Antileukotrienes in the therapy of bronchial asthma // Recenti progressi in medicina. – 2003. - № 94(11). – р. 509- 5. Global Initiative for Asthma. Global Strategy for Asthma Management and Prevention (GINA). National Institutes of Health;

National Heart, Lung, and Blood Institute [accessed June 8, 2009;

updated 2008].

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ВЛИЯНИЕ 3-АМИНО-1,2,4-ТРИАЗОЛА И D,L-БУТИОНИН-S,R-СУЛЬФОКСИМИНА НА УЛЬТРАСТРУКТУРУ ПЛАСТИД НЕМОРФОГЕННОГО КАЛЛУСА ГРЕЧИХИ ТАТАРСКОЙ Костюкова Ю. А., Хаертдинова Л. Р., Румянцева Н. И.

КИББ КазНЦ РАН j.kostyukova@mail.ru Стресс может приводить к значительным изменениям ультраструктуры клеток. 3-амино-1,2,4 -триазол (АТ) и D,L-бутионин-S,R-сульфоксимин (БСО) находят широкое применение при изучении стресса в клетках животных и растений. АТ – ингибитор каталазы, способствует накоплению активных форм кислорода, вызывает окислительный стресс. БСО – ингибитор первого фермента синтеза глутатиона -глутамилцистеинсинтазы, способствует снижению содержания восстановленной формы глутатиона, изменению окислительно- восстановительного потенциала в клетке. Исследования, направленные на изучение изменения строения клеток растений под воздействием АТ и БСО, немногочисленны. Экспериментальные работы по изучению структуры пластид при воздействии каких-либо факторов – единичны. Цель нашей работы – сравнительное изучение структуры пластид под влиянием АТ и БСО.

В качестве объекта исследования использовали гетеротрофную неморфогенную каллусную культуру гречихи татарской (линия 1-8р).

Культивирование каллуса осуществляли на среде RX (Румянцева и др.,1989) с добавлением 10 мМ АТ и на среде RX с добавлением 0,1 мМ БСО. Изменения ультраструктуры клеток оценивали на 5-ый день культивирования каллусов на среде с ингибиторами и без них.

Несмотря на то, что каллус был представлен только паренхимными клетками, их ультраструктурные особенности варьировали, и наибольшее морфологическое разнообразие было отмечено для пластид (рис.1) Наряду с пластидами овальной и округлой формы в клетках присутствовали изогнутые, гантелеобразные органеллы, пластиды имеющие кольцевые профили. Тилакоидная система органелл была образована длинными немногочисленными цистернами, не формирующими граны. В большинстве пластид отмечали присутствие простых крахмальных зерен.

Культивирование каллуса на средах с добавлением ингибиторов Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" приводило к увеличению количества пластид, имеющих кольцевые профили на срезах (рис.2). Наличие их могло свидетельствовать о том, что пластиды имеют либо чашевидную форму, либо содержат вакуоль в строме. Идентификацию чашевидных пластид мы проводили по наличию двойной мембраны внутренней поверхности кольца в строме.

Присутствие единичной мембраны расценивали как признак формирования внутрипластидной вакуоли. Наблюдали укорочение тилакоидов и расширение их люмена («пузыревидные» тилакоиды).

Увеличение количества чашевидных пластид в клетках растений наблюдается, как правило, при старении и при воздействии антибиотиков, гербицидов, водного стресса (Hudak et al., 1983), ванадия (Jasik, 1987). Однако механизмы возникновения чашевидной формы пластид остаются не ясными. Показано, что формирование вакуоли в пластидах стареющих тканей растений происходит за счет расширения интратилакодного пространства (Hudak et al., 2005). В клетках неморфогенного каллуса наблюдали образование расширенных тилакоидов, слияние которых, возможно, способствовало формированию вакуоли в пластидах.

Крахмальные зерна в пластидах на средах с АТ и БСО уменьшались в размерах, в большинстве пластид крахмальные зерна отсутствовали.

Исчезновение крахмальных зерен и разрушение тилакоидов пластид могли быть причинами изменения формы органелл и формирования чашевидных пластид.

Характерными особенностями пластид каллусных клеток, культивируемых на среде с добавлением БСО являются сохранение в строме тилакоидов и возрастание количества пластоглобул. Увеличение количества пластоглобул мы отмечали также на среде с АТ, но на среде с БСО проявление этого процесс было более выраженным. Увеличение количества пластоглобул в пластидах может рассматриваться как защитная реакция клетки на стресс. Пластоглобулы – защитный, биосинтетический, запасающий комплекс пластид (Vidi, 2006). В них содержится фермент - токоферол циклаза, активность которого возрастает в период окислительного стресса (AustinII et al., 2006.) Образующийся в пластоглобулах токоферол защищает мембранные липиды от окисления. Триацилглицериды, содержащиеся, в пластоглобулах, могут в дальнейшем трансформироваться в сахара через окисление и гликолиз, высвобождаясь из пластид в результате разрушения органеллы, либо посредством блеббинга (Vidi, 2006).

Как показано на рис. 2 степень разрушающего воздействия БСО и АТ на пластиды клеток неморфогенного каллуса различна. Чашевидная Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" пластида неморфогенного каллуса характеризуется плотной стромой, с редкими цистернами длинных тилакоидов (рис. 2а). При добавлении в среду культивирования БСО в тилакоидах пластид формируются расширения (рис. 2б). На среде с АТ тилакоиды, также как и на среде с БСО, расширены Наружные мембраны амилопластов формируют выпячивания (рис. 2в). Пластиды в каллусных клетках на среде с АТ в меньшей степени сохраняли обычную морфологию и строение.

Электронномикроскопические исследования пластид клеток неморфогенной каллусной культуры гречихи, культивируемых на средах с добавление БСО и АТ, показали, что изменение окислительно-восстановительного баланса в клетке может способствовать возрастанию полиморфизма в морфологии и строении пластид.

Рис. 1. Морфология амилопластов клеток неморфогенного каллуса гречихи на среде RX Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Рис. 2. Изменение строения чашевидных пластид на средах RX (a), БСО (б, ), АТ (в). Ап- амилопласт, Кр – крахмал, Т- тилакоиды, расширения тилакоидов и выпячивания наружной мембраны указаны стрелками Литература 1. Румянцева Н.И., Сергеева Н.В., Хакимова Л.Э., Сальников В.В., Гумерова Е.А., Лозовая В.В. Органогенез и соматический эмбриогенез в культуре двух видов гречихи // Физиология растений – Т.36 – вып.1 – с.187-194.

2. AustinII J., Frost E., Vidi P., Kessler F., Staehelin L. Plastoglobules are lipoprotein subcompartments of the chloroplast that are permanently coupled to thylakoid membranes and contain biosynthetic enzymes // The Plant Cell.- 2006. – Vol.18 – pp.1693-1703.

3. Hudak J., Galova E., Zemonova L. Plastid morphogenesis // In: Handbook of photosynthesis. – Second editon – ch.12 - Taylor and Francis Group, LLC - 2005 - pp.221-246.

4. Hudak J., Herich R., Dodak M., Plastidy – Veda –Bratislava - 5. Jasik J, Lux A., Hudak J., Mikus. Plastid degeneration induced by vanadium // Biology Plantarum (Praha). -1987- Vol.29.-pp.73- 6. Vidi P. On the role of the chloroplast plastoglobules lipoprotein particles vitamin E biosynthesis // A dissertation submitted to the University of Neuchatel for the degree of Doctor of Natural Sciences – 2006.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ДИНАМИКА ОБЩЕГО ТИРОКСИНА И ТРИЙОДТИРОНИНА В КРОВИ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПРИ КОМПЛЕКСНОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ЙОДА, СЕЛЕНА И ЛАКТОАМИЛОВОРИНА Коткова Т. В.

ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

t-sinykova@rambler.ru Для синтеза гормонов щитовидной железы необходимо достаточное количества йода и селена. Основные источники восполнения йода и селена для сельскохозяйственной птицы являются корма, но они часто являются несбалансированными и нестабилизированными, поэтому изучение влияния добавок йода, селена и пробиотиков на организм цыплят-бройлеров представляет определенный интерес. В организме существует функциональная взаимосвязь между этими элементами (1,2).

Селен участвует в метаболизме йода, входя в состав трийодтирониндейодиназы в виде селеноцистеина. Для их всасывания важен рН среды содержимого кишечника, в регуляции которого участвует микрофлора. Коррекция последней возможна за счет применения пробиотических препаратов (3).

Целью нашего исследования являлось изучение концентрации общего тироксина и трийодтиронина в крови цыплят-бройлеров кросса «Смена 7» при комплексном использовании йода, селена и пробиотика лактоамиловорина.

Материалы и методы. Экспериментальная часть работы выполнялась на базе вивария ФВМиБ «Оренбургский ГАУ» на клинически здоровых суточных цыплятах-бройлерах кросса «Смена-7».

Для проведения исследований было сформировано 8 групп, по сорок голов в каждой.

Плотность посадки, фронт кормления и поения, температурный и влажностные режимы на протяжении всего опыта соответствовали рекомендациям ВНИТИП и были одинаковыми для всех групп (4).

Согласно схеме эксперимента (табл.1) цыплята – бройлеры опытных групп получали в составе рациона неорганические формы селена и йода соответственно в виде селенита натрия 0,2 мг/кг (в пересчете на элемент), йодида калия 0,7 мг/кг (в пересчете на элемент), а также пробиотик лактоамиловорин в дозе 1 г/кг комбикорма. Препараты с комбикормом давали ежедневно на протяжении всего опыта.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Содержание общего тироксина (Т4 общ.) и общего трийодтиронина (Т3 общ.) определяли твердофазным иммуноферментным методом с использованием соответствующих наборов реактивов фирмы «Хема» - «Т -ИФА» и «Т3-ИФА»

Таблица 1.Схема проведения эксперимента Количество Период Группа голов в опыта, Условия кормления группе сут.

Контрольная ОР (основной рацион) ОР + пробиотик 1 опытная лактоамиловорин (ЛАВ) 2 опытная ОР + йодид калия (КI) 40 ОР + селенит натрия (Na2SeО3) 3 опытная 4 опытная ОР + ЛАВ + КI 5 опытная ОР + ЛАВ + Na2SeО Результаты исследований. Тироксин основной гормон щитовидной железы. Он регулирует обмен веществ, энергетический обмен, процессы синтеза и распада белков, жиров, углеводов, рост, развитие и размножение, кислородный обмен, температуру тела. Основное биологическое действие тироксина совместно с трийодтиронином сводится к интенсификации обмена веществ. Отклонение от нормы отрицательно влияет на все органы, что вызывает нарушение клеточной дифференциации и роста животных и птицы.

Уровень общего тироксина в сыворотке крови подопытных цыплят-бройлеров представлен в таблице 2.

Таблица 2. Содержание общего тироксина (Т4 общ.) в сыворотке крови подопытных цыплят-бройлеров, нмоль/л (М±m, n=6: 3 и 3) Группа Возраст, 1 2 3 4 5 6 сутки Контрольная Опытная опытная опытная опытная опытная опытная опытная 1 31,6±0, 36,4 34,0 45,2 42,8 46,1 41,2 44,3 48, ±3,3 ±2,6 ±3,0 ±2,8 ±3,7 ±3,1 ±2,31 ±1,2** 37,5 35,1 45,0 44,9 44,0 47,3 48,0 47, ±2,7 ±3,8 ±1,5* ±3,3 ±1,3* ±2,1* ±3,19 ±2,2* Нами установлено, что произошло достоверное повышение уровня общего тироксина в сыворотке крови цыплят в 7-й опытной группе уже на 35-е сутки на 32,4 %;

на 42-е сутки во 2-й, 4-й, 5-й, и 7-й опытных Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" группах на 20,0, 17,3, 26,1 26,4% соответственно по отношению к цыплятам контрольной группы.

В периферических тканях при дейодировании из тироксина (Т 4 ) образуется трийодтиронин (Т 3 ). Трийодтиронин более активен, чем тироксин, но находится в крови в меньшей концентрации. Это гормон щитовидной железы, который стимулирует обмен и поглощение кислорода тканями, увеличивает теплопродукцию и потребление кислорода всеми тканями организма, за исключением тканей головного мозга, селезенки и яичек, а так же стимулирует синтез витамина А в печени. Кроме того, Т 3 снижает концентрацию холестерина и триглицеридов крови, но ускоряет обмен белка, а так же повышает экскрецию кальция с мочой и активирует обмен костной ткани (в большей степени - резорбцию кости). С целью оценки секреторной активности щитовидной железы нами был изучен уровень содержания общего трийодтиронина (Т3общ.) в сыворотке крови цыплят-бройлеров.

Результаты представлены в таблице 3.

В результате исследований установлено достоверное повышение содержания Т3общ на 35-е сутки эксперимента во 2-й, 4-й и 7-й опытных группах. На конец эксперимента содержания Т3общ достоверно было больше в крови цыплят 4-й, 5-й, 6-й и 7-й опытных групп.

Таблица 3. Содержание общего трийодтиронина (Т3 общ.) в сыворотке крови подопытных цыплят-бройлеров, нмоль/л (М±m, n=6: 3 и 3) Группа Возраст, 1 2 3 4 5 6 сутки Контрольная Опытная опытная опытная опытная опытная опытная опытная 1 1,82±0, 1,96 1,92 2,79 2,05 2,85 2,42 2,77 2, ±0,17 ±0,14 ±0,22* ±0,14 ±0,30* ±0,36 ±0,47 ±0,26* 2,03 2,18 2,86 2,51 2,79 2,78 2,87 2, ±0,32 ±0,33 ±0,24 ±0,42 ±0,10* ±0,11* ±0,12* ±0,23* Важным показателем проявления физиологического действия тиреоидных гормонов на организм является отношение концентраций тироксина и трийодтиронина в крови. На протяжении опыта наблюдалась тенденция к понижению данного показателя у птиц во всех группах, причем во всех опытных группах этот показатель был ниже чем в контроле, за исключением 3-й опытной группы в возрасте 35 суток, где цыплята-бройлеры дополнительно получали селен (таблица 4).

Таблица 4. Соотношение концентраций тироксина и трийодтиронина при введении в рацион селена, йода и лактоамиловорина Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Группа Возраст, 1 2 3 4 5 6 сутки Контрольная Опытная опытная опытная опытная опытная опытная опытная 1 17, 35 18,57 17,71 16,20 20,88 16,18 17,03 15,99 16, 42 18,47 16,10 15,73 17,89 15,77 17,01 16,73 16, Чем ниже величина соотношения Т 4 :Т 3, тем выше конверсия тироксина в трийодтиронин, осуществляемая с помощью ферментов дейодиназ (периферическое монодейодирование Т4.

Анализируя результаты собственных исследований по определению секреторной активности щитовидной железы цыплят-бройлеров, можно сделать вывод: скармливание птице селена, йода, пробиотика и их сочетаний обеспечивает оптимальную секреторную активность щитовидной железы, что обусловливает более интенсивный уровень обмена веществ, следовательно, и высокие продуктивные качества цыплят-бройлеров.

Вероятно, скармливание комплекса данных препаратов обеспечивает повышение функциональной активности щитовидной железы и интенсивности обменных процессов в организме подопытной птицы.

Литература 1. Рассолов С.Н., Еранов А.М. Влияние препаратов йода и селена в комплексе с пробиотиком на воспроизводительную функцию ремонтных свинок // Зоотехния. 2011. № 7. С. 30 – 32.

2. Синюкова Т.В., Никулин В.Н. Повышение биоресурсного потенциала кур – несушек за счет использования комплекса йодида калия и пробиотика лактоамиловорина // Известия ОГАУ. 2008. № 3. С. 157, 158.

3. Пономаренко Ю. Селен и йод в рационах бройлеров // Птицеводство.

2007. № 4. С. 38, 39.

4. Фисинин В.И., Егоров И.А., Околелова Т.М. и др. Кормление сельскохозяйственной птицы. – Сергиев Посад. 2004. 375 с.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ВКЛАД ПОЛИМОРФИЗМА АУТОСОМНЫХ STR ЛОКУСОВ В ФОРМИРОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА У НАСЕЛЕНИЯ РТ Кравцова О.А., Аникеев О.Е., Майкова Е.В., Подольская А.А., Кальчева Е.Ю., Алимова Ф.К., Сунгатуллина Л.М.

К(П)ФУ, КГМУ okravz@rambler.ru Актуальность. Выявление генетических факторов в патогенезе социально значимых мультифакторных заболеваний, к которым относится и ишемическая болезнь сердца (ИБС) и их комплексная ДНК-диагностика является одними из наиболее востребованных технологий в решении существующих социальных проблем.

Однако сложность выявления генетических локусов, формирующих предрасполагающий к тому или иному заболеванию генотип, заключается, прежде всего, в наличии нескольких сотен генов-кандидатов, образующих генные сети, при этом в каждом гене могут существовать несколько значимых генетических вариантов, приводящих к повышенному риску развития того или иного заболевания.

Последние десятилетия в мире проводятся активные исследования по выявлению SNP, маркирующих повышенный риск развития сердечно-сосудистых заболеваний, в том числе и ИБС. В результате этих исследований накоплен обширный объем данных, носящих, зачастую, противоречивый характер, что, в первую очередь, обусловлено генетической гетерогенностью исследуемых современных популяций мира.

Индивидуальный подход, на сегодняшний день, может быть реализован в виде выделения отдельных субпопуляций, имеющих сходную генетическую структуру, внутри одного географического сообщества, для которых и необходимо проведение ассоциативного молекулярно-генетического тестирования. Выделение отдельных, сходных генетически, групп возможно на основе таких популяционно-генетических маркеров, как полиморфизм гипервариабельных участков ядерного генома и митохондриальной ДНК.

Кроме того, сами полиморфные участки могут оказывать определенный вклад в формирование предрасположенности (например, в ряде работ показана ассоциация определенных гаплогрупп мтДНК с риском Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" развития таких заболеваний как болезнь Альцгеймера, ИБС).

Аутосомные STR маркеры, несмотря на их предполагаемую селективную нейтральность, также могут оказывать предрасполагающий эффект в отношении того или иного заболевания, поскольку зачастую они имеют интронную локализацию в генах-кандидатах.

В связи с этим, в данной работе представлены результаты ассоциативных исследований аутосомных микросателлитов, расположенных в некодирующей области функционально активных генов и используемых при ДНК-идентификации личности, с риском развития ИБС у населения РТ.

Материалы и методы. Генотипирование по 6 аутосомным STR-локусам, локализованным в интронных областях генов-кандидатов (CSF1РО, TPOX, HumTH01, LPL, FGA (FIBRA), vWA31А) проведено у человек: группа больных ИБС, состоящая из 140 человек (средний возраст 65,3±11,4 года), сформирована на базе кардиологического отделения БСМП №1 (г. Казань), группа популяционного контроля включала 165 человек, куда вошли пациенты травматологического отделения (средний возраст 59,9±11,7 лет), без признаков хронических заболеваний неинфекционной природы. Как больные, так и лица группы контроля представляли собой смешанную популяцию Татарстана и не состояли друг с другом в кровном родстве. Диагноз заболевания ставили на основании клинических и биохимических исследований.

Генотипирование проводили в монолокусном формате на основе последовательностейпраймеров, находящихся в свободном доступе ( http://www.cstl.nist.gov/strbase ). Разделение продуктов амплификации проводили в 6-8% ПААГ с последующей детекцией в УФ-свете.

Результаты и их обсуждение.Важной характеристикой любого генетического полиморфизма является соответствие частот его аллелей и генотипов равновесию Харди-Вайнберга (РХВ). В нашем исследовании показано, что только 2 маркера (CSF1PO и vWA31A1) соответствуют РХВ в обеих группах, тогда как в группе больных показано отклонение от РХВ по локусам ТН01 им ТРОХ, в группе контроля отклонение от РХВ наблюдается по маркерам FGA и LPL.

Дальнейший анализ показал, что в группе контроля отклонение от РХВ обусловлено дефицитом гетерозигот (что может указывать на генетическую неоднородность исследуемых групп), тогда как для группы больных ИБС ни недостаток, ни избыток гетерозиготных индивидуумов не обнаружен. Полученные результаты могут быть объяснены несколькими причинами: 1) ошибка эксперимента (недостаточно корректное определение генотипов);

2) недостаточный объем выборки;

3) Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" действие отбора в пользу/против определенных аллелей и генотипов.

Ошибки генотипирования исключаются благодаря использованию аллельных лестниц с известным диапазоном аллелей и положительного контроля ПЦР с образцами ДНК с известным генотипом. Размер исследуемых групп имеет решающее значение, особенно при оценке полиморфизма STR-маркеров, и в тоже время нельзя исключить и сцепленностьSTR-локусов с функционально значимыми нуклеотидными заменами в структуре генов.

Дальнейший анализ ассоциации исследуемых STR маркеров показал наличие статистически значимых различий в распределении частот аллелей и генотипов между группой больных и контроля по локусам LPL, TPOX, vWA31A1 и TH01.

Анализ ассоциации исследуемых STR маркеров показал наличие статистически значимых различий в распределении частот аллелей и генотипов между группой больных и контроля по 4 локусам: LPL (локализован в 6-м интроне гена липопротеинлипазы, осуществляющей гидролиз триглицеролов в составе хиломикронов), TPOX (10-й интрон гена пероксидазы, регулирующей формирование адаптационных процессов), ТН01 (1-й интрон гена тирозингидроксилазы, которая блокирует превращение тирозина в норадреналин) и vWA31A(40-й интрон гена фактора фон Виллебрандта, кодирующего плазменный гликопротеин, играющий центральную роль в гемостазе).

Различия в распределении аллелей и генотипов по микросателлитному локусу LPL обусловлены преобладанием генотипа 10/10 в группе условно здоровых лиц (контроля) на фоне повышения генотипов 11/12 и 12/12 в группе больных ИБС (р0,05), что может свидетельствовать о предрасполагающей роли данных генотипов в патогенезе ИБС.

При сравнительном анализе частот генотипов по полиморфному локусу ТРОХ в группе контроля обнаружено преобладание гомозиготного генотипа 8/8, тогда как в группе больных отмечается достоверное увеличение генотипов 9/10 и 10/11 (р0,05), которые могут маркировать повышение риска развития ИБС в популяции РТ.

При сравнительной оценке частот встречаемости генотипов по полиморфному микросателлиту vWA31A, который находится в интронной области одного из генов, продукты которых участвуют в системе свертывания крови, показано, что у больных ИБС отмечается увеличение частоты генотипов, содержащих аллель 18: 14/18, 15/18, 18/18 (ОШ=2,79, 3,58 и 2,13 соответственно), тогда как в группе контроля отмечено преобладание генотипов 16/17, 16/18 и 17/19, возможно, играющих Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" протективную, в отношении ИБС, роль (p0,05).

Различия в распределении генотипов полиморфного маркера ТН обусловлены повышением частоты генотипов 6/8 и 7/8 в группе больных ИБС, в то время как в группе контроля обнаружено преобладание других генотипов: 7/9.3 и 8/9.3 (p0,05).

Необходимо отметить, что несмотря на отсутствие статистически значимых различий в распределении частот аллелей и генотипов по полиморфному локусу FGA, который находится в гене -цепи фибриногена, показана тенденция к увеличению частоты встречаемости генотипов 20/21 и 19/22 в группе больных ИБС.

Так как одним из факторов риска развития атеросклеротического поражения сосудов, лежащего в основе ИБС, является изменение спектра липидного профиля, нами проведена оценка влияния генетического полиморфизма STR–локусов на вариабельность основных показателей липидного спектра сыворотки крови, а именно холестерина, триглицеридов, липопротеинов высокой и низкой плотности. Однако, при сравнительном анализе значений медиан для этих показателей в зависимости от генотипа, статистически значимых различий ни для одного их анализируемых параметров в данном исследовании не обнаружено.

Приведенные в рамках данного исследования результаты показывают, что для оценки риска развития того или иного МФЗ необходимо выявление не только функционально значимых однонуклеотидных (SNP) и инсерционно-делеционных полиморфизмов в структурной части генов кандидатов, но и анализ ассоциации маркеров, локализованных в некодирующей части гена, в частности, аутосомных STR-маркеров, которые вносят дополнительную информацию в формировании генетической предрасположенности к мультифакторным патологиям.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ИССЛЕДОВАНИЕ АКТИВАЦИИ СИНТЕЗА МЕХАНО-РОСТОВОГО ФАКТОРА МИОФИБРИЛЛЯРНЫМИ БЕЛКАМИ Кравченко И.В., Фуралёв В.А., Попов В.О.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии им. А.Н.Баха Российской академии наук ivkravchenko@yandex.ru Введение. Механо-ростовой фактор (МРФ) представляет собой белковый продукт, транслируемый с одной из изоформ мРНК инсулино-подобного фактора роста 1 (ИФР-1), образующейся в результате альтернативного сплайсинга. МРФ стимулирует пролиферацию и миграцию миобластов, а также защищает их от апоптоза. С-концевой пептид, получающийся при разрезании МРФ, не имеет гомологии по первичной структуре со зрелым ИФР-1 и стимулирует деление миобластов через другие, пока не идентифицированные рецепторы. В научной литературе широко обсуждаются возможности терапевтического использования МРФ для лечения различных миодистрофий и мышечных дисфункций пожилого возраста [1]. В процессе регенерации мышцы после повреждений, а также при механической нагрузке экспрессия МРФ резко возрастает, однако механизм этого явления до сих пор недостаточно изучен. В нашей лаборатории было обнаружено, что миофибриллярные белки (титин, миомезин и миозин-связывающий белок С), освобождающиеся из поврежденной мышечной ткани, стимулируют экспрессию МРФ в неповрежденных миобластах и миотубах, причем этот эффект опосредуется сигнальной системой цАМФ [2]. Однако остались неизученными временные и концентрационные зависимости активации синтеза МРФ и цАМФ под действием миофибриллярных белков.

Целью данной работы было изучение кинетики активации синтеза цАМФ, мРНК МРФ и белка МРФ миофибриллярными белками в культуре мышечных клеток, а также исследование зависимости активации от концентрации миофибриллярных белков.

Методы. Для изучения индукции синтеза цАМФ использовали набор для определения концентрации цАМФ фирмы Sigma. Для анализа экспрессии мРНК МРФ методом ПЦР-РВ использовали следующие праймеры: МРФ - прямой 5`-TTCAGTTCGTGTGTGGACCG-3`, обратный 5`- TGTTTGTCGATAGGGACGG-3` [3];

ГАФД – прямой 5` TGGCAAAGTGGAGATTGTTGCC-3`, обратный - 5`- AAGATGGTGATGGGCTTCCCG Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" -3` [4]. Для определения концентрации белка МРФ использовали иммуноферментную сэндвич-тест-систему с усилением сигнала на основе моноклональных антител [5].

Результаты и их обсуждение. В ходе изучения динамики активации синтеза цАМФ миофибриллярными белками было обнаружено, что наиболее быстрый эффект наблюдается при обработке клеток миомезином: уже через 30 минут содержание цАМФ в миобластах мыши возрастало от 3,8 до 68 пикомоль на мг клеточного белка. Добавление титина и миозин-связывающего белка С в течение столь короткого промежутка времени ещё не приводило к активации синтеза данного вторичного мессенджера. В то же время обработка в течение двух часов вызвала существенную активацию синтеза цАМФ всеми тремя миофибриллярными белками. Так, при обработке миомезином содержание цАМФ возросло до 85 пикомоль на мг клеточного белка, при обработке миозин-связывающим белком С – до 70 пкмоль на мг белка, а при обработке титином – до 82 пкмоль на мг белка, при этом обработка клеток непосредственным активатором аденилатциклазы форсколином повышала уровень цАМФ до 115 пкмоль на мг белка.

При изучении динамики стимуляции экспрессии мРНК МРФ также было обнаружено, что миомезин активирует синтез данной мРНК быстрее, чем два других миофибриллярных белка. Так, через 5 часов после добавления миомезина уровень мРНК МРФ повысился в 2,1 раза, тогда как добавление титина и миозин-связывающего белка С за это время ещё не вызвало активации синтеза этой мРНК. Через 12 часов после добавления миомезина уровень мРНК МРФ повысился в 3,2 раза, после добавления миозин-связывающего белка С – в 2,2 раза, после добавления титина – в 1,9 раза. Через 24 часа после добавления миомезина уровень мРНК МРФ повысился в 3,8 раза, после добавления миозин-связывающего белка С – в 4,1 раза, после добавления титина титина – в 3,5 раза.

Аналогичная зависимость была обнаружена также при изучении динамики стимуляции экспрессии белка МРФ. Через 12 часов после добавления миомезина содержание белка МРФ в лизатах миобластов достигало 64 пикограмм на мг клеточного белка, тогда как после обработки титином и миозин-связывающим белком С в течение столь короткого промежутка времени белок МРФ ещё не детектировался в лизатах клеток. Через 24 часа после добавления миомезина содержание белка МРФ в лизатах миобластов достигло 129 пкг на мг белка, после добавления миозин-связывающего белка С - 96 пкг на мг белка, после добавления титина – 72 пкг на мг белка. Наконец, через 48 часов после Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" добавления миомезина содержание белка МРФ достигло 152 пкг на мг белка, после добавления миозин-связывающего белка С - 143 пкг на мг белка, после добавления титина – 131 пкг на мг белка.

При исследовании зависимости активации синтеза МРФ от концентрации белков-индукторов было выявлено, что миомезин оказывает статистически достоверное действие в концентрации, более чем на порядок меньшей, чем два остальных миофибриллярных белка.

Так, при обработке клеток миомезином в концентрации 100 нанограмм в мл уровень мРНК МРФ повысился в 1,7 раза, а содержание белка МРФ достигло 39 пикограмм на мг общего белка. В то же время миозин-связывающий белок С и титин начинают вызывать статистически достоверные эффекты лишь в концентрации 2 микрограмма в мл. При этом уровень мРНК МРФ повысился в 1,9 раза при обработке миозин-связывающим белков С и в 2 раза при обработке титином, а содержание белка МРФ достигло 42 и 45 пикограмм на мг общего белка, соответственно.

Рецепторы миофибриллярных белков на поверхности мышечных клеток, отвечающие за стимуляцию экспрессии МРФ, до сих пор не выделены и не идентифицированы. Миофибриллярные белки титин, миомезин и миозин-связывающий белок С содержат а своем составе различное количество фибронектиновых доменов и иммуноглобулиноподобных доменов, которые, по-видимому, и опосредуют их МРФ-индуцирующую активность. До сих пор не установлено, какие именно домены этих трех белков связываются с поверхностными рецепторами. Полученные результаты свидетельствуют в пользу того, что миомезин с одной стороны, и титин и миозин-связывающий белок С с другой стороны, действуют через различные рецепторы, и возможно, это действие осуществляется различными доменами.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант 12-04-01090-а) Литература 1. Goldspink G, Wessner B, Bachl N. (2008) Curr. Opin. Pharmacol. 8, 352-357.

2. Kravchenko I, Furalyov V, Popov V. (2012) Mol and cell bioch. 363, 347-355.

3. De Bari C et al. (2003) J Cell Biol. 160, 909-918.

4. Mills JC et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98, 13687–13692.

5. Kravchenko I, Furalyov V, Khotchenkov V, Popov V. (2006) Hybridoma. 25, 300- Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ОПТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СЫВОРОТКИ КРОВИ В РАННЕЙ ДИАГНОСТИКЕ РАКА КИШЕЧНИКА Кручинин В. Н., Рыхлицкий С. В., Кручинина М. В., Курилович С. А., Воевода М. И., Пельтек С. Е., Шеховцов С. В., Володин В. А., Стариков А.

В.

Институт физики полупроводников им. А. В. Ржанова СО РАН, г.

Новосибирск, Россия Институт терапии СО РАМН, г. Новосибирск, Россия, Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск, Россия, ГБУ ЗО НСО Новосибирский областной онкологический диспансер kruchmargo@yandex.ru С помощью спектроскопии комбинационного рассеяния света (КР) проведено исследование образцов сыворотки крови здоровых людей и лиц, страдающих раком кишечника. Для тех же образцов с помощью метода исследования отражения поляризованного света вблизи поверхностного плазмонного резонанса (ППР) изучена кинетика связывания белка СД24 образцов сыворотки крови с антителами, предварительно иммобилизованными на поверхности биочипа, в целях ранней диагностики рака кишечника [1, 2].

Обследованы 14 человек (8 женщин и 6 мужчин) в возрасте от 49 до 72 лет с раком кишечника, шестеро из них с опухолью в терминальной стадии (Т3-4) после проведенной терапии (4- после химиолучевого лечения, 2 – после комбинированной терапии). Из 14 пациентов у 8-ми больных диагностирован рак прямой кишки, у 4-х – рак анального канала, у 2-х больных выявлены первично множественные опухоли (рак сигмовидной и прямой кишки). У 10-ти пациентов опухоль диагностирована в поздних стадиях (Т3-4), у 4-х - в стадии Т2. Наличие метастазов (в область печени) выявлено у двух пациентов, у остальных больных метастазирование не было выявлено. Степень вовлеченности лимфоузлов у большей части пациентов была не определена Nх, у четверых она соответствовала N1, у одного N0.

Всем пациентам были выполнены общеклинические, биохимические исследования, проведены ренгеноскопия, колоноскопия с биопсией, выполнено УЗ-исследование, у 8-ми - МРТ органов брюшной полости.

Группу сравнения составили 12 человек (от 48 до 69 лет), у которых по данным биохимических и инструментальных методов исследования не Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" было выявлено заболеваний внутренних органов, онкологической патологии.

Детекцию белка СД24 в сыворотках крови, взятых у здоровых людей и больных раком кишечника, проводили при помощи прибора ProteOn XPR36 (BioRad). Антитела к белку СД24 человека ковалентно связывали с поверхностью сенсорного чипа GLC. 0,2 мкг мышиных моноклональных антител к белку СД24 человека наносили в 230 мкл ацетатного буфера (pH 5.0). Детекцию белка СД24 проводили в буфере PBST (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20, pH 7.4). Для скрининга были выбраны концентрации 1/50 и 1/250, при которых наиболее четко выявляются различия между образцами. Концентрация белка СД24 в сыворотке пропорциональна уровню связывания на полученных кривых;

в исследованных нами образцах концентрации СД у здоровых людей и онкологических больных отличаются почти в 10 раз (см. рис. 1). У больных раком кишечника величина связывания антител достигала ~250 RU (1RU = 1 пг белка/1 мм2).

Спектры КР жидких сывороток крови записывались на спектрометре T64000 (Horiba Jobin Yvon) в диапазоне длин волн 700-1700 см -1, для возбуждения использовалась линия Ar+ лазера с длиной волны 514.5 нм.

Площади основных пиков (1005-1520 см-1) Raman спектров оказались достоверно ниже у больных раком кишечника по сравнению со здоровыми людьми (р0,006-0,045), коррелируя со стадией процесса (r=-0,82, p0,002) и проведенной противоопухолевой терапией (r=0,905, p0,013) (см. рис. 2).

Таким образом, выявлены достоверные различия при взаимодействии образцов сывороток крови у больных раком кишечника и лиц группы контроля, что позволяет рассматривать оптические методы как перспективные в диагностике ранних стадий заболевания при установлении корреляций этих показателей со стадией заболевания, вовлеченностью лимфоузлов, наличием метастазов. Использование совокупности оптических методов исследования крови перспективно для диагностики данной онкологической патологии.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Рис. 1. Типичные сенсограммы связывания и распада комплексов при взаимодействии белка СД24 сыворотки крови и антител у больных раком кишечника (кривые 1, 2) и лиц группы контроля (кривые 3, 4) при разбавлении 1:50 (1, 3) и 1:250 (2, 4). Стрелками показаны моменты подачи раствора сыворотки крови и его удаления.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Рис. 2. Типичные спектры комбинационного рассеяния света жидких сывороток крови больных раком кишечника (1) и лиц группы контроля (2).

Литература 1. Воевода М. И., Кручинина М. В., Курилович С. А., Кручинин В. Н., Рыхлицкий С. В., Володин В. А., Пельтек С. Е., Кобзев В. Ф.

Использование оптических методов в диагностике онкологических заболеваний // Материалы VIII Международной научно-практической конференции «Дни науки», Прага, 2012, С.31-33.

2. Kruchinina M. V., Voevoda M. I., Peltek S. E., Kurilovich S. A., Kruchinin V.

N., Spesivtsev E. V., Rykhlitskii S. V., Volodin V. A., Generalov V. M., Starikov A. V. New aspects of optical methods for the study of blood in diagnosis of colorectal cancer // Abstracts of International conference on postgenomic technology for biomedicine, 25-29 june, Novosibirsk, 2012, P.154.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" ИССЛЕДОВАНИЕ ПИЩЕВОЙ ЦЕННОСТИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПЕКТИНОСОДЕРЖАЩИХ НАПИТКОВ Лимарева Н.С.

ФГАОУ ВПО «Северо-Кавказский федеральный университет» филиал в г.

Пятигорске nlimareva@yandex.ru Пищевой рацион населения России характеризуется рядом негативных тенденций, основной из которых является нарушение структуры питания: низкий уровень потребления витаминов, ряда минеральных веществ, пищевых волокон и растительных жиров на фоне снижения среднедушевого потребления энергии. Дополнительным фактором, увеличивающим риск возникновения заболеваний, является повсеместное ухудшение экологического состояния окружающей среды [1]. Многолетний практический опыт свидетельствует о том, что потребление продуктов питания и напитков, содержащих полезные для здоровья вещества может стать эффективным средством укрепления защитных функций организма человека при условии, что разработка нового функционального продукта включает обоснованный выбор ингредиентов, формирующий его состав и свойства [2].

Пектиновые вещества определяют как группу гетерополисахаридов сложного строения, основу которых составляют молекулы Д-галактуроновой кислоты, гликозидно связанные между собой a - 1®4 – связями в полигалактуроновую кислоту[3]. Одним из важнейших свойств пектиновых веществ для организации лечебно-профилактического питания является их комплексообразующая способность, основанная на взаимодействии молекулы пектина с ионами тяжелых и радиоактивных металлов. Это свойство дает основание рекомендовать пектин для включения в рацион питания лиц, находящихся в среде, загрязненной радионуклидами и имеющих контакт с тяжелыми металлами. Для организма человека особенно опасны долгоживущие изотопы цезия (Сs ), стронция (Sr90), иттрия (Ir91) и др. Экскреция пектина по отношению к введенной дозе Сs137 составляет 8,4 %, стронция – 52,6 [3].

В пищевой промышленности пектиновые вещества применяют в основном для производства фруктовых консервов, желе и джемов.

Однако обеспечить потребление суточной профилактической дозы пектина за счет изделий с высоким содержанием сахара невозможно.

Интернет-конференция "Актуальные проблемы биохимии" Необходимо расширить ассортимент пектиносодержащих пищевых изделий за счет продуктов потребляемых ежедневно.

С целью расширения ассортимента пектиносодержащих функциональных напитков были проведены исследования по конструированию напитков на основе томатного сока. В результате разработаны следующие напитки – «Томатный», «Молодость с пектином», «Огуречный пектиновый», «Особый с пектином», «Ароматный пектиновый». Для разработки рецептур напитков функционального назначения в качестве основных компонентов использовали томатный сок и пектинопродукты – свекловичный и яблочный пектиновый концентраты. В качестве дополнительного сырья использовали пюре из красного перца, огуречный сок, пюре из кабачков, сельдерей.

Содержание пектиновых веществ в разработанных напитках на основе яблочного пектинового концентрата составляет от 2,12 до 2,35 %, в напитках на основе свекловичного концентрата – от 1,53 до 1,68 %.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 9 |
 





<

 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.